結直腸癌組織中TAZ表達與Bcl-2、Bax、Caspase-3的關系及臨床意義

馮俊偉 張志勇 王愛軍 王紅鈺 徐晉珩 吳 肖 程 健 張 超 鄭寶軍 施 華

(唐山市工人醫(yī)院腫瘤外科， 河北 唐山 063000)

結直腸癌無特異性臨床表現(xiàn)，且侵襲轉移快，患者癥狀明顯就診時往往已處于晚期，預后很差。TAZ是新近發(fā)現(xiàn)的一種轉錄共激活因子，具有導致細胞癌變、促進腫瘤細胞侵襲、參與腫瘤耐藥等多種功能〔1～3〕。也有研究發(fā)現(xiàn)TAZ蛋白在結直腸癌中的表達增高〔4〕，但有關TAZ的臨床意義及與腫瘤細胞凋亡關系的研究還不多見。本研究擬分析TAZ蛋白與結直腸癌臨床病理、Bcl-2、Bax、Caspase-3的關系，為探索TAE蛋白在結直腸癌中的作用提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1一般資料 選取2010年1月至2013年12月在我科手術的結直腸癌患者96例，其中50例有癌旁組織標本，所有患者的石蠟切片均經(jīng)術后病理證實?；颊呔型暾呐R床病理資料，術前均未接受放化療、靶向治療、生物治療等影響腫瘤的治療。其中男68例，女28例，年齡31～77〔平均(58.2±18.6)〕歲。兔抗人TAZ、Bax、Caspase-3多克隆抗體、鼠抗人Bcl-2單克隆抗體均為美國Santa Cruz公司產(chǎn)品，免疫組化試劑盒購自福建邁新生物技術公司。

1.2方法

1.2.1免疫組化染色 石蠟包埋標本4 μm連續(xù)切片，切片常規(guī)脫蠟至水，緩沖液沖洗后置于3%過氧化氫孵育10～15 min、蒸餾水沖洗，以磷酸鹽緩沖液(PBS)浸泡5 min后抗原修復。以正常山羊血清封閉10 min，加入一抗、孵育1.5 h。沖洗后依次加生物素標記二抗工作液、辣根酶標記鏈霉卵白素工作液37℃ 孵育30 min。緩沖液沖洗、二氨基聯(lián)苯胺(DAB)顯色，復染、脫水、透明，最后中性樹脂封片。

1.2.2結果判斷 切片結果由兩位病理專業(yè)醫(yī)師雙盲閱片。每張切片均隨機取5個400倍視野，每視野隨機計數(shù)100個細胞，計算細胞的陽性率。TAZ表達主要在細胞核，Bcl-2、Bax、Caspase-3主要表達在細胞質內(nèi)，以黃色或棕黃色顆粒出現(xiàn)為染色陽性。記分標準如下：細胞無陽性表達為(-)，<50%細胞陽性表達為(+)，≥50%細胞陽性表達為()。

1.3統(tǒng)計學處理 應用SPSS19.0行t檢驗，χ2檢驗及Spearman相關分析。

2 結 果

2.1結直腸癌與癌旁組織TAZ、Bcl-2、Bax、Caspase-3表達比較 結直腸癌組織中TAZ表達陽性率為80.21%(77/96)，Bcl-2陽性表達率為73.96%(71/96)，Bax陽性表達率為33.33%(32/96)，Caspase-3為38.54%(37/96)；癌旁組織中TAZ表達陽性率為36.00%(18/50)，Bcl-2陽性表達率為44.00%(22/50)，Bax陽性表達率為42.00%(21/50)，Caspase-3為70.00%(35/50)。癌組織中TAZ、Bcl-2表達率與癌旁組織相比明顯增強，Caspase-3表達率比癌旁組織減弱(均P<0.05)；Bax在腫瘤和癌旁組織中表達率無統(tǒng)計學意義差異(P>0.05)。

2.2TAZ表達與結直腸癌臨床病理特點的關系 TAZ表達與患者的性別、年齡、腫瘤直徑、腫瘤部位、分化程度、遠處轉移等特征無明顯關系(均P>0.05)，與腫瘤的浸潤深度、臨床分期、淋巴結轉移、脈管瘤栓情況有關(均P<0.05)。見表1。

2.3結直腸癌組織中TAZ、Bcl-2、Bax、Caspase-3之間的相關性 Spearman相關分析結果顯示，腫瘤組織中TAZ與Bcl-2表達存在正相關關系(r= 0.372 2，P<0.01)，TAZ與Caspase-3表達存在負相關關系(r=-0.210 4，P=0.04)；Bcl-2與Bax表達存在負相關關系(r=-0.402 3，P<0.01)； TAZ與Bax之間、Bcl-2與Caspase-3之間、Bax與Caspase-3無明顯相關關系(r分別為-0.185 4、0.093 2、0.142 8，均P>0.05)。

表1 結直腸癌組織TAZ蛋白表達與臨床病理特征的關系(n)

3 討 論

雖然近年來結直腸癌診治技術均有了很大進步，但治療效果仍不滿意。由于結直腸癌的分子機制還不明確，因此，還沒有發(fā)現(xiàn)特異性強的腫瘤標志物和治療靶基因。尋找新基因闡明結直腸癌的發(fā)病機制并提供新的腫瘤標志物、治療靶標已成為當前結直腸癌研究的熱點。TAZ蛋白是轉錄共激活因子〔5〕，其表達受Hippo通路調控，可與RUNX2、TTF-l/Nkx2、TBX5、PRARγ等多種轉錄因子結合并發(fā)揮生物功能，在正常和疾病狀態(tài)下TAZ均發(fā)揮重要作用，是受到關注的新基因之一。研究發(fā)現(xiàn)TAZ蛋白在肺癌、乳腺癌、胃癌等許多惡性腫瘤中高表達，可以促進腫瘤的侵襲、轉移，并與乳腺癌的化療藥物敏感性有關〔2,3,6〕。已有少數(shù)結果發(fā)現(xiàn)TAZ在結直腸癌中存在過表達現(xiàn)象〔4,7〕，但相關報道不多，關于TAZ蛋白與結直腸癌臨床病理特征關系的研究也不多見。本研究結果說明TAZ蛋白表達與腫瘤發(fā)生、進展有關。另外，TAZ蛋白與結直腸癌進展及侵襲、轉移有密切關系，可以作為腫瘤標志物或治療靶基因加以研究。但本研究樣本量不大，還有待進一步擴大研究規(guī)模并加以隨訪，對TAZ蛋白在結直腸癌中的意義予以深入分析。

由于結直腸癌細胞具有很強的凋亡抵抗能力，這是結直腸癌進展的重要原因。有研究〔8〕顯示TAZ與腫瘤凋亡有關。Bcl-2是線粒體途徑中調節(jié)腫瘤細胞凋亡的重要蛋白質，具有很強的凋亡抑制功能〔9,10〕。Bcl-2過表達時腫瘤細胞具有明顯的凋亡抵抗能力，是促進腫瘤轉移、進展的重要原因。Bax是一種促進凋亡的蛋白，對Bcl-2有直接拮抗作用〔11〕。Bcl-2、Bax結合可形成Bcl-2/Bax異二聚體，這一比值決定了細胞接受調控信號后細胞凋亡與否的狀態(tài)。當Bcl-2表達增強時細胞凋亡減少；而Bax增多時細胞凋亡能力增高。Caspase-3是導致細胞凋亡的核心蛋白，Caspase-3激活可直接導致細胞凋亡〔12〕。本結果顯示，Bcl-2在結直腸癌中的表達強于癌旁組織，而Bax表達在兩種組織中無明顯差異；結直腸癌中Bcl-2與Bax存在負相關，這些結果與其他報道類似〔8〕。本研究認為TAZ蛋白可能通過促進Bcl-2表達、抑制Caspase-3而導致結直腸癌細胞凋亡抵抗能力增強。

4 參考文獻

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11Jeong SH,Han JH,Kim JH,etal. Bax predicts outcome in gastric cancer patients treated with 5-fluorouracil,leucovorin,and oxaliplatin palliative chemotherapy〔J〕. Dig Dis Sci,2011;56(1):131-8.

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