老年子宮內(nèi)膜樣腺癌癌組織神經(jīng)纖毛蛋白2、E盒結(jié)合鋅指蛋白1對血管生成的作用

魏琳琳 王 蕊 關(guān)淑梅

(遼寧醫(yī)學(xué)院附屬第一醫(yī)院婦產(chǎn)科，遼寧 錦州 121001)

子宮內(nèi)膜樣腺癌在進(jìn)展中迅速增大，并出現(xiàn)脈管轉(zhuǎn)移的生物學(xué)特征與腫瘤的血管生成密切相關(guān)。神經(jīng)纖毛蛋白(NRP)2是內(nèi)皮細(xì)胞表面的一種受體，與血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)結(jié)合后對血管內(nèi)皮細(xì)胞的新生有重要作用〔1〕。轉(zhuǎn)錄因子E盒結(jié)合鋅指蛋白(ZEB)1在多種腫瘤細(xì)胞系和實(shí)體腫瘤中均有表達(dá)，可能對病變進(jìn)展及脈管的形成有一定價(jià)值〔2〕。白細(xì)胞分化抗原(CD)34被認(rèn)為是血管的重要標(biāo)志物，其特異性強(qiáng)〔3〕。本研究檢測老年患者子宮內(nèi)膜樣腺癌組織中NRP2、ZEB-1的表達(dá)，關(guān)注二者對CD34陽性的血管生成作用。

1 材料與方法

1.1臨床資料 我院手術(shù)的老年子宮內(nèi)膜樣腺癌患者133例為研究組，樣本均經(jīng)病理醫(yī)師再次確診，并符合世界衛(wèi)生組織(WHO)中的診斷標(biāo)準(zhǔn)。年齡60～80(平均68.5)歲。術(shù)前均未進(jìn)行放療和化療。70例老年子宮脫垂或子宮肌瘤患者行子宮全切術(shù)后的宮頸組織作為對照組，年齡60～79(平均68.8)歲。兩組一般臨床特征無差別。

1.2NRP2、ZEB-1和CD34蛋白的檢測 選擇NRP2、ZEB-1和CD34的濃縮液，正式檢測前進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)，選擇染色強(qiáng)度最理想、背景最干凈的配比濃度進(jìn)行正式實(shí)驗(yàn)。NRP2、ZEB-1和CD34正式實(shí)驗(yàn)的檢測應(yīng)用免疫組化SP法，采用DAB染色。操作由病理科主管技師完成，努力減少誤差。

1.3NRP2、ZEB-1和CD34蛋白表達(dá)判定 CD34以血管內(nèi)皮細(xì)胞質(zhì)染成棕黃色進(jìn)行判斷，認(rèn)定CD34連續(xù)的細(xì)胞叢或分支為新生血管，選擇5個(gè)密度最高的區(qū)域(400倍)計(jì)數(shù)，取平均值計(jì)為微血管密度(MCD)。NRP2以細(xì)胞質(zhì)和(或)膜上棕黃顆粒為陽性反應(yīng)細(xì)胞，ZEB1以細(xì)胞核棕黃色顆粒為陽性細(xì)胞，NRP2、ZEB-1均計(jì)數(shù)5個(gè)400倍視野的細(xì)胞總數(shù)，計(jì)算陽性率。NRP2和ZEB-1以陽性細(xì)胞≥25%為陽性，<25%為陰性。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SAS6.12軟件進(jìn)行χ2檢驗(yàn)和線性相關(guān)性分析。

2 結(jié) 果

2.1兩組NRP2、ZEB-1和MVD的比較 研究組NRP2、ZEB-1陽性表達(dá)率明顯高于對照組(P均<0.000 1)。研究組MVD值明顯高于對照組(P<0.000 1)。見表1。

2.2研究組NRP2、ZEB-1和MVD與臨床特征的關(guān)系 研究組NRP2、ZEB-1的表達(dá)和MVD均與腫瘤TNM分期、浸潤、脈管累犯和Ki67指數(shù)密切相關(guān)。見表2。

表1 兩組NRP2、ZEB-1陽性表達(dá)和MVD比較〔n(%)〕

2.3研究組NRP2、ZEB-1和MVD相關(guān)性分析 研究組NRP2和ZEB-1(r=0.43,P=0.046 5)、NRP2和MVD(r=0.51,P=0.021 5)、ZEB-1和MVD(r=0.49,P=0.014 2)均正相關(guān)。

表2 研究組中NRP2、ZEB-1陽性表達(dá)和MVD與臨床特征的關(guān)系〔n(%)〕

3 討 論

腫瘤的生長依賴于血管的生成，尤其是惡性腫瘤。此時(shí)腫瘤中癌基因和血管生成對促進(jìn)腫瘤進(jìn)展有重要價(jià)值。老年子宮內(nèi)膜樣腺癌為富于血管的惡性腫瘤，當(dāng)腫瘤生長時(shí)，血管新生快，可以為腫瘤細(xì)胞提供更加豐富的營養(yǎng)和氧。在腫瘤血管形成過程中，血管生成因子的作用是主要的，當(dāng)此類蛋白高表達(dá)時(shí)，表現(xiàn)為對腫瘤血管生成作用明顯，主要是促進(jìn)以CD31、CD34和CD105為主的血管內(nèi)皮增殖，此時(shí)腫瘤間質(zhì)血管生成多，使腫瘤的營養(yǎng)豐富，氧供豐富，腫瘤生成和代謝快，侵襲能力增加，轉(zhuǎn)移潛能增強(qiáng)。目前研究中標(biāo)記血管的抗體是CD34，其特異性強(qiáng)，應(yīng)用較多。

NRP2在正常細(xì)胞中表達(dá)較少，但是其在腫瘤細(xì)胞中表達(dá)率明顯升高，其表達(dá)不僅分布于腫瘤細(xì)胞中，還表達(dá)于部分血管內(nèi)皮細(xì)胞中，因此認(rèn)為NRP2與血管生成密切相關(guān)，也有學(xué)者〔4,5〕認(rèn)為NRP2對血管生成的作用是通過VEGF介導(dǎo)的。近來也有學(xué)者〔6～8〕認(rèn)為NRP2在促進(jìn)腫瘤血管生成過程中還可以促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的遷移和播散。趙琴月等〔9〕發(fā)現(xiàn)NRP2在大腸癌中高表達(dá)，認(rèn)為NRP2作為VEGF-C的受體之一，在腫瘤的血管、淋巴管形成中起重要作用，同時(shí)NRP2可能協(xié)同VEGF在腫瘤的發(fā)展、浸潤和轉(zhuǎn)移過程中發(fā)揮重要作用。ZEB-1與上皮和間質(zhì)的轉(zhuǎn)化有關(guān)，其表達(dá)常常在腫瘤細(xì)胞巢的周邊，有時(shí)可以觀察到其表達(dá)在腫瘤細(xì)胞與間質(zhì)接合部位是最強(qiáng)的〔10〕。當(dāng)ZEB-1表達(dá)升高時(shí)，腫瘤的生長加速，腫瘤細(xì)胞的增殖活躍，侵襲能力增強(qiáng)〔11〕。ZEB-1具有血管生成的作用，可能是通過自分泌和旁分泌的形式刺激血管內(nèi)皮細(xì)胞的增生實(shí)現(xiàn)的〔12,13〕。CD34在標(biāo)記血管生成中應(yīng)用廣泛，其敏感性和特異性均明顯高于F8因子、CD31等其他同類標(biāo)記物。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示NRP2、ZEB-1可以有效促進(jìn)腫瘤的發(fā)生。NRP2、ZEB-1的促癌作用類似癌基因。而腫瘤在生長過程中依賴血管的生成，此時(shí)可以為腫瘤細(xì)胞的增殖提供充足的氧和營養(yǎng)。NRP2、ZEB-1和MVD均參與腫瘤的進(jìn)展，NRP2、ZEB-1和MVD參與腫瘤的脈管侵犯、浸潤性生長和細(xì)胞的增殖〔14〕。由于上述生物學(xué)指標(biāo)是臨床和病理學(xué)判斷患者預(yù)后的重要指標(biāo)，因此聯(lián)合檢測NRP2、ZEB-1和MVD的表達(dá)也在一定程度上提示患者的預(yù)后。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示NRP2和ZEB-1與MVD之間有較強(qiáng)的相關(guān)性，因此NRP2、ZEB-1均可以有效地促進(jìn)CD34陽性的血管生成。NRP2和ZEB-1均能引起腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生多種多樣的血管生成的信號(hào)或因子，此時(shí)腫瘤血管伸長，管腔擴(kuò)張。也有觀點(diǎn)〔1,13〕認(rèn)為NRP2、ZEB-1在血管生成過程中可以通過VEGF進(jìn)行中介，并通過內(nèi)皮細(xì)胞前體細(xì)胞分化后形成內(nèi)皮依賴性血管，此時(shí)腫瘤體積增大的速度明顯加快。NRP2、ZEB-1可以引起腫瘤細(xì)胞分泌多種成血管信號(hào)，腫瘤血管可以由周圍正常組織的固有血管向腫瘤組織向內(nèi)延伸而成，也可以通過內(nèi)皮細(xì)胞前體細(xì)胞分化后形成內(nèi)皮依賴性血管，此時(shí)血管生成，腫瘤細(xì)胞生長加速，腫瘤體積增大。

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