補(bǔ)腎法對(duì)絕經(jīng)后動(dòng)脈粥樣硬化模型大鼠心肌能量代謝的影響

徐丁潔 徐 洪 仝瑞曉 高 星 成秀梅 杜惠蘭

(河北聯(lián)合大學(xué)中醫(yī)學(xué)院中西醫(yī)臨床教研室，河北 唐山 063000)

女性絕經(jīng)后，卵巢功能衰退，雌激素水平下降，對(duì)血管保護(hù)降低，心腦血管疾病的發(fā)病率增高〔1〕。流調(diào)學(xué)顯示，絕經(jīng)后女性冠心病的發(fā)病率是絕經(jīng)前女性的4倍，以后每增加10歲，冠心病的發(fā)病率增高7倍〔2，3〕。雌激素替代療法(ERT)能顯著降低心血管病發(fā)病率〔4〕，但是研究顯示，ERT對(duì)于已絕經(jīng)10年及已有動(dòng)脈粥樣病變的女性沒(méi)有明顯的保護(hù)作用〔5〕，長(zhǎng)期應(yīng)用還增加了子宮內(nèi)膜癌、血栓形成的風(fēng)險(xiǎn)〔6〕，故此，需要尋找更理想的治療方法及藥物防治絕經(jīng)后女性心血管疾病的發(fā)生。中醫(yī)理論認(rèn)為，女性絕經(jīng)是腎精不足、沖任虧損的表現(xiàn)，臨床采用補(bǔ)腎法治療絕經(jīng)后諸癥，效果顯著〔7〕。能量代謝是一切有機(jī)體功能活動(dòng)的基礎(chǔ)，心肌能量代謝對(duì)心血管疾病的發(fā)生發(fā)展起重要作用〔8〕。本實(shí)驗(yàn)觀察補(bǔ)腎中藥對(duì)絕經(jīng)后動(dòng)脈粥樣硬化模型大鼠心肌能量代謝的影響。

1 材料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 健康SD大鼠，雌性，鼠齡3個(gè)月，體質(zhì)量(190±10)g，由河北醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，清潔級(jí)動(dòng)物，生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK(冀)2008-1-003，合格證號(hào)：1006025。

1.2分組及造模方法〔9〕大鼠60只，適應(yīng)性飼養(yǎng)1 w后，隨機(jī)分為對(duì)照組、模型組、中藥組，每組20只。對(duì)照組：行偽手術(shù)(開(kāi)腹后暴露雙側(cè)卵巢，不予切除，雙側(cè)縫合)+普通飲食。每日灌服生理鹽水1 ml/100 g。模型組和中藥組：行卵巢切除+高脂飼料喂養(yǎng)，卵巢切除后第10天，一次性注射血清蛋白(BSA)，250 mg/kg。模型組每日灌服生理鹽水1 ml/100 g；中藥組每日灌服補(bǔ)腎中藥1 ml/100 g；共12 w。

1.3主要試劑 補(bǔ)腎中藥組成：熟地，山萸肉、山藥、枸杞子、女貞子、肉蓯蓉、覆盆子、菟絲子、當(dāng)歸、白芍、丹參、香附，藥物一次性購(gòu)自石家莊樂(lè)仁堂。藥物共同浸泡40 min，煮沸后文火煎煮60 min，濾出藥液；藥渣加適量水繼續(xù)煎煮40 min，合并兩次濾液，水浴濃縮，放置于4℃冰箱中密閉保存。

雌二醇(E2)、總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)放免試劑盒購(gòu)自天津九鼎醫(yī)學(xué)生物工程有限公司?？捡R斯亮藍(lán)蛋白測(cè)定試劑盒、ATP酶、琥珀酸脫氫酶(SDH)、ATP 標(biāo)準(zhǔn)品檢測(cè)試劑盒購(gòu)自南京建成生物研究所。注射用牛血清蛋白(BAS)購(gòu)自北京萊博生物實(shí)驗(yàn)材料研究所。乙腈為色譜純(美國(guó)迪馬公司)，其他試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純。

1.4取材 12 w后，取材前大鼠禁食24 h，用3%水合氯醛麻醉，從股動(dòng)脈抽血5 ml，3 000 r/min離心20 min，分離血清，-20℃保存，備測(cè)。同時(shí)，無(wú)菌操作，取左心室，冰盤(pán)操作，吸去血跡，投入液氮中，備測(cè)。

1.5指標(biāo)及檢測(cè)方法

1.5.1血清E2、TC、TG、LDL-C測(cè)定 E2、TC、TG、LDL-C均采用放射免疫法檢測(cè)，按各試劑盒說(shuō)明書(shū)操作，專(zhuān)人統(tǒng)一測(cè)定。

1.5.2心肌ATP 酶、SDH活性及ATP含量測(cè)定 取左心室，用冰冷的分離介質(zhì)按重量體積比加9倍生理鹽水，制成10%勻漿，3 000 r/min離心10 min，取上清按照試劑盒說(shuō)明測(cè)定 Na+-K+-ATP 酶、Ca2+-Mg2+-ATP 酶及SDH活性，組織蛋白的測(cè)定采用考馬斯亮藍(lán)法。采用高效液相方法測(cè)定心肌ATP含量，美國(guó)Agilent-1200高效液相色譜儀，色譜柱為Dikma Diamonsil C18，流動(dòng)相為乙腈-0.1%磷酸溶液，柱溫30℃，流速為0.8 ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng) 254 nm。

1.6統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS16.0軟件進(jìn)行完全隨機(jī)設(shè)計(jì)的單因素方差分析。

2 結(jié) 果

2.1動(dòng)物一般狀況 實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，對(duì)照組大鼠外觀精神狀況佳，毛色白而光澤，反應(yīng)靈敏，體重增加正常；模型組大鼠毛色無(wú)光、精神不振、體態(tài)臃腫、活動(dòng)量少；中藥組大鼠一般狀況介于兩者之間。

2.2各組血清E2、TC、TG、LDL-C比較 與對(duì)照組比較，模型組E2降低，TC、TG、LDL-C升高(P均<0.05)。經(jīng)補(bǔ)腎中藥治療后，與模型組比較，中藥組TC、TG、LDL-C降低(P均<0.05)；與對(duì)照組比較，中藥組E2下降(P<0.05)。見(jiàn)表1。

表1 各組間血清E2、TC、TG、LDL-C比較±s，n=20)

2.3各組之間心肌ATP酶、SDH活性及ATP含量的比較 與對(duì)照組比較，模型組Na+-K+-ATP 酶、Ca2+-Mg2+-ATP酶、SDH活性、ATP含量均有不同程度降低(均P<0.05)。經(jīng)中藥治療后，與模型組比較，中藥組Na+-K+-ATP 酶、Ca2+-Mg2+-ATP酶、SDH活性、ATP含量升高(P均<0.05)；與對(duì)照組比較，中藥組Ca2+-Mg2+-ATP 酶差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表2。

表2 各組之間卵巢ATP酶、SDH活性及ATP含量比較±s，n=20)

3 討 論

女性絕經(jīng)后心血管疾病的發(fā)生是一種多因素所致、緩慢復(fù)雜的病理過(guò)程，由于體內(nèi)雌激素水平下降，機(jī)體神經(jīng)、內(nèi)分泌、免疫功能、骨代謝、血脂、自由基代謝等繼發(fā)性改變，血管反應(yīng)性異常，動(dòng)脈粥樣硬化形成，繼而引發(fā)心血管疾病〔10，11〕。中醫(yī)無(wú)動(dòng)脈粥樣硬化或者冠心病病名，根據(jù)其臨床表現(xiàn)，多屬于“胸痹”“心悸”“真心痛”等病證范疇〔12〕，《素問(wèn)·上古天真論》記載“女子七七任脈虛，太沖脈衰少，天癸竭，地道不通，故形壞而無(wú)子也”，故絕經(jīng)后女性心血管疾病的發(fā)生本源于“腎精虧損”〔13〕，在此理論指導(dǎo)下，臨床用補(bǔ)腎中藥為主治本，兼加其他藥物治表，標(biāo)本兼治，多能奏效。實(shí)驗(yàn)也證實(shí)，補(bǔ)腎中藥通過(guò)調(diào)節(jié)內(nèi)分泌免疫功能，抑制炎癥反應(yīng)、修復(fù)氧自由基損傷等多個(gè)作用環(huán)節(jié)發(fā)揮防治絕經(jīng)后女性心血管疾病發(fā)生的作用〔14，15〕。

能量代謝是一切有機(jī)體功能活動(dòng)的基礎(chǔ)，心臟通過(guò)能量代謝將儲(chǔ)存于脂肪酸和葡萄糖中的化學(xué)能轉(zhuǎn)化為機(jī)械能，為心臟的收縮和舒張等耗能過(guò)程提供能量，故心肌能量代謝在心血管疾病的發(fā)生發(fā)展過(guò)程起重要作用〔16，17〕。本實(shí)驗(yàn)以能量代謝為切入點(diǎn)，觀察絕經(jīng)后動(dòng)脈粥樣硬化模型大鼠及補(bǔ)腎中藥干預(yù)下心肌能量代謝的變化。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示絕經(jīng)后心血管疾病的發(fā)生和心肌細(xì)胞線(xiàn)粒體ATP的合成障礙有關(guān)。經(jīng)補(bǔ)腎中藥治療后，提示補(bǔ)腎中藥可以增加心肌能量?jī)?chǔ)備，提高心肌工作效率，雖然E2升高不明顯，但是通過(guò)改善心肌能量代謝，直接或間接調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝，從而對(duì)絕經(jīng)后動(dòng)脈粥樣硬化起到良好的防治作用，從能量代謝角度完善了補(bǔ)腎中藥防治女性絕經(jīng)后心血管疾病發(fā)生的機(jī)制，揭示中藥多靶點(diǎn)、多環(huán)節(jié)治療疾病的作用機(jī)制。

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