冠心病猝死患者心肌組織纖維連接蛋白及內(nèi)皮素的表達

鄧建平 劉海燕 楊 剛 周振宇 趙景宏

(川北醫(yī)學(xué)院第二臨床醫(yī)學(xué)院 南充市中心醫(yī)院心內(nèi)科，四川 南充 637000)

當(dāng)冠脈血流供應(yīng)不能滿足心肌的需求即可導(dǎo)致心肌缺血缺氧，心肌缺血可由冠脈血流量的減少和心肌對氧的需求增加而引起〔1〕。冠心病屬于動脈硬化性疾病，嚴(yán)重者可以引起心肌梗死、心律失常及心力衰竭等，危及生命。冠狀動脈造影已經(jīng)成為臨床冠心病診斷的金標(biāo)準(zhǔn)，但是因其屬于有創(chuàng)檢查，而且價格昂貴。關(guān)于纖維連接蛋白(FN)、內(nèi)皮素(ET)與冠心病的相關(guān)性研究報道較少。本研究探討冠心病猝死患者心肌組織中FN、ET表達情況。

1 材料與方法

1.1對象 選擇2008年1月至2012年1月我院150份冠狀動脈組織切片標(biāo)本，將冠狀動脈分為正常血管組、穩(wěn)定斑塊組和不穩(wěn)定斑塊組。其中，穩(wěn)定斑塊組50例，男34例，女16例，年齡(61.7±10.9)歲；不穩(wěn)定斑塊組50例，男30例，女20例，年齡(59.7±8.8)歲；正常血管組50例，男32例，女18例，年齡(60.5±9.7)歲；3組研究對象一般資料比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。

1.2檢測方法

1.2.1標(biāo)本采集 3組患者心臟標(biāo)本均沿血流方向剖開，分別于室間隔、左心前壁、右心前壁、心尖取一塊心肌組織，10%甲醛溶液固定，常規(guī)脫水，石蠟包埋、切片(厚4～5 μm)，為防止組織脫片，采用防脫片膠將組織切片貼附載玻片上，60℃烘片30 min固定。分別進行HE染色和免疫組化染色。

1.2.2免疫組織檢測法〔2〕采用MaxVision免疫組化方法對比檢測FN、ET，即用型快捷MaxVisionTM 廣譜試劑盒、ET 兔抗人多克隆抗體、FN 兔抗人多克隆抗體、液體DAB 顯色試劑盒均購自福建邁新公司。具體步驟參照邁新公司試劑盒說明書進行嚴(yán)格操作。采用試劑公司提供的陽性對照片進行對照，均以PBS液代替一抗作為陰性對照。

1.2.3陽性表達圖像分析〔3〕對各組切片免疫組織化學(xué)的染色情況先在Olympus BX41 顯微鏡下觀察，采用Olympus圖像分析軟件(日本Olympus有限公司)對所有切片進行圖像分析，對FN、ET免疫組織化學(xué)染色陽性反應(yīng)產(chǎn)物進行定位半定量檢測。每個部位的陽性反應(yīng)區(qū)域隨機選取5個視野，測量陽性反應(yīng)物區(qū)域、平均吸光度、累積吸光度，然后取其平均值。

2 結(jié) 果

正常心肌組FN、ET均呈陰性表達；穩(wěn)定斑塊組FN呈散在、單個細胞性胞質(zhì)棕褐色著色，ET呈局灶性心肌細胞胞漿陽性表達；不穩(wěn)定斑塊組Fn呈大片狀心肌細胞胞質(zhì)棕褐色著色，ET呈血管平滑肌、血管內(nèi)皮及心肌細胞胞漿呈棕色陽性著色。3組患者心肌中ET、FN陽性反應(yīng)物累積吸光度值比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

表1 3組心肌組織ET、FN染色圖像結(jié)果比較

3 討 論

缺血性心肌病是在嚴(yán)重多支冠狀動脈病變基礎(chǔ)上發(fā)生多發(fā)或復(fù)發(fā)性心肌梗死；或在慢性心肌缺血、營養(yǎng)障礙的情況下，心肌雖仍能維持組織生存，但左心室功能卻持續(xù)地處于低下狀態(tài)之中，冠狀動脈供血恢復(fù)后左心室功能卻可部分或全部恢復(fù)，臨床稱之為心肌冬眠；而冠狀動脈血流已恢復(fù)但心肌功能失常仍暫時存在，需要一段時間方能恢復(fù)，則稱之為心肌頓抑〔4〕。缺血性心肌病可導(dǎo)致散在或彌漫性心肌纖維化及心肌間質(zhì)膠原沉積增加等。心肌缺血早期心肌細胞及其組織結(jié)構(gòu)在形態(tài)學(xué)上無明顯改變,常規(guī)方法檢查不到,冠狀動脈造影又屬于有創(chuàng)檢查，而且價格昂貴。

ET具有強烈地收縮冠狀動脈、腎小動脈;刺激心鈉素的釋放，提高全身血壓;抑制腎素釋放等作用〔5〕。研究證明ET是機體產(chǎn)生的一種內(nèi)源性致?lián)p傷因子，其合成或釋放增加可致冠狀動脈痙攣，加重心肌缺血壞死。當(dāng)較大的冠狀動脈發(fā)生粥樣硬化導(dǎo)致管腔堵塞時，使得局部血流阻力明顯增加，阻塞處遠端的小動脈血管床調(diào)節(jié)達到最大限度的擴張，以減少血流阻力保證有足夠的血流量，如該處冠狀動脈血管擴張儲備已近極限，當(dāng)心肌耗氧量增加時，通過冠狀動脈的擴張增加血流量的能力非常有限，經(jīng)上述多種機制反復(fù)調(diào)控均不能滿足心臟血氧供應(yīng)以致產(chǎn)生心肌缺血〔6，7〕。冠狀動脈痙攣常發(fā)生于有粥樣硬化病變狹窄基礎(chǔ)上，少數(shù)可發(fā)生于形態(tài)正常的冠狀動脈〔8〕。內(nèi)皮細胞功能障礙可早于臨床出現(xiàn)冠心病癥狀或明顯冠狀動脈狹窄病變之前數(shù)年即存在。內(nèi)皮細胞功能完整的冠狀動脈，血小板激活后釋放產(chǎn)物，如FN、ET等以及運動、乙酰膽堿(Ach)等可使血管產(chǎn)生內(nèi)皮依賴性舒張；而內(nèi)皮細胞功能發(fā)生障礙時，上述內(nèi)皮依賴舒張作用減弱，甚至轉(zhuǎn)變?yōu)檠苁湛s效應(yīng)〔9〕。病理條件下內(nèi)皮細胞激活后，內(nèi)皮素-1、ATⅡ等縮血管物質(zhì)生成增加，上述因素可能均參與了冠狀動脈痙攣的發(fā)生〔10〕。另外，由血管內(nèi)皮釋放的內(nèi)皮源性舒張因子(EDRF)及ET在心血管系統(tǒng)中具有強烈生物活性，內(nèi)皮源性舒張因子擴張血管，而ET是最強的血管收縮物質(zhì)，這兩種物質(zhì)的消長，也明顯影響冠狀動脈的張力。進一步使血管腔狹窄程度增加，嚴(yán)重者促發(fā)斑塊破裂，甚至導(dǎo)致冠狀動脈急性閉塞而誘發(fā)急性心肌梗死。

FN為一族高分子糖蛋白，廣泛分布于人體細胞表面和血漿中，有促進巨噬細胞的吞噬功能，促進細胞與纖維基質(zhì)間連接的生理作用。纖連蛋白與機體創(chuàng)傷修復(fù)、組織炎癥、纖維化及硬化過程等有密切關(guān)系〔11〕。實驗證明FN參與了動脈粥樣硬化這一過程。隨著血管硬化程度的增加FN含量呈下降趨勢。血漿FN缺乏會引起微血管完整性的破壞和通透性升高，導(dǎo)致血漿大量外滲，可促進血小板迅速黏附、聚集，形成血小板聚集體，并釋放血小板顆粒成分，形成微血栓。血小板激活后其表面膜糖蛋白Ia，和Ib激活，對血小板的始動接觸起重要作用；血小板膜GPⅡb/Ⅲb受體激活、暴露后，成為纖維蛋白和von Willebrand因子等的結(jié)合部位，導(dǎo)致血小板間的連接并形成血小板聚集體〔12〕。存在粥樣硬化斑塊病變的冠狀動脈，特別是斑塊破裂時，其內(nèi)膜無血栓形成的特性已減弱或喪失血小板激活后釋放的產(chǎn)物TXA2、5-HT以及血小板源性生長因子(PDGF)等除可進一步促進血小板聚集外，尚可引起冠狀動脈痙攣，從而導(dǎo)致血栓不斷進展。

本文結(jié)果證實FN和ET的陽性表達是心肌缺血和損傷的靈敏指標(biāo)，對推斷冠心病猝死具有一定的實際應(yīng)用價值。

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