陶 春 林 琳 宋葆華 強 欣 張 娟 湯文莉 劉月英
(內(nèi)蒙古民族大學(xué)醫(yī)學(xué)院,內(nèi)蒙古 通遼 028000)
蒙成藥扎沖十三味丸是蒙醫(yī)治療腦血管病的常用藥物,在蒙醫(yī)臨床腦梗死的治療中,發(fā)揮著極為重要的作用。本研究用大鼠大腦中動脈阻斷局灶性腦缺血(MCAO)模型,對模型行扎沖十三味丸預(yù)處理,比較模型組和扎沖十三味丸組大鼠神經(jīng)功能行為評分,比較腦組織梗死區(qū)重量及梗死區(qū)重量/全腦重量的大小,觀察腦缺血組織光鏡下病理結(jié)構(gòu)變化特點,探討蒙成藥扎沖十三味丸對腦缺血缺氧損傷的保護作用,進一步明確其臨床療效,以指導(dǎo)臨床正確使用此藥。
1.1動物與分組 清潔級Wistar大鼠36只,體重220~260 g,雌雄不拘,由吉林大學(xué)實驗動物中心提供〔許可證:SCXK(吉),2011-0004〕,動物分籠飼養(yǎng)(環(huán)境溫度24℃~26℃,濕度60%~70%),自由飲水,術(shù)前12 h禁食。將大鼠隨機分為3組,即正常組、模型組、扎沖十三味丸組。
1.2試劑與儀器 扎沖十三味丸由內(nèi)蒙古民族大學(xué)附屬醫(yī)院提供,TTC溶液購于美國Sigma公司,水合氯醛為天津市河北區(qū)海晶精細化工廠產(chǎn)品。多聚甲醛購于上海凌風(fēng)化學(xué)試劑有限公司,PBS溶液購于博士德公司。
1.3方法
1.3.1給藥方法 扎沖十三味丸以蒸餾水配制成2%濃度,經(jīng)灌胃給藥,實驗前給藥,按5 ml/kg給藥。模型組均給予同量的蒸餾水。正常組在同一環(huán)境下飼養(yǎng)。
1.3.2模型建立 采用線栓法Zea-Longa〔1〕制備大鼠MCAO模型。將大鼠以10%水合氯醛腹腔注射麻醉后,40倍顯微鏡下手術(shù),頸正中切口,分離右側(cè)胸鎖乳突肌,暴露右頸總動脈(CCA)和頸外動脈(ECA)顯露,沿著CCA向上分離,見分叉處,向內(nèi)行走分叉為ECA,向外下行走的為頸內(nèi)動脈(ICA)。結(jié)扎ECA,結(jié)扎CCA近心端,在距分叉處約1 cm的血管壁上剪一小口,沿切口插入栓線,將栓線送進ICA。距離分叉處約2 cm,有阻力感,停止進入??p合皮膚,剪去暴露在外的栓線,術(shù)后注意保暖,大鼠麻醉清醒后進行神經(jīng)行為學(xué)觀察。
1.3.3模型成功標志 大鼠蘇醒后按Zea-Longa的5分評分標準進行神經(jīng)功能缺失評分。0分:無明顯神經(jīng)損傷癥狀;1分:不能完全伸展對側(cè)前爪;2分:行走時向?qū)?cè)旋轉(zhuǎn);3分:行走時向?qū)?cè)傾倒;4分:不能自發(fā)行走,意識喪失。
1.3.4指標檢測 在造模清醒后,全部選擇行走時向?qū)?cè)旋轉(zhuǎn)的模型大鼠為有效模型,評分為2分的大鼠,觀察期內(nèi),沒入選及死亡的大鼠予以剔除,剩余每組6只,在手術(shù)后24 h處死前再次評分。
1.3.5腦梗死體積測定 每組6只大鼠,在手術(shù)后24 h,麻醉后處死,快速取出腦組織,放入-20℃冰箱中冷凍15 min, 自額極向后冠狀面切成2 mm厚切片,放入1%TTC溶液中,避光,37℃水浴箱中孵育30 min,PBS液沖洗后置4%多聚甲醛固定。
1.3.6取腦組織做HE染色 取4%多聚甲醛中固定的腦組織,HE染色,光鏡下觀察其病理變化特點。
2.1扎沖十三味丸預(yù)處理對大鼠神經(jīng)功能缺損的影響 MCAO造模手術(shù)結(jié)束后, 除正常組外,選擇所有在術(shù)畢清醒后向?qū)?cè)旋轉(zhuǎn)的腦缺血大鼠,神經(jīng)功能缺損癥狀均為2分,造模成功,24 h后,處死前再次評分,結(jié)果如下:模型組:3分的有3只,4分的有2只,2分的有1只,平均神經(jīng)功能缺損為(3.167±0.408)分;扎沖十三味丸組,1分的有5只,2分的有1只,平均神經(jīng)功能缺損評分為(1.167±0.753)分。經(jīng)過預(yù)處理,扎沖十三味丸組神經(jīng)功能缺損癥有5只明顯好轉(zhuǎn),有1只沒有明顯改變,模型組都有不同程度的嚴重,3只3分,2只4分,1只變化不明顯。
2.2扎沖十三味丸對腦梗死重量的影響 正常組腦組織顯示為紅色,未現(xiàn)蒼白色區(qū)域;模型組右側(cè)半球見部分白色的梗死組織,左側(cè)為紅色,見圖1,扎沖十三味丸組雖然也出現(xiàn)梗死,但梗死體積明顯小于模型組,吸去標本水分,分離白色區(qū)域和紅色區(qū)域,分別稱重,經(jīng)統(tǒng)計學(xué)比較,扎沖十三味丸組腦梗死區(qū)重量及梗死區(qū)/全腦重量均較模型減少,與模型組比較,均存在顯著性差異(P<0.05)。見圖1,表1。
表1 扎沖十三味丸預(yù)處理后大鼠腦梗死重量
圖1 各組大鼠腦梗死組織
2.3扎沖十三味丸預(yù)處理對腦梗死病理學(xué)的影響 模型組大鼠腦組織水腫,結(jié)構(gòu)疏松,染色變淺,細胞稀疏,胞質(zhì)色淺,水腫空泡形成,大量神經(jīng)元變性,且見其內(nèi)有大小不等的圓形或類圓形空泡,可見較多的壞死神經(jīng)元,神經(jīng)元結(jié)構(gòu)模糊或破壞,細胞核結(jié)構(gòu)模糊、固縮、碎裂、扎沖十三味丸組上述癥狀均有明顯改善,神經(jīng)元存活的數(shù)量增多,結(jié)構(gòu)清晰且完整。正常組大鼠腦組織無病理學(xué)改變。見圖2。
圖2 各組大鼠腦梗死病理學(xué)觀察(HE,×100)
大腦中動脈是人類腦梗死最易發(fā)部位,大鼠的大腦中動脈的解剖分布與人類相似,因此我們采用線栓法制作大鼠局灶性大腦中動脈,阻斷血流,造成腦梗死模型,可模擬人類腦梗死的發(fā)病過程。線栓法因為無須開顱,創(chuàng)傷小,不影響缺血后腦水腫和顱內(nèi)壓變化等自然過程而成為應(yīng)用最廣泛的局灶性腦缺血模型〔2〕。
蒙成藥扎沖十三味丸(又名嘎日迪十三 )是蒙醫(yī)臨床常用的傳統(tǒng)方劑之一,此藥出自《蒙醫(yī)經(jīng)典》〔3〕,由訶子、制草烏、石菖蒲、木香、麝香、珊瑚(制)、珍珠(制)、丁香、沉香、禹糧土、磁石(煅)、甘草、肉豆蔻 13 味藥組成,主要功能為祛風(fēng)通竅、舒筋活血、鎮(zhèn)靜安神,在蒙醫(yī)臨床主治半身不遂、左癱右瘓、口眼歪斜、四肢麻木、腰腿不利、言語不清、筋骨疼痛、神經(jīng)麻痹等癥〔4〕。蒙醫(yī)臨床廣泛用于腦中風(fēng)、腦偏癱等多種腦血管疾病,據(jù)報道有減輕神經(jīng)和認知功能障礙的功能的作用〔5,6〕,在以前的研究中我們發(fā)現(xiàn),扎沖十三味丸能減少腦組織缺血大鼠細胞凋亡的作用〔7〕。本研究證實扎沖十三味丸可明顯促進大鼠局灶性腦梗死后神經(jīng)功能恢復(fù),減小腦梗死體積,改善腦梗死后的病理損傷。
4 參考文獻
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