臭氧對兔膝骨性關節(jié)炎關節(jié)沖洗液中細胞因子含量的影響

宋玉光 葉蜀新 林 海

(宜賓市第二人民醫(yī)院骨科,四川 宜賓 644000)

膝骨性關節(jié)炎是中老年較為常見的慢性關節(jié)炎，發(fā)病因素復雜，引起患者的關節(jié)退化、軟骨組織破壞以及周圍軟組織損傷〔1〕。相關的研究已經(jīng)表明炎性介質與該疾病的發(fā)生有著緊密的聯(lián)系，多種細胞因子參與膝骨性關節(jié)炎的發(fā)生〔2〕。研究證實，臭氧能夠改善膝骨性關節(jié)炎患者的臨床癥狀，具有抗炎、止痛療效，改善患者的臨床癥狀〔3,4〕。但是，還沒有臭氧治療膝骨性關節(jié)炎相關機制的報道。本研究探討臭氧對兔膝骨性關節(jié)炎關節(jié)沖洗液中細胞因子白介素(IL-1β)、腫瘤壞死因子(TNF)-α和一氧化氮(NO)含量的影響，為膝骨性關節(jié)炎的臨床治療提供參考依據(jù)。

1 資料和方法

1.1一般資料 選取40只膝骨性關節(jié)炎模型新西蘭兔8～15月齡，體重2.4～2.7 kg，雌雄不限。隨機將其分為模型對照組和觀察組，各20只，同時選取20只健康新西蘭兔設為健康對照組。三組兔月齡、體重以及性別等一般資料比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，具有可比性。

1.2研究方法 采用石膏將新西蘭兔的左膝關節(jié)固定于伸直位，范圍為踝關節(jié)下3 cm到腹股溝1.5 cm。建立模型的新西蘭兔均為單籠喂養(yǎng)，并強迫其活動。6 w后，隨機處死1只新西蘭兔，病理檢查膝骨性關節(jié)炎的模型是否建立成功。確認模型建立成功后，去除固定，并剃毛。健康對照組新西蘭兔不采取任何處理〔5〕。

觀察組采用1 ml(20 μg/ml)臭氧關節(jié)腔內(nèi)注射治療〔6〕，健康對照組和模型對照組兔注射空氣作對照，三組均治療1次/w，共治療2 w。分別于治療前和治療后48 h采用穿刺方法收集所有動物的膝關節(jié)沖洗液約0.8 ml，將采集的樣本保存于-20℃低溫冰箱以備檢測。

1.3觀察指標 分別檢測所有實驗動物關節(jié)沖洗液樣本中IL-1β、TNF-α和NO的含量。 IL-1β和TNF-α的檢測采用酶聯(lián)免疫吸附(ELISA)法，檢測試劑盒購于上海逸峰生物科技有限公司，每個樣本設5個復孔，結果取平均值。NO的檢測采用熒光法，試劑盒購于艾美捷科技有限公司。

2 結 果

模型對照組和觀察組兔治療前膝關節(jié)沖洗液中IL-1β、TNF-α和NO的含量明顯高于健康對照組(P<0.05)；觀察組兔治療后膝關節(jié)沖洗液中IL-1β、TNF-α和NO的含量明顯低于模型對照組(P<0.05)；健康對照組和模型對照組兔治療前后膝關節(jié)沖洗液中IL-1β、TNF-α和NO的含量變化無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。見表1。

表1 三組兔治療前后膝關節(jié)沖洗液中IL-1β、TNF-α和NO的含量變化

3 討 論

膝骨性關節(jié)炎稱為增生性、肥大性或退行性骨關節(jié)炎，嚴重者甚至可能導致患者殘疾〔7〕。目前，臨床治療膝骨性關節(jié)炎的主要措施以緩解患者疼痛為主，但無法阻止或者逆轉膝骨性關節(jié)炎的進展。相關研究表明臭氧治療能夠明顯改善膝骨性關節(jié)炎患者的臨床癥狀，減少炎癥組織充血、促進水腫消散以及降低局部溫度〔8〕。但是對于其治療機制尚不完全清楚。

相關研究證實，膝骨性關節(jié)炎患者關節(jié)液中的IL-1β、TNF-α和NO的含量明顯升高〔9,10〕。在膝骨性關節(jié)炎的病情發(fā)展過程中，IL-1β可能會通過促進蛋白溶解液的合成，以進一步加速軟骨基質的降解，并影響其他細胞因子在軟骨和滑膜修復和代謝中的功能〔11〕。此外，TNF-α還可以促進滑膜成纖維樣細胞的增殖，從而誘導滑膜組織纖維化，進而改變關節(jié)軟骨的微環(huán)境，促進膝骨性關節(jié)炎病情的進展〔12〕。相關學者認為，過量的NO能夠抑制蛋白聚糖的合成，促進軟骨細胞的凋亡和軟骨的分解，導致軟骨基質的降解〔13〕。因此，NO也被認為是膝骨性關節(jié)炎發(fā)生中的重要影響因素。

相關研究表明，臭氧能夠促進IL-1β、TNF-α和NO等細胞因子拮抗劑的釋放，從而起到降低IL-1β、TNF-α和NO等細胞因子含量的功能；此外，臭氧自身也可以直接抑制IL-1β、TNF-α和NO等細胞因子的釋放，促進超氧化物歧化酶以及谷胱甘肽超氧化物酶等抗氧化酶的產(chǎn)生，促進間質細胞和關節(jié)軟骨合成，刺激軟骨和纖維原細胞增殖，修復受損組織〔14〕。

4 參考文獻

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