花生殼醇提物鎮(zhèn)咳、祛痰及平喘作用研究

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1.保山中醫(yī)藥高等專科學校，云南 保山 678000；2.大理學院藥學與化學學院，云南 大理 671000

花生殼醇提物鎮(zhèn)咳、祛痰及平喘作用研究

趙健榮1郭美仙2劉曉波2*

1.保山中醫(yī)藥高等專科學校，云南 保山 678000；2.大理學院藥學與化學學院，云南 大理 671000

對花生殼醇提物和木犀草素進行鎮(zhèn)咳、祛痰及平喘作用的比較研究。方法：濃氨水引咳法、小鼠酚紅祛痰法、豚鼠離體氣管條法，觀察花生殼醇提物和木犀草素的鎮(zhèn)咳、祛痰及平喘作用。結(jié)果：花生殼醇提物能延長小鼠咳嗽潛伏期和減少咳嗽次數(shù)，而木犀草素無明顯作用；花生殼醇提物及木犀草素能明顯增加小鼠呼吸道酚紅的排泌量；花生殼醇提物對乙酰膽堿及磷酸組胺致痙的豚鼠離體氣管平滑肌有明顯的解痙作用，且作用優(yōu)于木犀草素。結(jié)論：花生殼醇提物有明顯的鎮(zhèn)咳、祛痰及平喘作用。

花生殼醇提物；木犀草素；鎮(zhèn)咳；祛痰；平喘

花生殼(Peanut hull)是豆科一年生草本植物花生(Arachis hypogeae L.)的干燥果殼，我國有豐富的資源?；ㄉ鷼ぴ诿耖g做中草藥，可治療哮喘、痰多、高血壓等，其標準收載于1996年版《云南省藥品標準》[1]?；ㄉ鷼さ挠行С煞质且阅鞠菟?luteolin)為主的黃酮類化合物，現(xiàn)代研究表明，花生殼中黃酮具有降脂減肥、抗自由基、抗氧化、抑菌、抗病毒等作用[2]。但并未見花生殼有鎮(zhèn)咳、祛痰及平喘作用的報道，為此本文對花生殼和木犀草素的鎮(zhèn)咳、祛痰及平喘作用進行實驗研究。

1 材料與儀器

1.1 動物 KM小鼠，清潔級，體重18～22 g，雌雄各半，由昆明醫(yī)科大學實驗動物中心提供，合格證：SCXK(滇)2011-0004。豚鼠，普通級，體重300～400 g，雌雄各半。

1.2 藥品與試劑 花生殼(云南大理賓川縣)；木犀草素(中國生物制品檢定所，批號：111520-200201)；氯化乙酰膽堿(Ach，上海愛思試劑有限公司，批號：20061130)；磷酸組胺(上海麗珠東風生物技術(shù)有限公司，批號060518)；咳必清片(蘇州醫(yī)藥集團有限公司，批號：061011)；氯化銨片(上海醫(yī)藥有限公司信誼制藥總廠，批號：070129)；氨茶堿片(吉林敖東延邊藥業(yè)股份有限公司，批號：060911)；苯酚紅(北京市朝陽區(qū)旭東化工廠產(chǎn)品，批號：990669)；濃氨水(上海試劑一廠綜合經(jīng)營公司產(chǎn)品，濃度28%，AR級，批號：20020327)。

1.3 儀器 ZTW-40型真空提取濃縮機(天津三延精密機械有限公司)；RE-52-99旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海亞榮生化儀器廠)；MP120-1電子天平(上海第二天平儀器廠)；420-AI超聲霧化器(上海魚躍醫(yī)療設(shè)備有限公司總經(jīng)銷)；756MC紫外分光光度計(上海精密儀器科學有限公司)；HW-400 恒溫平滑肌槽；BL-420E+生物機能實驗系統(tǒng)(四川成都泰盟科技有限公司)。

2 實驗方法

2.1 藥物的提取[3]取鮮花生，洗凈去仁，經(jīng)陰干去除水分，粉碎，用ZTW-40 型真空提取濃縮機，75%乙醇溶液65℃減壓提取3 次，每次1.5 h，提取液合并后至旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮成浸膏。經(jīng)比色法測得總黃酮含量3.81%，用時浸膏分別配成相當于生藥材3.9%，7.8%，15.6%的混懸液備用，相當于總黃酮給藥量的低(30 mg/kg)、中(60 mg/kg)、高(120 mg/kg)劑量。

2.2 鎮(zhèn)咳作用 參照文獻[4-5]。昆明種小鼠，體重18～22 g，雌雄各半，14%氨水定量超聲霧化5 s，記錄小鼠從接受噴霧開始至出現(xiàn)咳嗽的時間，以及2 min 內(nèi)的咳嗽次數(shù)，咳嗽標準為，腹肌收縮，同時張大嘴，噴霧2 min內(nèi)不咳嗽者舍棄。合格小鼠于兩天后隨機分7組，每組12 只，雌雄各半。低、中、高劑量花生殼醇提物組，木犀草素組(120 mg/kg)，CMC-Na組(100 mg/kg)，咳必清組(20 mg/kg)，N.S.對照組。前四組均用0.5% CMC-Na 溶液配成混懸液，各組均i.g.給予20 ml/kg的相應(yīng)試劑，連續(xù)5 d，每天1次，于末次給藥后30 min，將小鼠放入1000 ml燒杯中，開啟超聲霧化器，均勻地向容器中產(chǎn)生氨氣5 s，觀察小鼠咳嗽動作，記錄潛伏期及2 min內(nèi)咳嗽的次數(shù)。

2.3 祛痰作用

2.3.1 測定酚紅最大吸收峰 參照文獻[6]，在100 ml容量瓶內(nèi)用5%NaHCO3溶液精確配制濃度為1 mg/ml 的酚紅母液，再稀釋成0.01、0.1、0.3、0.5、0.7、1、3、5、10 μg/ml溶液，分裝于9個10 ml容量瓶內(nèi)。任取兩管溶液，以未知濃度的酚紅0管作對照，用756型紫外分光光度計在波長420～570 nm范圍內(nèi)進行波長掃描。結(jié)果酚紅在546 nm 處有最大吸收峰。

2.3.2 繪制酚紅標準曲線 將上述配制的酚紅溶液分別在546 nm波長處測光密度值，結(jié)果各管酚紅含量與光密度之間的直線相關(guān)有極顯著意義(相關(guān)系數(shù)r=0.9999，p<0.001)，各數(shù)據(jù)及線性方程如表1。

表1 酚紅標準曲線方程

2.3.3 對小鼠呼吸道酚紅排泌量的影響 參照文獻[6-8]，取體重18～22 g 小鼠84只，隨機分7組，每組12只，雌雄各半。低、中、高劑量花生殼醇提物組，木犀草素組(120 mg/kg)、CMC-Na組(100 mg/kg)、氯化銨組(120 mg/kg)、N.S.對照組。前四組均用0.5% CMC-Na 溶液配成混懸液，各組均i.g.給予20 ml/kg的相應(yīng)試劑，連續(xù)5 d，每天1次。實驗前小鼠禁食不禁水8～12 h，第3天小鼠給藥30 min 后，i.p.酚紅溶液0.5 ml/只，30 min 后脫椎處死，解剖分離出氣管，剝?nèi)夤苤車M織，剪下自甲狀軟骨至氣管分支處的一段氣管，用0.5 ml 5%NaHCO3沖洗3次于10 ml離心管中，再加2 ml 5% NaHCO3沖洗管壁，離心5 min，取上清液，用756型分光光度計與546 nm處測吸光度A值，據(jù)回歸方程求出濃度(μg/ml)，數(shù)據(jù)t檢驗。

2.4 平喘作用 參考文獻[6-9]，取豚鼠24只，體重300～400g，雌雄各半，用木棰猛擊豚鼠頭部致死，迅速切開頸部皮膚，分離氣管。從甲狀軟骨下至氣管下端分叉處將整段氣管剪下，放入盛有營養(yǎng)液的培養(yǎng)皿中(營養(yǎng)液預先用氧氣飽和)，仔細剔除氣管周圍的結(jié)締組織，將氣管剪成寬2～3 mm，長4 cm的螺旋條，一段氣管制成2～3個螺旋條，在氣管條一端用縫針穿一根線，將其固定于通氣鉤上，小心放入藥液筒內(nèi)，用氧氣球與HW-400恒溫平滑肌槽(37±0.1℃恒溫)的氧氣輸入口連接，調(diào)節(jié)恒溫平滑肌槽氣量調(diào)節(jié)閥，保持每分鐘通入40～60個氣泡，另一端用鐵鉤連于換能器上，調(diào)節(jié)其前負荷在2.0 g左右，讓氣管在營養(yǎng)液中平衡90 min，用BL-420E+生物機能實驗系統(tǒng)記錄一段正常曲線，然后加入磷酸組胺(60 μg/ml)或Ach(30 μg/ml)，當氣管平滑肌張力升到最高點時，在各個標本中分別加入以下藥液：N.S.、氨茶堿、CMC-Na、木犀草素、低、中、高劑量花生殼醇提物。觀察比較各組標本給藥后3 min內(nèi)曲線下降幅度，并按下式求出其解痙百分率：

解痙百分率(%)=[(給藥前張力-給藥后張力)÷(給藥后張力-前負荷張力)]×100%

3 結(jié)果及結(jié)論

3.1 花生殼醇提物的鎮(zhèn)咳作用 由表2可知，低、中、高劑量花生殼醇提物組及咳必清組對濃氨水引起的小鼠咳嗽有明顯的鎮(zhèn)咳作用，并能明顯延長潛伏期及減少咳嗽次數(shù)，但木犀草素組并沒有明顯的鎮(zhèn)咳作用。

表2 花生殼醇提物對小鼠濃氨水所致咳嗽的影響±s，n=12)

與N.S.組比較*P<0.05,**P<0.01；與咳必清組比較#P<0.05，##P<0.01.

3.2 花生殼醇提物的祛痰作用 由表3可知，中、高劑量花生殼醇提物組及木犀草素組能明顯增加小鼠呼吸道酚紅的排泌量，顯示有較好的排痰作用，且高劑量作用強于木犀草素。

表3 花生殼醇提物對小鼠呼吸道酚紅排泌量的影響

與N.S.組比較*P<0.05,**P<0.01；與咳必清組比較#P<0.05，##P<0.01.

3.3 花生殼醇提物的平喘作用 由表4可知，花生殼醇提物低、中、高劑量及木犀草素組能使組胺及Ach致痙的豚鼠氣管螺旋條平滑肌松弛，并隨劑量的增加而增強。高劑量組與氨茶堿組相當，木犀草素組比低劑量組作用強，中、高劑量作用明顯強于木犀草素組。

4 討論

我國是花生生產(chǎn)大國，年產(chǎn)花生殼近4000 kt，占花生果重的30%左右。這些花生殼除了少部分被用作飼料和燃料外，大部分被扔掉，造成資源的極大浪費?；ㄉ鷼さ挠行С煞质且阅鞠菟貫橹鞯狞S酮類化合物，其中木犀草素含量約為0.3%[10]。木犀草素為白毛夏枯草或青蘭的有效成分，屬弱酸性四羥基黃酮化合物，具有抗炎、抗過敏和免疫調(diào)節(jié)作用[11]。Das M等[12]研究木犀草素對卵白蛋白致敏小鼠哮喘的作用，指出低劑量木犀草素在致敏過程中和致敏后都能顯著減輕哮喘的癥狀，減輕支氣管收縮和氣道高反應(yīng)性。本實驗結(jié)果也表明，木犀草素能使組胺及乙酰膽堿致痙的豚鼠氣管螺旋條平滑肌松弛；并能明顯促進小鼠氣管腺體的分泌。結(jié)果還表明花生殼醇提物比木犀草素作用更明顯，且花生殼醇提物能明顯延長氨水引起小鼠咳嗽的潛伏期及減少咳嗽次數(shù)，具有良好的鎮(zhèn)咳、祛痰、平喘作用，為臨床治療肺部疾病提供了藥理實驗依據(jù)。

表4 花生殼醇提物對豚鼠離體氣管條的影響±s,n=8)

與氨茶堿比較*P<0.05,**P<0.01；組胺終濃度(3 μg/ml)，乙酰膽堿終濃度(1.5 μg/ml).

花生殼醇提物的鎮(zhèn)咳、祛痰、平喘藥理作用比木犀草素效果更佳，可能由于花生殼醇提物中含有某些其它具有鎮(zhèn)咳、祛痰、平喘藥理作用的成分，致使其作用增強；也可能是多種成分綜合作用的結(jié)果，這也是本實驗的目標所在。但是花生殼醇提物中總黃酮的鎮(zhèn)咳、祛痰及平喘作用是否比花生殼總醇提物更強或相當，則有待通過進一步實驗來證明。

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Antitussive,expectorantandanti-asthmaticeffectoftheethanolextractfrompeanuthull

ZHAO Jian-rong1,GUO Mei-xian2,LIU Xiao-bo2*

1.Baoshan college of traditional Chinese medicine baoshan,China,678000;2.College of Pharmacy and Chemistry, Dali University, Dali 671000,China.

To observe the effects of relieving cough, removing the phlegm and calming panting of Lute Olin and the ethanol extract from peanut hull. Methods: The effects of relieving cough, removing the phlegm and calming panting of Lute Olin and the ethanol extract from peanut hull were researched by the method of strong aqua leading to cough, the method of phenol red expectorant in mice, the method of trachea in vitro of guinea pigs. Results: The ethanol extract from peanut hull could prolong cough incubation period and decrease the numbers of cough in mice, but the Lute Olin has no obvious effect; Lute Olin and the ethanol extract from peanut hull can significantly increase the amount of phenol red in respiratory of mice; the ethanol extract from peanut hull have a obvious spasmolysis effects on the isolated tracheal smooth muscle’s spasm induced by acetylcholine and histamine phosphate and the effect is better than that of Lute Olin. Conclusion: The ethanol extract from peanut hull has obvious effects of relieving cough, removing the phlegm and calming panting.

Ethanol extract from peanut hull;Lute Olin;Relieve cough;Remove phlegm;Calm pant

趙健榮(1978-)，女，白族，講師，保山中醫(yī)藥高等專科學校。E-mail:1454563266@qq.com

劉曉波(1972-)，男，苗族，副教授，從事中藥藥理學研究。E-mail:yndlxb@126.com

R285

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1007-8517(2014)10-0011-03

2014.02.12)