596例新生兒溶血病血型血清學(xué)檢測結(jié)果分析

1.廣東省東莞市中心血站，廣東 東莞 523930；2.廣東省東莞市東華醫(yī)院輸血科,廣東 東莞 523110

596例新生兒溶血病血型血清學(xué)檢測結(jié)果分析

林棟1胡應(yīng)明1何子毅1陳寶嬋2

1.廣東省東莞市中心血站，廣東 東莞 523930；2.廣東省東莞市東華醫(yī)院輸血科,廣東 東莞 523110

目的分析新生兒溶血病血型血清學(xué)檢測結(jié)果，探討采集標(biāo)本時間與新生兒溶血病陽性率的關(guān)系。方法選取596例新生兒溶血病標(biāo)本，進(jìn)行新生兒溶血病溶血三項(xiàng)檢測、同時對母親標(biāo)本進(jìn)行不規(guī)則抗體篩查。結(jié)果596例新生兒溶血病標(biāo)本中陽性429例，陽性率71.98%；ABO血型系統(tǒng)的新生兒溶血病409例，占陽性標(biāo)本的95.33%；Rh血型系統(tǒng)的新生兒溶血病18例，占4.20%；其它不規(guī)則抗體2例占0.47%；4天后采集標(biāo)本檢測新生兒溶血病陽性率較低(P<0.05)。結(jié)論本市新生兒溶血病發(fā)生主要為ABO血型系統(tǒng)，高達(dá)95.33%，新生兒溶血病在患兒出生后4天內(nèi)采集的標(biāo)本檢測陽性率較高。

新生兒溶血病；血型血清學(xué)

新生兒溶血病(Hemolytic disease of the newborn，HDN)是臨床新生兒科常見的疾病，引發(fā)該病的原因很多，包括同種被動免疫、紅細(xì)胞膜缺陷、紅細(xì)胞酶缺乏及感染等。其中的同種被動免疫(ABO、Rh血型不合)最為重要，它是由于母體內(nèi)存在與其胎兒紅細(xì)胞不配合的IgG性質(zhì)的抗體，引起的 HDN，診斷它最有力的證據(jù)是證實(shí)患兒紅細(xì)胞被來自孕婦的IgG抗體所致敏。本站輸血研究室對596例疑似 HDN 的送檢標(biāo)本進(jìn)行溶血三項(xiàng)(直接抗人球蛋白試驗(yàn)、血清游離抗體測定、紅細(xì)胞抗體放散試驗(yàn))血型血清學(xué)檢測，現(xiàn)將結(jié)果進(jìn)行回顧性分析，具體報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

1.1.1 選取2011年1月至2013年6月我市各醫(yī)院送至本站輸血研究室，有新生兒高膽紅素血癥、疑似新生兒溶血病患兒的標(biāo)本2～3ml,同時送父母親標(biāo)本各3ml，均用EDTA抗凝管抗凝，共596例。

1.1.2 儀器 戴安娜孵育器、戴安娜卡式離心機(jī)(西班牙戴安娜公司)、KA一2200離心機(jī)(日本久保田公司)；HZS-H水浴振蕩器(哈爾濱東聯(lián)電子技術(shù)開發(fā)有限公司)。

1.1.3 試劑 微柱凝膠抗球蛋白卡(西班牙戴安娜公司)；抗A、抗B血型定型試劑、篩選細(xì)胞、譜紅細(xì)胞 (上海血液生物醫(yī)藥有限責(zé)任公司)；單克隆抗-D(IgM/ IgG)(Millipore(UK) Ltd)；血型反定型紅細(xì)胞(自配)。

1.2 方法

1.2.1 參照方法 ABO/ Rh血型檢測選用鹽水試管法、新生兒直接抗球蛋白試驗(yàn)、游離抗體試驗(yàn)、釋放試驗(yàn)選用微柱凝膠法，所有操作均執(zhí)行試劑說明書及《全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》[1]。

1.2.2 母親和(或)新生兒紅細(xì)胞不規(guī)則抗體篩選及鑒定，分別在3個微柱孔下標(biāo)記Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ，在反應(yīng)池中分別加50ul的 1%～2%相應(yīng)篩檢紅細(xì)胞，再分別各加50ul待檢血清，置微柱凝膠專用孵育器孵育37℃，10min；取出后置專用微柱凝膠離心機(jī)離心。觀察結(jié)果：紅細(xì)胞全部沉于微柱底部者為陰性，全部或部分紅細(xì)胞滯留于微柱凝膠孔中者為陽性。如紅細(xì)胞不規(guī)則抗體篩選陽性需進(jìn)一步進(jìn)行抗體鑒定，操作方法同上。

1.2.3 HDN的判斷標(biāo)準(zhǔn) ①母嬰血型不合；②嬰兒符合高膽紅素血癥診斷標(biāo)準(zhǔn)；③ HDN 溶血三項(xiàng)結(jié)果：釋放試驗(yàn)陽性、釋放試驗(yàn)陽性和直接抗人球蛋白試驗(yàn)陽性、直接抗人球蛋白試驗(yàn)陽性和游離抗體試驗(yàn)陽性、釋放試驗(yàn)陽性和游離抗體試驗(yàn)陽性、溶血三項(xiàng)均陽性者都可以證實(shí)為 HDN[2]。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法 本研究的統(tǒng)計學(xué)資料采用SPSS17．0統(tǒng)計學(xué)軟件處理，計數(shù)資料用百分率表示，用χ2檢驗(yàn)，(P<0.05)為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 596例HDN送檢標(biāo)本血型血清學(xué)檢測結(jié)果 陽性標(biāo)本429例，陽性率71.98%；其中ABO HDN 409例，占總陽性標(biāo)本的95.33%；Rh HDN 18例占陽性標(biāo)本的4.20%；其它不規(guī)則抗體2例(IgG型)占0.47%，詳見表1。

表1 HDN陽性標(biāo)本血型系統(tǒng)及特異性分布

2.2 HDN陽性率與患兒出生后采集標(biāo)本時間的關(guān)系 患兒出生1天內(nèi)采集標(biāo)本檢測陽性率與出生1天以上采集標(biāo)本檢測陽性率比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，出生2天內(nèi)采集標(biāo)本與出生2天以上采集標(biāo)本檢測陽性率差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，出生3天內(nèi)采集標(biāo)本與3天以上采集標(biāo)本檢測陽性率差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，而患兒出生后4天內(nèi)采集標(biāo)本檢測陽性率的高于4天以上采集標(biāo)本檢測陽性率(P<0.05)，而隨著采集標(biāo)本時間越長陽性率越低，到第6天或6天以上，陽性率只有48.5%，詳見表2。

表2 患兒出生后采集標(biāo)本時間與陽性率的關(guān)系

3 討論

在596例新生兒溶血病標(biāo)本中檢出陽性的有429例，陽性率達(dá)71.98%，比相關(guān)一些報道略高，可能與各醫(yī)院送檢時患兒的臨床癥狀明顯(新生兒高膽紅素血癥)，血型符合HDN的規(guī)律(O型母親生育非O型嬰兒或Rh陰性母親生育Rh陽性嬰兒)有關(guān)。HDN 主要發(fā)生于ABO血型系統(tǒng)， ABO HDN 有409例，占陽性標(biāo)本的95.33% ，這與吳遠(yuǎn)軍等報道的95.63%[3]和孫六娜報道的95.56%[4]非常接近。而在ABO HDN 中B型患兒219例(51.05%)比A型患兒190例(44.28%)高，這也與蔡于旭等[5]報道的相一致。由表2可以看出HDN在患兒出生4天內(nèi)采集標(biāo)本檢測的陽性率較高，隨著出生時間越長而陽性率不斷地下降。筆者認(rèn)為原因可能與母親的IgG抗體的效價與半衰期有關(guān)，如果效價較低，那么采集標(biāo)本的時間越長，檢測的陽性率越低；其次采集標(biāo)本時間在4天后，游離抗體已被消耗差不多、致敏紅細(xì)胞也被破壞了，游離實(shí)驗(yàn)與放散實(shí)驗(yàn)很難檢測出來，因此產(chǎn)生假陰性。臨床上疑似新生兒溶血病的患兒應(yīng)在出生后4天內(nèi)采集標(biāo)本送檢，采集時間越早越好，為臨床提供早診斷早治療的依據(jù)。

ABO HDN 是由于母嬰ABO血型不合，母體的IgG抗A(B)抗體經(jīng)過胎盤進(jìn)入胎兒體內(nèi)血液循破壞胎兒紅細(xì)胞所引起,因孕婦在懷不合血型胎兒前就可能有多種原因使自身產(chǎn)生高效價的IgG抗-A(B)抗體，故ABO HDN可發(fā)生在第一胎。此病多見于O型孕婦所生A(B)型嬰兒，本次結(jié)果調(diào)查409例ABO HDN 中孕婦均是O型，這可能與0型個體血液中除含有IgM 抗A(B)抗體外，同時含有較多的IgG抗A(B)抗體有關(guān)， O型孕婦血漿IgG抗A(B)抗體效價隨孕婦年齡、孕次的增長而升高，即母嬰血型不合新生兒發(fā)生 HDN 的患病率也隨之升高[6],有相關(guān)的報導(dǎo)IgG抗A(B)抗體效價≥1∶64 可引起 HDN 并且隨著效價增加而升高[7-8]。Rh HDN是由于母嬰Rh血型不合所致的Rh免疫抗體作用于胎兒紅細(xì)胞所致的高膽紅素血癥，此病只能由人類紅細(xì)胞作為抗原刺激產(chǎn)生Rh免疫抗體，故極少發(fā)生在第一胎，除非以前有輸血史與流產(chǎn)史。有報道Rh血型系統(tǒng)抗體發(fā)生的比例大約占到14.6%，以抗-D最為常見，抗-E、抗-C、抗-c抗體引起的Rh HDN也相對多見，也有Rh雙抗體和三抗體的聯(lián)合抗體的報道。本次調(diào)查Rh血型系統(tǒng)以抗-D最為多見，但總體確診率明顯較低(4.2%)，也發(fā)現(xiàn)了由抗-E、抗-Ec、抗-C等抗體引起的HDN。對于Rh血型系統(tǒng)，由于我國漢族Rh(D)陰性頻率為0.2%～0.5%，遠(yuǎn)低于白種人的15%[9]，因此Rh血型系統(tǒng)紅細(xì)胞抗體引起的HDN相對ABO較少。近幾年來我國實(shí)行輸血前鑒定Rh(D)血型，Rh(D)陰性受血者大多數(shù)都能接受Rh (D)陰性紅細(xì)胞輸注，由抗-D引起的 HDN 有逐步減少的趨勢[3]。

該病主要臨床癥狀是新生兒出現(xiàn)不同程度的貧血、黃疸、肝脾腫大，嚴(yán)重者可有水腫、核黃疸后遺癥，甚至因?yàn)楹粑ソ呋蚍纬鲅劳?。治療上一般給予腎上腺皮質(zhì)激素、藍(lán)光照射、抗感染退黃等對癥治療，對于膽紅素水平達(dá)到換血指征者應(yīng)進(jìn)行換血治療。換血療法的目的是預(yù)防核黃疸而降低血清膽紅素的濃度，用帶氧能力強(qiáng)的紅細(xì)胞代替處于加速破壞的已包被的紅細(xì)胞，移出嬰兒體內(nèi)已包被的紅細(xì)胞，因?yàn)楫?dāng)這些細(xì)胞破壞時會增加膽紅素的量，減少嬰兒體內(nèi)不相容的抗體含量[10]。換血療法的效果非常顯著，常能迅速改變患兒癥狀，是對高膽紅素血癥新生兒最有效的治療手段。

[1]葉應(yīng)嫵，王毓三，申子瑜．全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程[M]． 3版．南京：東南大學(xué)出版社，2006：256-257．

[2]劉達(dá)莊．免疫血液學(xué)[M]．上海：上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，2002：136.

[3]吳遠(yuǎn)軍，吳勇，盧慶輝，等. 母嬰血型不合HDN患兒致敏紅細(xì)胞的抗體特異性[J].細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志，2008.24(7) 727-728.

[4]孫六娜.108例新生兒溶血病患兒血清學(xué)檢測結(jié)果分析[J]. 檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床，2012. 9 (21)2718-2719.

[5]蔡于旭. 290新生兒溶血病血清學(xué)檢測結(jié)果分析[J]. 海南醫(yī)學(xué)，2013.24(2)230-231.

[6]于曉，張濤，羅文娟，等．O型血型孕婦血漿中l(wèi)gG抗體效價與孕婦年齡、孕期、孕次關(guān)系探討[J].都醫(yī)學(xué)院學(xué)報,2013.8(3) 341-343.

[7]李君華. O型血孕婦血清中IgG抗(A)B抗體效價對ABO新生兒溶血病的診斷意義[J]．醫(yī)學(xué)與臨床, 2013.10(7) 836-838.

[8]溫潔新, 馬西霞,孫稔俠,等． O型血孕婦血清中IgG抗(A)B抗體效價與ABO新生兒溶 血病的相關(guān)分析[J]．廣東醫(yī)學(xué)，2010,31(11)1430-1431 .

[9]MARION E R，RAGNHID O，MARSH W L．The clincal signficanc of alloantibodies of blood group system [J].Semin Hematol,2000,37:197-206.

[10]羅梅，何靜，陳方祥．54例重度ABO新生兒溶血病換血治療結(jié)果分析[J]．重慶醫(yī)學(xué)，2010，2(39)：232-233.

林棟，主管技師，本科學(xué)歷，E-mail:335295257@qq.com

R722.18

A

1007-8517(2014)14-0038-02

2014.05.07)