抑癌基因PTEN在三陰性乳腺癌中的表達(dá)及其判斷預(yù)后的價(jià)值

陳 亮 戴殿祿 崔國(guó)忠 丁明劍

(滄州市中心醫(yī)院腫瘤外二科，河北 滄州 061001)

三陰性乳腺癌(TNBC)是一種特殊類(lèi)型的乳腺癌，其雌激素受體(ER)、孕激素受體(PR)和人表皮生長(zhǎng)因子受體2(Her-2)表達(dá)均為陰性，內(nèi)分泌治療和Her-2的靶向治療對(duì)于TNBC治療無(wú)效，因此極易出現(xiàn)復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移，惡性度高，預(yù)后很差。目前影響TNBC預(yù)后的分子指標(biāo)逐漸成為研究的焦點(diǎn)。新發(fā)現(xiàn)的抑癌基因PTEN是繼P53基因之后在人類(lèi)腫瘤細(xì)胞中缺失和突變率最高的抑癌基因。乳腺癌中存在抑癌基因PTEN突變或缺失〔1〕，PTEN不但可抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)，而且能促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡。本研究探討PTEN蛋白在TNBC這一特殊類(lèi)型乳腺癌中的表達(dá)，并分析其與TNBC預(yù)后的關(guān)系。

1 材料與方法

1.1臨床材料 收集2000年8月至2005年7月滄州市中心醫(yī)院住院治療的130例TNBC患者的蠟塊及隨訪材料，乳腺癌患者均為女性；年齡21～75歲，平均46.3歲；臨床分期：Ⅰ期34例，Ⅱ期56例，Ⅲ期40例；組織學(xué)分級(jí)：Ⅰ級(jí)36例,Ⅱ級(jí)50例，Ⅲ級(jí)44例；腋下淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者72例；乳腺癌家族史45例。并選取48例癌旁乳腺組織作為對(duì)照。所有患者均接受手術(shù)治療并根據(jù)患者情況給以放化療等綜合治療。

1.2隨訪 所有乳腺癌患者均進(jìn)行了隨訪。隨訪起始時(shí)間為抗癌治療開(kāi)始日，觀察終止時(shí)間為2010年7月。隨訪采用門(mén)診定期復(fù)查和電話相結(jié)合的方式。預(yù)后評(píng)價(jià)指標(biāo)為患者的5年無(wú)病生存時(shí)間(DFS)及總生存時(shí)間(OS)。

1.3免疫組化 采用免疫組化SP法。以SP免疫組化試劑盒說(shuō)明書(shū)為依據(jù)操作。PTEN單克隆抗體購(gòu)于美國(guó)UCL公司。以PBS代替一抗作陰性對(duì)照，用已知PTEN陽(yáng)性結(jié)腸癌組織作為陽(yáng)性對(duì)照。

1.4結(jié)果判定 PTEN的判斷：PTEN蛋白主要表達(dá)于細(xì)胞質(zhì)，以棕黃色顆粒為特征。采取以每一切片中隨機(jī)選取10個(gè)高倍鏡視野及每個(gè)高倍鏡視野計(jì)數(shù)100個(gè)細(xì)胞的方法判定。染色強(qiáng)度等級(jí)：淺黃染為1分，中度黃染為2分，強(qiáng)度黃染為3分；陽(yáng)性細(xì)胞的百分率：陽(yáng)性細(xì)胞<5%為0分，5%～25%為1分，26%～50%為2分，>50%為3分；將兩者的結(jié)果綜合分析：0分計(jì)為陰性(-)，1～2計(jì)為弱陽(yáng)性(+)，3～4計(jì)為中度陽(yáng)性()，5～6計(jì)為強(qiáng)陽(yáng)性()；將PTEN蛋白的(-)、(+)組計(jì)為低表達(dá)組，將PTEN蛋白的()、()組計(jì)為高表達(dá)組。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS16.0軟件。計(jì)數(shù)資料應(yīng)用χ2檢驗(yàn)，用Kaplan-Meier法描述生存曲線，組間比較采用Log-rank法進(jìn)行，用Cox模型進(jìn)行多因素分析。

2 結(jié) 果

2.1PTEN蛋白在癌旁組織及癌組織中的表達(dá) PTEN蛋白在TNBC和癌旁乳腺組織中的表達(dá)率差異顯著(χ2=34.8,P=0.000)。見(jiàn)圖1，表1。

圖1 乳腺癌中PTEN的陽(yáng)性表達(dá)(SP,×200)

表1 PTEN蛋白在乳腺不同組織中的表達(dá)〔n(%)〕

2.2PTEN蛋白表達(dá)與TNBC臨床病理特征之間的關(guān)系 在TNBC中，PTEN的表達(dá)與臨床分期及腋下淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移均顯著相關(guān)(P<0.05)，而與年齡、腫瘤大小、乳腺癌家族史及組織學(xué)分級(jí)無(wú)顯著相關(guān)(P>0.05)。見(jiàn)表2。

表2 PTEN蛋白在TNBC中的表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系〔n(%)〕

2.3各臨床因素對(duì)TNBC患者預(yù)后的影響 影響DFS的單因素分析顯示，年齡、臨床分期、腋下淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及PTEN的蛋白表達(dá)與TNBC預(yù)后有關(guān)(P<0.05)。影響OS的單因素分析顯示，臨床分期、腋下淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及PTEN的蛋白表達(dá)與TNBC預(yù)后有關(guān)(P<0.05)。見(jiàn)表3。

表3 影響TNBC患者預(yù)后的單因素分析(%)

2.4影響生存期的Cox模型多因素分析 把Log-rank檢驗(yàn)篩選到的對(duì)TNBC生存有影響的各個(gè)因素再進(jìn)行多因素Cox模型分析，入選條件為P<0.1。結(jié)果顯示：年齡、臨床分期、PTEN的蛋白表達(dá)及腋淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況四項(xiàng)指標(biāo)是影響患者DFS的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。臨床分期及腋淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況兩項(xiàng)指標(biāo)是影響患者OS的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。見(jiàn)表4，表5。

表4 影響TNBC患者DFS的多因素分析

2.5PTEN蛋白表達(dá)與生存期的關(guān)系 Kaplan-Meier法繪制的生存曲線可以看到PTEN蛋白高表達(dá)組患者的DFS及OS明顯優(yōu)于PTEN蛋白低表達(dá)組患者。見(jiàn)圖2，圖3。

表5 影響TNBC患者OS的多因素分析

圖2 PTEN高表達(dá)組與低表達(dá)組DFS曲線的比較

圖3 PTEN高表達(dá)組與低表達(dá)組OS曲線的比較

3 討 論

TNBC在乳腺癌中屬于特殊類(lèi)型，其缺乏內(nèi)分泌治療及針對(duì)HER-2基因的分子靶向治療，同時(shí)具有侵襲性強(qiáng)，復(fù)發(fā)早，進(jìn)展快，生存時(shí)間短及易于侵襲轉(zhuǎn)移等臨床生物學(xué)行為。目前，化學(xué)治療雖然是其主要治療手段，但與其他類(lèi)型乳腺癌相比預(yù)后更差。因此針對(duì)TNBC的基礎(chǔ)研究、新治療的探尋及臨床預(yù)后等方面的研究引起越來(lái)越多的重視。PTEN基因是迄今為止發(fā)現(xiàn)的第一個(gè)具有磷酸酶活性的抑癌基因，其不但可抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)，也能促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡。在許多腫瘤中PTEN基因區(qū)域有雜合性丟失和突變，抑制腫瘤作用減弱或消失，從而促進(jìn)腫瘤的發(fā)生，發(fā)展及轉(zhuǎn)移。同樣，乳腺癌中也存在PTEN基因的缺失和突變，并且可以作為判斷預(yù)后的指標(biāo)，本研究探討PTEN基因在TNBC這一特殊類(lèi)型乳腺癌中的表達(dá)及其對(duì)預(yù)后的影響。

PTEN基因?qū)τ谌橄偌?xì)胞正常功能的維持具有重要作用，其在正常乳腺組織中高表達(dá)，本研究說(shuō)明癌旁組織中可能開(kāi)始存在PTEN基因的丟失，從而影響了乳腺細(xì)胞的正常功能，其潛在的癌變的可能性增大；而PTEN蛋白表達(dá)在TNBC組織中進(jìn)一步減弱，可能是由于抑癌基因PTEN出現(xiàn)了更多缺失和突變的結(jié)果。趙云霞等〔2〕應(yīng)用免疫組織化學(xué)S-P法檢測(cè)得出150例乳腺癌、20例不典型增生和30例良性增生性病變組織中PTEN蛋白在乳腺癌中失表達(dá)率分別為65.2%，50.0%和13.3%(P<0.05)。本研究結(jié)果還顯示：PTEN蛋白表達(dá)水平與臨床分期及腋下淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈負(fù)相關(guān)，提示隨著腫瘤嚴(yán)重程度進(jìn)展及侵襲能力的加強(qiáng)，PTEN蛋白丟失程度隨之增加，而相關(guān)研究報(bào)道也發(fā)現(xiàn)，PTEN蛋白的丟失率隨臨床分期〔3〕增加及腋下淋巴結(jié)的陽(yáng)性轉(zhuǎn)移〔4，5〕而增加，說(shuō)明PTEN表達(dá)的水平越低，腫瘤惡性度越高，越容易出現(xiàn)浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移。

本研究中PTEN蛋白表達(dá)的單因素生存率分析顯示，PTEN高表達(dá)組患者的5年的DFS及OS顯著高于PTEN低表達(dá)組的患者，提示PTEN蛋白表達(dá)可能同樣與TNBC的預(yù)后有關(guān)。李志雄等〔6〕通過(guò)免疫組化法檢測(cè)食管鱗癌中PTEN的表達(dá)并行COX回歸分析：PTEN的陽(yáng)性患者的5年生存率明顯高于PTEN陰性表達(dá)者，成為不良的預(yù)后因素。PTEN的表達(dá)在卵巢漿液性腺癌〔7〕、結(jié)直腸癌〔8〕、非小細(xì)胞肺癌〔9〕、胃癌〔10〕及肝內(nèi)膽管細(xì)胞癌〔11〕中同樣成為不良的預(yù)后因素，而Hager等〔12〕對(duì)腎細(xì)胞癌的預(yù)后分析顯示，PTEN表達(dá)減少似乎是在腎細(xì)胞癌的早期步驟，PTEN基因的表達(dá)不能成為生存預(yù)后的指標(biāo)。同樣在膀胱癌〔13〕的預(yù)后研究中未能得出不良預(yù)后的結(jié)果。本研究通過(guò)影響三陰性乳腺癌患者DFS和OS的多因素分析顯示，年齡、臨床分期、PTEN的蛋白表達(dá)及腋淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況四項(xiàng)指標(biāo)是影響患者DFS的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，而僅有臨床分期及腋淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況兩項(xiàng)指標(biāo)是影響患者OS的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，說(shuō)明PTEN的表達(dá)可能是影響三陰性乳腺癌預(yù)后的因素，但不是最為重要的預(yù)后因素。多因素分析：PTEN的回歸系數(shù)為負(fù)數(shù)，表示隨著PTEN表達(dá)的增加，患者死亡的危險(xiǎn)度相對(duì)減少，而PTEN表達(dá)下調(diào)，則患者死亡的危險(xiǎn)度相對(duì)增加。

綜上，PTEN的缺失可能與TNBC的發(fā)生及發(fā)展有一定相關(guān)性，PTEN可能是影響TNBC預(yù)后的因素，檢測(cè)PTEN蛋白在TNBC組織中的表達(dá)可以作為判斷患者預(yù)后的分子標(biāo)志。

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