腎氣丸對衰老大鼠睪丸抗氧化能力和生精細(xì)胞凋亡的影響

吳正平

(宜春學(xué)院美容醫(yī)學(xué)院，江西 宜春 336000)

中醫(yī)對人體衰老認(rèn)識(shí)歷史悠久,已經(jīng)形成了較完整的中醫(yī)衰老理論體系,其中腎虛被認(rèn)為是衰老的根本〔1，2〕?！端貑枴吩?“丈夫五八,腎氣衰,發(fā)墮齒槁；七八腎臟衰,形體皆極”；《醫(yī)學(xué)正傳》“腎氣盛則壽延,腎氣衰則壽夭”，均明確指出了腎中精氣的虛衰與機(jī)體衰老的密切關(guān)系。腎氣丸是《金匱要略》中治療腎虛證的經(jīng)典方，此方陰陽雙補(bǔ)，腎虛得復(fù)，元?dú)獬渥?從而激發(fā)和推動(dòng)全身各臟腑組織器官的生理功能,延緩衰老。性的變化是人體衰老的重要特征，由于腎氣的不足，男子睪丸、女子卵巢以及其他有關(guān)內(nèi)分泌腺體的衰退是非常明顯的〔1〕。本研究采用D-半乳糖(D-gal)衰老大鼠模型，觀察腎氣丸對衰老大鼠睪酮水平、睪丸組織抗氧化能力和生精細(xì)胞凋亡的影響，探討腎氣丸延緩性腺衰老的作用機(jī)制。

1 材料與方法

1.1動(dòng)物與分組 選用清潔級Wistar大鼠40只(南昌大學(xué)醫(yī)學(xué)院動(dòng)科部提供，合格證號：贛醫(yī)動(dòng)字第02196-02)，體重180～200 g，雄性，隨機(jī)分為4組：正常組，亞急性衰老模型組，腎氣丸低、高劑量組。

1.2藥品制備 腎氣丸按8:4:4:3:3:3:1:1的比例取干地黃，山茱萸，山藥，茯苓，澤瀉，牡丹皮，附子，桂枝，煎煮過濾，濾液濃縮成含生藥1.5g/ml溶液。

1.3試劑與儀器 D-gal為北京化學(xué)試劑公司產(chǎn)品；睪酮試劑盒由北京北方生物技術(shù)研究所提供；SOD、MDA試劑盒均由南京建成生物工程研究所提供。紫外-可見分光光度計(jì)(日本島津，型號：UA-240)；酶標(biāo)儀(美國伯樂，型號：680型)；顯微鏡(日本OLYMPUS，型號：BX53)。

1.4方法

1.4.1造模 除正常組無菌操作頸背部皮下注射生理鹽水外，其他3組頸背部皮下注射D-gal 100 mg·kg-1·d-1，1次/d，連續(xù)42 d，造成亞急性衰老大鼠模型。

1.4.2給藥 在造模的同時(shí)，腎氣丸低、高劑量給藥組大鼠分別灌胃相應(yīng)劑量腎氣丸液：5.0、10.0 g·kg-1·d-1，1次/d；正常組、模型組灌以等量生理鹽水。

1.4.3血清睪酮含量測定 各組大鼠于第42天末次給藥2 h后，眼球后靜脈叢毛細(xì)管取血，靜置后3 500 r/min離心10 min，取血清備用。嚴(yán)格按試劑盒操作程序測定血清睪酮含量。

1.4.4睪丸組織SOD、MDA含量測定 取血后斷頭處死大鼠，取單側(cè)部分睪丸組織(約100 mg)，濾紙吸干，迅速冰浴，制成10%的組織勻漿，3 500 r/min離心10 min，取上清備用。嚴(yán)格按照試劑盒說明書操作測定SOD、MDA含量。

1.4.5凋亡細(xì)胞的檢測 取另一側(cè)睪丸,甲醛固定，過夜,常規(guī)石蠟包埋、切片,以TUNEL法行凋亡細(xì)胞檢測，陽性細(xì)胞顯示棕黃色。任取顯微鏡下10個(gè)視野,計(jì)算含凋亡細(xì)胞的陽性曲細(xì)精管數(shù)；再計(jì)算10個(gè)陽性曲細(xì)精管中的總細(xì)胞數(shù)和陽性細(xì)胞數(shù),計(jì)算凋亡細(xì)胞的百分比。

2 結(jié) 果

2.1一般狀態(tài) 對照組大鼠精神狀態(tài)好、反應(yīng)敏捷、毛發(fā)光澤順滑。模型組大鼠均出現(xiàn)團(tuán)居、嗜臥、精神萎靡、行動(dòng)遲緩、毛色干枯等癥狀，與對照組比較，有顯著差異。腎氣丸組大鼠上述表現(xiàn)與模型組比較有所改善。

2.2大鼠血清睪酮和睪丸組織SOD、MDA含量變化 與正常組比較，模型組大鼠血清睪酮和睪丸組織SOD水平顯著下降(P<0.01)，睪丸組織MDA水平顯著升高(P<0.01)；腎氣丸組與模型組比較，大鼠血清睪酮和睪丸組織SOD水平明顯升高(P<0.05或P<0.01)，睪丸組織MDA水平明顯下降(P<0.05或P<0.01)。見表1。

表1 各組大鼠血清睪酮和睪丸組織SOD、MDA含量變化

2.3大鼠睪丸生精細(xì)胞凋亡情況 各組大鼠的睪丸生精細(xì)胞均有凋亡現(xiàn)象,模型組大鼠睪丸組織凋亡細(xì)胞以成簇形式存在,而正常組和腎氣丸組凋亡細(xì)胞單個(gè)散在。與正常組比較，模型組大鼠凋亡曲細(xì)精管數(shù)和凋亡細(xì)胞百分率均顯著升高(P<0.01)；腎氣丸組比較模型組，大鼠凋亡曲細(xì)精管數(shù)和凋亡細(xì)胞百分率均明顯降低(P<0.05或P<0.01)。見表2。

表2 各組大鼠睪丸生精細(xì)胞凋亡情況

3 討 論

組織細(xì)胞老化、器官功能下降是隨著年齡增長而逐漸出現(xiàn)的機(jī)體衰老現(xiàn)象。大量研究證實(shí)性腺功能與機(jī)體的衰老程度有著密切關(guān)系〔3〕。隨著機(jī)體的衰老,睪丸的結(jié)構(gòu)和功能也出現(xiàn)衰退。法國醫(yī)學(xué)家Brown Sequard的研究顯示睪丸提取液具有延緩衰老的功效,以及性激素替代療法成為諸多老年性疾病的治療方法也給以上觀點(diǎn)提供了理論依據(jù)。

睪酮在維持生精功能、促進(jìn)生殖器官的生長發(fā)育方面起著重要作用，其分泌受下丘腦-垂體的調(diào)節(jié)。衰老時(shí)，在下丘腦、垂體功能衰退的影響下,老年男性Leydig細(xì)胞功能降低,導(dǎo)致睪酮合成和分泌能力下降,表現(xiàn)為血清睪酮水平降低〔4〕。同時(shí)，睪酮水平的降低明顯增加生精細(xì)胞的凋亡〔5〕。

衰老的自由基理論1965年由Harman提出〔6〕，已得到現(xiàn)代醫(yī)學(xué)界的普遍認(rèn)同。該理論認(rèn)為，生物體內(nèi)存在著產(chǎn)生和消除自由基的平衡體系，隨著生物體年齡的增長，體內(nèi)自由基的產(chǎn)生與消除平衡失調(diào)，自由基的產(chǎn)生大于消除，過多的自由基持續(xù)地攻擊細(xì)胞，使細(xì)胞受到損傷，這種損傷積累到一定的程度最終引起機(jī)體衰老。因此，衰老是機(jī)體內(nèi)抗氧化酶的活性不斷下降而使自由基逐步積累過剩的結(jié)果。SOD是體內(nèi)主要的抗氧化酶，廣泛存在于機(jī)體內(nèi)的各組織中。SOD能催化超氧陰離子發(fā)生歧化反應(yīng)，使其生成H2O2，H2O2進(jìn)一步轉(zhuǎn)變成H2O和O2,從而清除自由基。MDA是動(dòng)物體內(nèi)脂質(zhì)過氧化反應(yīng)的終產(chǎn)物，其含量能客觀反映機(jī)體組織細(xì)胞的脂質(zhì)過氧化程度和自由基的產(chǎn)生情況〔7〕。因此,機(jī)體組織SOD、MDA可作為評價(jià)動(dòng)物的衰老進(jìn)程的敏感指標(biāo)。

本研究結(jié)果表明，腎氣丸可以通過提高衰老大鼠血清睪酮水平、增強(qiáng)睪丸組織抗氧化能力及降低其生精細(xì)胞的凋亡指數(shù)來提升睪丸功能，起到延緩性腺衰老的作用。

4 參考文獻(xiàn)

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6Harman D.The free radical theory of aging:Effect of age on serum copper levels〔J〕.J Gerontol，1965；20：151.

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