清肺化痰丸的質(zhì)量標準研究

昆明中藥廠有限公司，云南 昆明 650228

清肺化痰丸的質(zhì)量標準研究

孫蓉田婷婷錢進

昆明中藥廠有限公司，云南 昆明 650228

目的建立清肺化痰丸的質(zhì)量標準。方法采用薄層色譜法對制劑中的陳皮、枳殼、桔梗、麻黃、黃芩進行定性鑒別，并用高效液相色譜法測定制劑中黃芩苷的含量。結(jié)果定性鑒別方法能檢出陳皮、枳殼、桔梗、麻黃、黃芩等藥材；黃芩苷在0.1136～1.704μg 范圍內(nèi)，呈良好的線性關(guān)系(γ=0.99996)，平均回收率為100.56%(RSD=1.91%)；結(jié)論該方法簡便、準確，重現(xiàn)性好，可用于清肺化痰丸的質(zhì)量控制。

清肺化痰丸；質(zhì)量標準；高效液相色譜法；黃芩苷

清肺化痰丸由黃芩、桔梗、麻黃、甘草、枳殼、陳皮、苦杏仁等15味藥組成，具有降氣化痰、止咳平喘的功效，用于肺熱咳嗽，痰多作喘，痰涎壅盛，肺氣不暢等癥。該制劑載于部頒中藥成方制劑第十二冊[1]，現(xiàn)行標準中僅有1項薄層鑒別，無含量測定，為了有效控制其內(nèi)在質(zhì)量，對處方中陳皮、枳殼、桔梗、麻黃、黃芩進行薄層色譜鑒別，采用高效液相法對黃芩中黃芩苷進行含量測定。經(jīng)試驗證明，該方法簡便，結(jié)果準確，專屬性好，可作為控制該制劑質(zhì)量的方法。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 美國Agilent1100高效液相色譜儀(四元泵)，可變紫外檢測器(G1314A VWD)，TCM柱溫控制系統(tǒng)，Agilent色譜工作站。

1.2 試藥 黃芩苷(批號：110715-200815)、鹽酸麻黃堿(批號：171241-201007)、陳皮(批號：120969-200507)、枳殼(批號：120981-201104)、黃芩苷(批號：110715-200514)、桔梗(批號：121028-200507)等對照品均購于中國藥品生物制品檢定所。甲醇為色譜純，水為娃哈哈純凈水，其它試劑為分析純。清肺化痰丸樣品(水蜜丸，批號：111130、110549、110615、111218；大蜜丸，批號：110204、110910、111260)由昆明中藥廠有限公司提供。陰性對照樣品自制。

2 方法與結(jié)果

2.1 薄層鑒別

2.1.1 陳皮、枳殼的鑒別 取本品水蜜丸10g，研細，加水10ml，攪勻；或取大蜜丸18g，剪碎，加硅藻土8g、水6ml，研勻，再加水15ml，超聲處理15min，加乙酸乙酯30ml，攪勻，超聲處理30min，傾出上清液，殘渣再加乙酸乙酯15ml，超聲處理10min，傾出上清液，合并上清液，用氨試液洗滌2次，每次15ml，再用水洗滌2次，每次15ml，乙酸乙酯液蒸干，殘渣加乙酸乙酯1ml使溶解，作為供試品溶液。取陳皮對照藥材、枳殼對照藥材各0.5g，分別加乙酸乙酯20ml，超聲處理20min，濾過，濾液蒸干，殘渣加乙酸乙酯1ml使溶解，作為對照藥材溶液。另分別取缺陳皮的陰性對照樣品、缺枳殼的陰性對照樣品、缺陳皮和枳殼的陰性對照樣品，同供試品制備方法制得陰性對照溶液。按《中國藥典》一部附錄VI B進行薄層色譜試驗，吸取供試品溶液及陰性對照液8～12μl、對照藥材溶液各5μl，分別點于同一以含1%氫氧化鈉溶液為黏合劑的硅膠G薄層板上，以正己烷-丙酮-乙酸乙酯(3∶1∶3)為展開劑，展開，取出晾干，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光主斑點，缺陳皮和枳殼的陰性對照無干擾。結(jié)果見圖1、圖2。

2.1.2 麻黃的鑒別 取本品水蜜丸10g，研細；或大蜜丸18g，剪碎，加硅藻土6g，研勻，加濃氨溶液2ml，乙醚50ml，加熱回流30min，濾過，濾液加鹽酸乙醇液(1→20)4ml，搖勻，蒸干，殘渣加甲醇1ml使溶解，作為供試品溶液。取鹽酸麻黃堿對照品，加甲醇制成每1ml含1mg溶液，作為對照品溶液。另取缺麻黃的陰性對照樣品，同供試品制備方法制得陰性對照溶液。按《中國藥典》一部附錄VI B進行薄層色譜試驗，吸取供試品溶液及陰性對照液10～15μl、對照品溶液5μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以氯仿-甲醇-濃氨水(20∶3.5∶0.5)為展開劑，展開，取出晾干，噴以0.5%茚三酮乙醇溶液，在105℃加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點，陰性對照無干擾。結(jié)果見圖3。

2.1.3 桔梗的鑒別 取本品水蜜丸10g，研細；或取大蜜丸18g，剪碎，加硅藻土4g，研勻，加正丁醇50ml，超聲處理30min，濾過，濾液蒸干，殘渣加30ml水微熱溶解，用石油醚(60～90℃)洗滌2次，每次15ml，棄去醚液，水液加7%硫酸乙醇溶液10ml，加熱回流3小時，放冷，用氯仿振搖提取2次，每次30ml，合并氯仿液，加水40ml洗滌，棄去洗液，氯仿液用無水硫酸鈉2g脫水，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇1ml使溶解，作為供試品溶液。取桔梗對照藥材1g，加7%硫酸乙醇-水(1∶3)混合液20ml，加熱回流3h，放冷，濾過，濾液用氯仿振搖提取2次，每次20ml，合并氯仿液，加水20ml洗滌，棄去洗液，氯仿液用無水硫酸鈉2g脫水，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇1ml使溶解，作為對照藥材溶液。另取缺桔梗的陰性對照樣品，同供試品制備方法制得陰性對照溶液。按《中國藥典》一部附錄VI B進行薄層色譜試驗，吸取供試品溶液、陰性對照液、對照藥材溶液各15～20μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以氯仿-乙醚(1∶1)為展開劑，展開，取出晾干，噴10%硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點，陰性對照無干擾。結(jié)果見圖4。

2.1.4 取本品水蜜丸6g，研細；或取大蜜丸9g，剪碎，加硅藻土4g，研勻，加乙醇15ml，超聲處理30min，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇2ml使溶解，作為供試品溶液。另取黃芩苷對照品，加甲醇制成每1ml含1mg溶液，作為對照品溶液。按《中國藥典》一部附錄VI B進行薄層色譜試驗，吸取供試品溶液5～10μl，對照品溶液5μl，分別點于同一以含4%醋酸鈉的羧甲基纖維素鈉溶液為黏合劑的硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水(5∶3∶1∶1)為展開劑，薄層板置展開缸中預飽和15min，展開，取出，晾干，噴以1%三氯化鐵乙醇試液，在日光下檢視。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點，陰性對照無干擾。結(jié)果見圖5。

2.2 含量測定

2.2.1 色譜條件 色譜柱：Hypersil ODS C18柱(4.0×250mm，5μm)；流動相：甲醇-0.3%磷酸(39∶61)；流速：1.000ml·min-1；檢測波長：278nm；柱溫：30℃。理論板數(shù)按黃芩苷峰計算不低于3000。此條件黃芩苷峰與其它組分均能達到較好分離，陰性對照樣品對黃芩苷峰無干擾。見圖6。

2.2.2 供試品溶液的制備 取本品水蜜丸適量，研細，取約0.3g，精密稱定，或取大蜜丸適量，剪碎，取約0.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入50%甲醇25ml，密塞，稱定重量，超聲處理(功率160w，頻率50KHz)30min，取出，放冷，再稱定重量，用50%甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.2.3 陰性對照溶液的制備 取處方中除黃芩外的其他藥材，按處方比例及制法和工藝要求制備缺黃芩的陰性樣品，照含量測定項下供試品溶液的制備方法制成陰性對照溶液。

2.2.4 對照品溶液的制備 精密稱取黃芩苷對照品適量，加甲醇制成每1ml含0.568mg的溶液，即得。

2.2.5 線性關(guān)系考察 精密取上述對照品溶液分別加甲醇稀釋成濃度為11.36、22.72、45.44、113.6、170.4g·ml-1的對照品溶液。分別精密吸取上述溶液各10μl，按上述色譜條件測定峰面積，以峰面積值為縱坐標，黃芩苷(μg)進樣量為橫坐標作線性回歸，繪制標準曲線，得回歸方程為：Y=3322.39412X-26.30597(r=0.99996)。結(jié)果表明，黃芩苷在0.1136μg～1.704μg之間具有良好的線性關(guān)系。

2.2.6 精密度試驗 分別精密吸取黃芩苷對照品溶液(45.44μg·ml-1)各10μl，按測定方法連續(xù)進樣6次，測定黃芩苷峰面積。RSD為0.55%。

2.2.7 穩(wěn)定性試驗 取同一供試品溶液，分別于0、5、9、13h各進樣10μl，測定峰面積值，RSD=0.87%，結(jié)果表明供試品溶液中黃芩苷在13h內(nèi)穩(wěn)定。

2.2.8 重復性試驗 取批號為111218的清肺化痰丸，按照供試品制備方法分別制備9份供試品溶液，分別進樣，結(jié)果測得黃芩苷含量分別為4.1027、4.2397、4.2173、4.0447、4.1742、4.0875、4.1020、4.0910、4.2249mg·g-1，黃芩苷平均含量為4.1427 mg·g-1， RSD為1.73%。

2.2.9 回收率試驗 取已知含量的清肺化痰丸樣品(批號：111218，黃芩苷含量為4.1427mg·g-1)9份，精密稱定，分別添加濃度為0.568mg·ml-1的黃芩苷對照品溶液0.6、1.2、1.8ml，按含量測定方法測定黃芩苷含量，計算回收率，結(jié)果(見表1)表明，本方法準確度高。

2.2.10 耐用性試驗 取清肺化痰丸同一批樣品，照樣品測定方法，進行耐用性試驗。分別于270nm、278nm、285nm的波長測定樣品中黃芩苷含量，RSD為0.34%；分別于柱溫為25℃、30℃、35℃時測定樣品中黃芩苷含量，RSD為1.17%；分別于不同的流速(0.900、1.000、1.100ml·min-1)測定樣品中黃芩苷含量，RSD為0.52%；采用不同比例的流動相測定樣品中的黃芩苷含量，RSD為0.80%；采用三種不同批號和廠牌的同類型色譜柱測定樣品中黃芩苷含量，RSD為0.96%。測定結(jié)果表明，本測定方法耐用性良好。

表1 加樣回收率試驗結(jié)果

2.2.11 樣品測定 取多個批號清肺化痰丸樣品，按上述方法測定，結(jié)果見表2。

表2 樣品含量測定結(jié)果

3 討論

3.1 在陳皮、枳殼的薄層色譜鑒別中，由于兩者成份較相似，經(jīng)多次試驗，換用不同的提取方法及展開劑，均無法消除陳皮和枳殼的相互干擾，采用本文方法，缺陳皮和枳殼的雙陰性對照樣品無干擾，有一定質(zhì)控意義，故采用。陳皮、枳殼的薄層色譜鑒別，供試品溶液的制備方法曾采用：取本品加乙酸乙酯超聲提取2次，提取液合并，加水洗滌，取乙酸乙酯液蒸干，加甲醇溶解作為供試品溶液，結(jié)果供試品色譜雜質(zhì)較多，通道顏色較深，有時會遮住熒光斑點，影響特征斑點的檢視；后改為將乙酸乙酯液加氨試液洗滌，結(jié)果供試液色譜雜質(zhì)明顯減少，特征斑點清晰、明顯。薄層板比較了硅膠G板、和以含1%氫氧化鈉溶液為黏合劑的硅膠G板，后者展開效果較好，故選用。

3.2 方中桔梗的薄層色譜鑒別，供試品溶液的制備方法曾比較了多種：曾參照《中國藥典》[2]，加水-氯仿-鹽酸(10∶10∶3)的混合溶液回流提取，但供試品色譜中目標斑點拖尾嚴重，不易檢視；換用7%硫酸乙醇-水(1∶3)混合溶液回流提取，提取液用氯仿振搖萃取，氯仿液再加水洗滌，結(jié)果特征斑點圓整，對應良好，但萃取時溶液乳化嚴重，難以分層或分層時間很長；采用本文鑒別條件，萃取時易分層，供試品色譜中，對應斑點明顯，雜質(zhì)少，分離效果好，陰性無干擾。

3.3 對黃芩苷的甲醇溶液在190～500nm波長范圍內(nèi)進行掃描，黃芩苷在278nm和315nm處有最大吸收，經(jīng)試驗，清肺化痰丸中黃芩苷峰的分離度、對稱性在278nm處較好，故選擇278nm作為黃芩苷的檢測波長。

3.4 含量測定試驗中對供試品溶液的提取溶劑(甲醇、50%甲醇、70%乙醇)進行了研究。結(jié)果表明，50%甲醇、70%乙醇提取的黃芩苷含量較高，但以50%甲醇提取的黃芩苷峰分離度和峰形較好。對樣品的提取時間進行比較試驗，結(jié)果表明超聲處理30min基本提取完全。

[1]中華人民共和國衛(wèi)生部藥典委員會.中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標準(中藥成方制劑第十二冊)[S]. 1997.176.

[2]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[M].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010.

孫蓉，女，高級工程師，研究方向：中藥制劑工藝及質(zhì)量控制。E-mail:sunrong09@hotmail.com。

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1007-8517(2014)13-0016-03

2014.04.26)