外周血SOCS-1的表達及與慢性丙型肝炎自身免疫現(xiàn)象的關(guān)系

盧娟娟 杜國義 張惠琴 張麗萍 楊玉霞 李文凡

(甘肅省人民醫(yī)院消化科，甘肅 蘭州 730000)

丙型肝炎病毒(HCV)感染后的發(fā)病機制尚不十分明確，有研究表明很多慢性丙型肝炎患者存在自身免疫現(xiàn)象，而這種自身免疫現(xiàn)象與肝細胞損害及病毒慢性持續(xù)感染有關(guān)〔1〕。在體和離體實驗表明HCV感染可導致機體B細胞和T細胞功能失調(diào)，T淋巴細胞之間相互協(xié)調(diào)或(及)制約功能遭到破壞已有報道〔2〕，但作為產(chǎn)生抗體的B淋巴細胞功能有無改變，目前報道不多。本文通過研究HCV感染者體內(nèi)外周血細胞因子信號傳導抑制因子(SOCS)-1與慢性丙型肝炎自身免疫現(xiàn)象的關(guān)系，了解B細胞的功能紊亂與病情發(fā)展的關(guān)系，進一步探討丙型肝炎的發(fā)病機制。

1 材料與方法

1.1對象 2010年6月至2012 年12月在我院消化內(nèi)科就診的 HCV 感染者78例，均符合中華醫(yī)學會肝病學分會 2004年制訂的《丙型肝炎防治指南》，病程超過6個月，血清HCV RNA(RT-PCR法)和(或)抗HCV(ELISA法)陽性，排除其他病毒感染、自身免疫性肝炎、酒精性肝病和代謝性肝病等，近3個月內(nèi)未使用抗病毒藥物及免疫抑制劑。男48例, 女30例, 年齡25～64歲〔平均(42.3±6)〕歲,病例組又分為慢性丙肝有自身免疫現(xiàn)象組和慢性丙肝無自身免疫現(xiàn)象組，選擇40 例健康人作為健康對照組, 無急慢性心、肝、腎等疾病,兩組年齡、性別無統(tǒng)計學差異(P>0.05)。

1.2方法

1.2.1檢測項目 取靜脈血5 ml，分別檢測肝功能、HCV RNA、免疫球蛋白、肝纖維化4項及自身抗體(血清抗核抗體、抗平滑肌抗體、抗線粒體抗體、抗可溶性肝抗原/抗肝胰抗原、抗肝腎微粒體抗體-1和抗肝細胞胞質(zhì)抗體-1)。

1.2.2外周血單個核細胞(PBMC)SOCS-1 mRNA水平測定 采集外周靜脈血5 ml，進行PBMC分離。制備總RNA，所得RNA置于-70℃待用。采用RT-PCR方法，以β-actin為內(nèi)參照，SOCS-1和β-actin引物序列參照文獻〔3〕方法以及GenBank中查出的相應(yīng)序列，根據(jù)引物設(shè)計原則用Primer Express 2.0設(shè)計軟件設(shè)計引物序列:SOCS-1，正義引物：5'-ACC CCT TCT CAC CTC TTG A-3'，反義：5'-ATA AAG CCA GAG ACC CTC C-3'，擴增片段長度184 bp,β-actin正義引物：5'-GTG GAC ATC CGC AAA GAC-3'，反義：5'-AGT TGC GTT ACA CCC TTT C-3'，擴增片段長度320 bp。凝膠成像系統(tǒng)分析條帶吸光度。表達強度=目標基因A值/β-actin A值。

2 結(jié) 果

2.1HBV感染組自身免疫紊亂情況 78例HBV感染組有自身免疫現(xiàn)象者32例(41%)，自身抗體陽性27例，其中抗核抗體陽性21例，抗平滑肌抗體陽性5例，抗肝細胞胞質(zhì)抗體陽性2例，抗肝腎微粒體抗體陽性2例，抗線粒體抗體及抗可溶性肝抗原/抗肝胰抗原陽性0例。合并肝外自身免疫疾病7例，其中糖尿病4例，甲狀腺功能亢進2例，類風濕關(guān)節(jié)炎1例。

2.2HCV 感染者有自身免疫現(xiàn)象、無自身免疫現(xiàn)象及健康對照組SOCS-1mRNA 表達水平的比較 三組間SOCS-1 mRNA 表達水平差異有統(tǒng)計學意義(F=6.500，P=0.002)。HCV 感染有自身免疫現(xiàn)象組SOCS-1 mRNA 表達水平(0.38±0.44)低于其他兩組(LSD-t=0.209,0.203；P=0.001,0.042)，無自身免疫現(xiàn)象組SOCS-1 mRNA 表達水平(0.59±0.37)雖低于健康對照組(0.76±0.52)，但無顯著差異(LSD-t=0.190，P=0.079)。

2.3SOCS-1 mRNA 表達水平與其他指標的相關(guān)性 SOCS-1 mRNA 表達水平與谷丙轉(zhuǎn)氨酸(ALT)、HCV RNA、IgG、IgA、IgM無相關(guān)性；與透明質(zhì)酸(HA)、Ⅲ型前膠原(PcⅢ)、層黏蛋白(LN)有相關(guān)性，見表1。

表1 SOCS-1 mRNA 表達水平與其他指標的相關(guān)性分析

3 討 論

已有大量研究表明HCV感染患者存在自身免疫現(xiàn)象，包括產(chǎn)生自身抗體及合并肝外自身免疫性疾病，這種自身免疫現(xiàn)象可能與肝細胞損害及病毒的慢性持續(xù)感染有關(guān)，15%～48.8%的HCV感染患者可以檢測到自身抗體；HCV感染患者還可伴有混合性冷球蛋白血癥、腎小球腎炎、遲發(fā)性皮膚卟琳癥、干燥綜合征、自身免疫性甲狀腺炎、特發(fā)性血小板減少癥等自身免疫性疾病〔4，5〕。自身抗體的產(chǎn)生可能系HCV誘導機體自身免疫紊亂所致，特別是誘導B淋巴細胞增殖，而研究表明SOCS-1表達的抑制與B淋巴細胞增殖有關(guān)〔2〕。

SOCS-1具有抑制Janus激酶-信號轉(zhuǎn)導子與轉(zhuǎn)錄激活子(JAK-STAT)信號轉(zhuǎn)導通路的作用，可抑制B細胞的活化和增殖〔2〕，在缺失SOCS-1或敲除SOCS-1基因情況下大量的DC遷移到胸腺和脾臟中，并在其表面表達高水平的B淋巴細胞刺激因子Blys和分裂誘導配體(ApRIL),使體內(nèi)B細胞的胞體異常增大和產(chǎn)生自身反應(yīng)性抗體〔6〕。SOCS-1是重要的肝臟炎性抑制因子，通過調(diào)節(jié)細胞因子和Toll樣受體誘發(fā)反應(yīng)抑制肝臟炎性；SOCS-1對調(diào)節(jié)樹突細胞的功能、抑制全身炎性反應(yīng)和系統(tǒng)自身免疫有重要的調(diào)控作用〔6〕。本研究結(jié)果表明SOCS-1表達抑制可能是刺激機體產(chǎn)生自身免疫現(xiàn)象的原因，但是血清SOCS-1 mRNA水平與肝功能無相關(guān)性，這可能是因為病例數(shù)目偏少，也可能因為肝細胞的損害由多種因素所致，不僅與自身免疫因素有關(guān)；血清SOCS-1 mRNA水平與血清肝纖維化指標有相關(guān)性,折射出與HCV感染慢性化及預(yù)后密切相關(guān),這可能因為SOCS-1表達抑制，可以增加組織對炎癥反應(yīng)的易感性，而免疫反應(yīng)、炎癥影響肝病的慢性化和纖維化進展速度〔11〕。

4 參考文獻

1Paroli M,Iannucci G,Accapezzato D.Hepatitis C virus infection and autoimmune diseases〔J〕.Int J Gen Med,2012;5:903-7.

2Moorman J,Dong ZP,Ni L,etal.Abnormal B-cell activation associated with TALL-1 over-expression and SOCS-1 suppression during chronic hepatitis C virus infection〔J〕. Immunology,2009;128(2):227-35.

3Boursier J,Louver A.Liver fibrogenesis and genetic factors〔J〕.Clin Res Hepatol Gastroenterol,2011;35(1):S3-9.

4Imanaka K,Tamura S,Fukui K,etal.Enhanced expression of suppressor of cytokine signalling-1 in the liver of chronic hepatitis C: possible involvement in resistance to interferon therapy〔J〕.J Viral Hepat,2005;12(2):130-8.

5Aceti A,Zechini B,Griggi T,etal.Undetectable phospho-STAT 1 in peripheral blood mononuclear cells from patients with chronic hepatitis C who do not respond to interferon-alpha therapy〔J〕.Liver Int,2005;25(5):987-93.

6Fujimoto M, Naka T.SOCS1, a negative regulator of cytokine signals and TLR responses, in human liver diseases〔J〕.Gastroenterol Res Pract,2010;2(3):156-7.