AFP-L3和AFP mRNA聯(lián)合檢測在肝癌治療療效觀察和預(yù)后中的作用

邱大鵬 韓 風(fēng) 聶常富 周進學(xué) 蒙 博

(河南省腫瘤醫(yī)院鄭州大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院肝膽胰外科,河南 鄭州 450008)

肝細胞癌(HCC)近年發(fā)病率有上升趨勢〔1〕。確診時已多屬中、晚期，缺乏有效治療，預(yù)后差〔2，3〕。雖然手術(shù)切除仍是最有效的治療方法，但晚期HCC切除后復(fù)發(fā)率高，易轉(zhuǎn)移，因而早期診斷、療效觀察、術(shù)后隨訪及復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移監(jiān)測極為重要〔4〕。本研究擬通過聯(lián)合檢測甲胎蛋白(AFP)異質(zhì)體(AFP-L3)、AFP mRNA在HCC患者中表達情況，確定其在HCC療效觀察和預(yù)后以及診斷學(xué)、監(jiān)測復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移中的作用。

1 資料與方法

1.1一般資料 2009年2～8月選擇部分住院接受治療的肝病患者86例，其中男56例，女30例；年齡30～76〔平均(50.35±10.25)〕歲；均經(jīng)過彩超、螺旋CT或手術(shù)病理確診。其中肝硬化10例，肝臟良性病理14例，HCC 62例。肝癌轉(zhuǎn)移的診斷均經(jīng)過影像學(xué)、病理、實驗室診斷確診。

1.2方法 治療前后分別抽取靜脈抗凝血1～2 ml，迅速分離血清(血細胞備用)，檢測血清中AFP-L3水平，采用Trizol法提取血細胞總RNA，并采用熒光定量反轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)測定AFP mRNA。(1)AFP-L3蛋白表達水平測定：采用由北京熱景生物技術(shù)有限公司提供的含有小扁豆凝集素(LCA)的微量親和吸附離心管分離純化AFP-L3，具體操作按照該公司產(chǎn)品說明書進行，計算AFP-L3占AFP總量的百分比，以AFP-L3(%)>15%作為AFP-L3異常升高的陽性標(biāo)準(zhǔn)〔5，6〕。(2)AFP mRNA表達水平測定：采用RT-PCR，AFP引物：前向5′-GTAAACCCTGGTCTTGGCC-3′；反向5′-TCAGAGAA-TGCAGGAGGGAC-3′，擴增最終片段長282 bp；熒光探針：5′-TTCATATGCCAACAGGAGGCCATGC-3′〔7〕。內(nèi)參為甘油醛-3-磷酸脫氫酶(GADPH)。肝癌細胞系HepG2為陽性對照，陰性對照以水取代cDNA〔8〕。

2 結(jié) 果

2.1各組AFP和AFP-L3檢測結(jié)果比較 患者的AFP mRNA和AFP-L3蛋白表達量均明顯高于肝硬化組和肝良性病變組(t=23.32、30.15、30.21、25.46，均P<0.01)。另外，HCC患者的AFP陽性率和AFP-L3陽性率明顯高于肝硬化組和肝良性病變組(χ2=5.78、10.98、14.52、26.23，均P<0.05)。見表1。

表1 各組AFP和AFP-L3檢測結(jié)果比較

2.2HCC患者術(shù)后AFP和AFP-L3水平與預(yù)后的關(guān)系 術(shù)后AFP轉(zhuǎn)陰48例，其中AFP-L3仍然為陽性18例，其1、2、3年生存率分別為72.22%(13/18)、44.44%(8/18)、22.22%(4/18)；另外30例患者AFP和AFP-L3均為陰性，1、2、3年生存率分別為80.00%(24/30)、53.33%(16/30)、50.00%(15/30)；AFP和AFP-L3均轉(zhuǎn)陰者的3年生存率明顯高于AFP轉(zhuǎn)陰而AFP-L3未陰者(χ2=3.98，P<0.05)。

3 討 論

AFP雖是診斷HCC的主要指標(biāo)，但對慢性肝病、肝硬化患者定期隨訪有一定局限性，單獨檢測AFP鑒別診斷HCC有一定困難〔9〕。研究〔10〕發(fā)現(xiàn)，AFP-L3是AFP的組分之一，有很強的HCC細胞特異性。敏感而特異的AFP異質(zhì)體分析有助于HCC早期診斷、療效觀察、術(shù)后隨訪及復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移監(jiān)測〔11〕。

在HCC的發(fā)展過程中，其轉(zhuǎn)移的重要途徑是血行轉(zhuǎn)移。因此識別血液循環(huán)中有無癌細胞，觀察癌細胞動態(tài)變化，對指導(dǎo)臨床治療和判斷預(yù)后具有重要意義。外周血中檢測到的AFP-mRNA來自癌灶脫落人血的完整HCC細胞，可作為HCC細胞血液播散的標(biāo)志〔12〕。本文通過LCA親和交叉免疫電泳自顯影法檢測AFP-L3監(jiān)測癌灶的存在，用RT-PCR檢測AFP-mRNA監(jiān)測血液循環(huán)中的癌細胞，從而有利于肝癌術(shù)后轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)的檢測，以及對HCC的預(yù)后起到衡量的作用，使HCC的治療更加有效化和規(guī)范化〔13〕。HCC的標(biāo)志物檢測有了很大發(fā)展，但單憑一種標(biāo)志物來承擔(dān)其HCC的臨床檢測還不現(xiàn)實。越來越多的研究正在對這些標(biāo)志物進行優(yōu)化組合，以期產(chǎn)生更好的檢測效果。從而提高HCC患者的5年生存率，節(jié)約醫(yī)療資源的支出。本文研究結(jié)果顯示測定患者AFP mRNA和AFP-L3蛋白水平的陰陽性可以鑒定良、惡性肝病，對于HCC的早期診斷及術(shù)后預(yù)后判斷有重要的臨床意義。

4 參考文獻

1張 雯，錢金雄，肖彥革，等.甲胎蛋白異質(zhì)體(AFP-L3)檢測技術(shù)的研究進展〔J〕.分子診斷與治療雜志，2009;1(3)：213-6.

2韓 風(fēng)，邱大鵬，陳偉瑜，等.AFP-L3含量測定在肝癌診治中的意義〔J〕.山東醫(yī)藥，2010;50(24)：5-6.

3馮 凱，馬寬生，高 峻，等.甲胎蛋白異質(zhì)體3含量對早期肝癌的預(yù)后價值〔J〕.中華消化外科雜志，2008;7(6)：422-4.

4邢卉春.甲胎蛋白異質(zhì)體檢測在原發(fā)性肝癌診療中的價值〔J〕.中華檢驗醫(yī)學(xué)雜志，2013;36(2)：123-4.

5韓 風(fēng)，邱大鵬，陳偉瑜，等.甲胎蛋白異質(zhì)體和甲胎蛋白信使核糖核酸用于診斷肝細胞癌〔J〕.中國臨床醫(yī)學(xué)，2010;17(1)：45-6.

6胡仁健，唐 棟，陳祖華.甲胎蛋白異質(zhì)體陰性肝癌的CT特點分析〔J〕.實用醫(yī)學(xué)雜志，2013;29(22)：3738-9.

7王壽明，高 蕾，于樂成，等.甲胎蛋白異質(zhì)體對肝癌診斷及療效評估價值研究進展〔J〕.實用肝臟病雜志，2011;14(6)：479-81.

8蘇 江，王 科.甲胎蛋白與原發(fā)性肝癌臨床病理因素及預(yù)后的相關(guān)性研究〔J〕.中國綜合臨床，2012;28(10)：1101-3.

9朱 軍，營躍勇，黃 勇，等.影響原發(fā)性肝癌TACE療效的客觀預(yù)后因素分析〔J〕.西部醫(yī)學(xué)，2011;23(11)：2195-7.

10邱大鵬，韓 風(fēng)，賀 濤.甲胎蛋白異質(zhì)體和甲胎蛋白信使核糖核酸用于診斷肝細胞癌〔J〕.中國醫(yī)學(xué)創(chuàng)新，2014；11(3)：47-9.

11王肖輝，于 杰，梁 萍，等.甲胎蛋白預(yù)測肝癌微波消融療效的價值〔J〕.中華消化外科雜志，2012；11(2)：159-62.

12劉 宏，趙 馥，劉 麗，等.射頻消融治療甲胎蛋白陽性小肝癌22例臨床分析〔J〕.中國實用醫(yī)刊，2011；38(4)：71-2.

13常中飛，王茂強，劉鳳永，等.經(jīng)導(dǎo)管動脈內(nèi)化療治療甲胎蛋白陰性原發(fā)性肝癌的療效及預(yù)后因素分析〔J〕.中國醫(yī)學(xué)影像學(xué)雜志，2013；21(6)：417-21.