1HPLC法測(cè)定白子菜中黃酮類物質(zhì)的含量

1.廣西中醫(yī)藥大學(xué)制藥廠，廣西 南寧 530001；2.廣西中醫(yī)藥大學(xué)，廣西 南寧 530001；3.廣西壯族自治區(qū)婦幼保健院 廣西 南寧 530001

1HPLC法測(cè)定白子菜中黃酮類物質(zhì)的含量

彭勇1徐業(yè)燕3杜成智2*

1.廣西中醫(yī)藥大學(xué)制藥廠，廣西 南寧 530001；2.廣西中醫(yī)藥大學(xué)，廣西 南寧 530001；3.廣西壯族自治區(qū)婦幼保健院 廣西 南寧 530001

目的建立白子菜中黃酮類物質(zhì)(蘆丁)的含量測(cè)定方法。方法采用Waters Symmetry C18色譜柱，流動(dòng)相為甲醇-1%冰醋酸(35∶65)，檢測(cè)波長為358nm，柱溫25℃。結(jié)果蘆丁在0.0232～0.116μg (r=0.9998)范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，平均加樣回收率為99.4%，RSD為0.9%。結(jié)論該法簡(jiǎn)便可行，結(jié)果準(zhǔn)確，重復(fù)性好，可用于該藥材的含量測(cè)定。

白子菜；HPLC；蘆丁

白子菜是菊科植物白子菜Gynuradivaricata(L.)DC.的全草，別名白背三七、大肥牛、槍刀藥、清心菜、土生地、白仔菜藥等[1]，多年生草本植物，主產(chǎn)于廣西，在南方各省均有分布。全草消熱解毒，活血化淤，去風(fēng)消腫，根入藥，有瀉火、涼血、生津之功效，是民間治療乳腺炎、關(guān)節(jié)炎、氣管炎等各種炎癥常見中草藥[2]?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究表明[3-4]，以上功效與黃酮化合物有關(guān)。為有效控制藥材質(zhì)量，本研究參考相關(guān)文獻(xiàn)[5-6]建立了白子菜中蘆丁的含量測(cè)定方法。

1 儀器與試藥

美國Agilent 1260 Series高效液相色譜儀:四元泵，在線脫氣機(jī)，自動(dòng)進(jìn)樣器 (G1329B)，柱溫箱；KQ3200B型超聲波清洗器(昆山超聲儀器有限公司)；LG16-WA臺(tái)式高速離心機(jī)(北京京立離心機(jī)有限公司)；超純水系統(tǒng)(MILLIPORE)；電子分析天平(CP224S，Sartorius 德國)。乙腈、甲醇為色譜純，其余試劑均為分析純，水為高純水。蘆丁對(duì)照品(中國食品藥品檢定研究院，批號(hào)：100080-200707)。白子菜(采自南寧市郊區(qū))由廣西中醫(yī)藥大學(xué)藥用植物教研室鑒定為菊科植物Gynura divaricata(L.)DC.的全草。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 Waters Symmetry C18色譜柱(250mm ×4.6mm,5μm)，柱溫25℃；流動(dòng)相: 甲醇-1%冰醋酸(35∶65)，流速1.0ml/min；檢測(cè)波長358nm，進(jìn)樣量10μl。

2.2 對(duì)照品溶液制備 精密稱取蘆丁對(duì)照品適量，加甲醇制成每1ml含蘆丁0.58mg的溶液，即得蘆丁儲(chǔ)備液。

2.3 供試品的制備 取60℃烘干的白子菜地上部分粉碎后，過篩備用。精密稱取經(jīng)過前處理的白子菜粗粉1g，精密加入甲醇25ml，精密稱定后超聲處理30min，放冷，補(bǔ)足減失重量。濾過后取續(xù)濾液離心10min，靜置，用0.45μm濾膜濾過，即得供試品溶液。

2.4 系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn) 吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液各10 μl注入高效液相色譜儀，按“2.1 項(xiàng)”下色譜條件記錄色譜圖，色譜圖見圖1-2，蘆丁峰與鄰近峰達(dá)到基線分離，分離度良好(R>1. 5)。

2.5 線性試驗(yàn) 精密吸取對(duì)照品儲(chǔ)備液適量，加甲醇定容，配制系列對(duì)照品溶液，分別吸取10μl注入高效液相色譜儀，按“2.1項(xiàng)”下色譜條件測(cè)定峰面積。以對(duì)照品的進(jìn)樣量(μg)對(duì)峰面積進(jìn)行線性回歸，求得回歸方程，為Y=16987X-28.1，r=0.9998，線性范圍為0.0232～0.116μg。

2.6 精密度試驗(yàn) 精密吸取對(duì)照品溶液10μl，重復(fù)進(jìn)樣6次，依次測(cè)定。測(cè)得RSD為0.09%(n= 6)，表明儀器精密度良好。

2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取供試品溶液按“2.1項(xiàng)”下色譜條件分別于0、2、4、6、8、12h進(jìn)樣測(cè)定，測(cè)得結(jié)果RSD為0.79% (n = 6)。結(jié)果表明樣品溶液在12h內(nèi)穩(wěn)定。

2.8 重復(fù)性試驗(yàn) 取白子菜藥材，按“2.3項(xiàng)”下供試品溶液的制備方法平行制備供試品溶液6份并依法測(cè)定，計(jì)算得大蘆丁平均含量為0.543mg/g，RSD為1.6% ( n = 6)，說明該法重復(fù)性較好。

2.9 加樣回收率試驗(yàn) 取已知含量并經(jīng)前處理的藥材6份，取約1g，精密稱定，分別精密加入一定量的蘆丁對(duì)照品溶液，其余操作按2.3項(xiàng)下供試品溶液的制備方法，測(cè)定，計(jì)算，結(jié)果蘆丁平均加樣回收率為99.4%，RSD=1.6% (n=6 )，說明本方法準(zhǔn)確度較好。結(jié)果見表1。

表1加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果(n=6)

原有量/mg加入量/mg測(cè)定量/mg回收率/%平均回收率/%RSD/%0 53740 58001 112399 1299 40 90 54280 58001 121499 760 54470 58001 122199 550 53810 58001 109798 550 53960 58001 1253101 00 54160 58001 112598 43

2.10 樣品含量測(cè)定 取6批樣品，按“2.3項(xiàng)”制備供試品溶液，在“2.1項(xiàng)”色譜條件測(cè)定，結(jié)果見表2。

表2 含量測(cè)定結(jié)果(n=3)

3 討論

3.1 在實(shí)驗(yàn)過程中，曾分別采用不同比例的乙醇、甲醇超聲提取和回流考察提取率，結(jié)果顯示100%甲醇超聲提取即可較好去除干擾雜質(zhì)又可提取完全效果最佳。

3.2 在流動(dòng)相的選擇中，分別考察了多種流動(dòng)相的分離效果，經(jīng)過實(shí)驗(yàn)分析，綜合考慮了分離效果、基線平穩(wěn)、操作方便性等情況，最終確定甲醇-1%冰醋酸(35∶65)為最佳流動(dòng)相，該條件下測(cè)定物質(zhì)出峰快，與雜質(zhì)峰的分離度均達(dá)到1.5以上。

3.3 白子菜的化學(xué)成分研究發(fā)現(xiàn)其含有黃酮類物質(zhì)。近現(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，白子菜的藥用效果與黃酮化合物有關(guān)。國內(nèi)生物醫(yī)藥企業(yè)通過技術(shù)開發(fā)、粗加工、精細(xì)提取人體生理活性有效成分，加工提取白子菜濃縮汁、固體飲料、凍干產(chǎn)品、萃取物(黃酮、多糖提取)等系列產(chǎn)品。本方法對(duì)白子菜藥材中蘆丁的含量測(cè)定方法進(jìn)行初步探索。該法簡(jiǎn)便可行，結(jié)果準(zhǔn)確，重復(fù)性好，可用于白子菜藥材及含白子菜制劑中蘆丁的含量測(cè)定。

[1]國家中醫(yī)藥管理局《中華本草》編委會(huì). 中華本草[M ]. 上海: 上?？茖W(xué)技術(shù)出版社, 1999: 7841

[2] 廣東植物研究所. 海南植物志[M]. 北京:北京科技出版社, 1974: 416

[3] 姜曼花，胡劍卓，邱文高，等. 白背三七多糖和黃酮降血糖及耐缺氧作用[J]. 中國醫(yī)院藥學(xué)雜志, 2009，29(13)：1074-1076.

[4] 俞浩，毛斌斌，周國梁，等.白背三七總黃酮對(duì)糖尿病大鼠的降血糖作用[J]. 食品科學(xué), 2013, 34(15): 295-298.

[5] 黃騏，林榮華，鄭釗，等. 白子菜總黃酮含量的測(cè)定[J]. 福建師范大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版), 2006，22(2)：118-120.

[6] 林榮華，代容春，陳由強(qiáng). 白子菜總黃酮提取工藝研究[J]. 福建輕紡, 2009, (6): 28-30.

DeterminationofRutininGynuradivaricata(L.)DC.byHPLC

PENG Yong1, XU Ye-yan3, DU Cheng-zhi2*

1. Pharmaceutical factory of Guangxi University of Chinese Medicine, Nanning, Guangxi,530001；2.Guangxi University of Chinese Medicine, Nanning, Guangxi,530001；3. Guangxi Maternal and Child Health Hospital, Nanning, Guangxi,530001

Objective: To establish a HPLC method for the determination of Rutin inGynuradivaricata(L.)DC..MethodWaters Symmetry C18 analytical column was used, mobile phase: methanol-1% glacial acetic acid (35∶65), UV detection wavelength was at 358nm; Column temperature was at 25℃.ResultUnder the chromatographic conditions used, the calibration curve of Rutin was linear in the range of 0.0232～0.116μg (r=0.9998). The average recoveries was 99.4%, RSD: 0.9%.ConclusionThe method is accurate, effective and feasible. It can be used for the determination of the contents of Rutin inGynuradivaricata(L.)DC..

Gynuradivaricata(L.)DC.; HPLC; Rutin

廣西壯族自治區(qū)教育廳科研項(xiàng)目(201106LX263)；廣西中醫(yī)學(xué)院校級(jí)課題(P2010012)。

彭勇，男，廣西南寧人，初級(jí)藥師，從事藥物分析研究。E-mail：837631027@qq.com

杜成智，男，講師，E-mail：276561774@qq.com。

R284.1

A

1007-8517(2014)07-0020-02

2014.02.17)