手足口病患兒T淋巴細(xì)胞亞群和相關(guān)細(xì)胞因子水平變化的臨床意義分析

唐漢慶，盧 蘭，黃月艷，李清鋒，李曉華

(1. 廣西壯族自治區(qū)右江民族醫(yī)學(xué)院，廣西 百色，533000;2. 廣東省惠州市第四人民醫(yī)院，廣東 惠州，516055)

手足口病(HFMD)是兒科常見傳染病，主要由腸道病毒引起，具有傳播快、傳染性強(qiáng)的特點(diǎn)，部分患兒可發(fā)展為重型或危重型，其發(fā)病機(jī)制尚未完全闡明，一般認(rèn)為T細(xì)胞的激活及其釋放的細(xì)胞因子引起的細(xì)胞免疫和介導(dǎo)的炎性反應(yīng)或體液免疫有密切的聯(lián)系[1-2]。T 淋巴細(xì)胞對炎性反應(yīng)起著重要的調(diào)控作用[3-4]，本研究通過檢測HFMD患兒外周血T 淋巴細(xì)胞亞群和相關(guān)細(xì)胞因子水平變化，探討其對臨床的指導(dǎo)意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2012年4月—2014年5月在本院收治的HFMD患兒56例作為病例組，其中男34例，女22例；普通病例48例，重癥病例8例；年齡8個月～6歲，平均(1.85±0.36)年。另外選取同期經(jīng)過健康體檢中心體檢的健康幼兒48例作為對照組，其中男28例，女20例，年齡6個月～7歲，平均(2.08±0.66)年。2組在年齡、性別方面無顯著差異(P>0.05)。

1.2 入選及排除標(biāo)準(zhǔn)

依據(jù)衛(wèi)生部頒發(fā)的《醫(yī)療機(jī)構(gòu)手足口病診療技術(shù)指南》(2008年版)[5]診斷標(biāo)準(zhǔn)，病例分型標(biāo)準(zhǔn)如下：普通病例：以發(fā)熱、手、足、口、臀部出現(xiàn)斑丘疹、皰疹為主要表現(xiàn)；重癥病例: ① 重型：出現(xiàn)神經(jīng)系統(tǒng)受累表現(xiàn)：包括精神差、嗜睡、易驚、譫妄；頭痛、嘔吐；肢體抖動、肌陣攣、眼球震顫、共濟(jì)失調(diào)、眼球運(yùn)動障礙；無力或急性遲緩性麻痹；驚厥。體征可見腦膜刺激征，腱反射減弱或消失; ② 危重型：出現(xiàn)下列情況之一者：頻繁抽搐、昏迷、腦疝；呼吸困難、紫疳、血性泡沫痰、肺部羅音等；休克等循環(huán)功能不全表現(xiàn)。排除其他腸道病毒性疾病或近1個月有呼吸道等感染病史。本研究和所有患兒家屬均簽署知情同意書。

1.3 指標(biāo)檢測

1.3.1 T淋巴細(xì)胞亞群檢測:病例組入院后第1天清晨空腹抽取靜脈血2 mL，置于EDTA抗凝管。管中依次加入3種抗體各10 μL，室溫避光孵育25 min，每管加入200 μL溶血素，輕輕吹打，在室溫下避光靜置 15 min，裂解紅細(xì)胞；觀察溶液澄清透明后，加入預(yù)冷PBS液1 mL，室溫下分離血清(3 000 r/min分離10 min)，去上清，加入1 mL PBS 液搖勻，滴加1%多聚甲醛液100 μL固定，用流式細(xì)胞儀檢測外周血T淋巴細(xì)胞亞群。CD4+Ftc、CD8+pe 、CD3+Percp 三色抗體(BD公司，USA); 流式細(xì)胞儀(Coulter Epics Eliteesp型，美國Beckman-Coulter公司)。

1.3.2 細(xì)胞因子IL-17、IL-22、IL-23 和TNF-α檢測:無菌非抗凝管采集新鮮外周血2 mL，室溫靜置0.5 h后3 000 r/min離心10 min吸取血清，每管50 μL分裝于EP管中，置-80 ℃冰箱保存待檢。ELISA法檢測IL-17、IL-22、IL-23和TNF-α水平，IL-17、IL-22、IL-23和TNF-試劑盒(北京生物科技有限公司)，嚴(yán)格按照試劑盒操作說明進(jìn)行。

2 結(jié) 果

2.1 T淋巴細(xì)胞亞群檢測結(jié)果

與對照組比較，病例組T淋巴細(xì)胞總數(shù)顯著降低(P<0.01)，CD4+百分比顯著降低(P<0.01)，CD8+百分比顯著降低(P<0.01)，CD4+/CD8+比值下降(P<0.05)。見表1。

表1 T淋巴細(xì)胞亞群檢測結(jié)果比較 %

2.2 細(xì)胞因子IL-17、IL-22、IL-23和TNF-α檢測結(jié)果

與對照組比較，病例組IL-17、IL-22、IL-23 和水平TNF-α水平均顯著升高(P<0.05或P<0.01)。見表2。

表2 IL-17、IL-22、IL-23 和TNF-α檢測結(jié)果比較

3 討 論

HFMD是兒科常見的腸道傳染性疾病，主要致病原是腸道病毒 71 型[6]、柯薩奇病毒A組，好發(fā)于3歲以下兒童，臨床以手、足、口、臀部出現(xiàn)斑丘疹、皰疹為主要體征，重癥病例累及神經(jīng)系統(tǒng)，需要及時處理。HFMD的發(fā)病機(jī)制與機(jī)體的細(xì)胞免疫、炎癥反應(yīng)和體液免疫有緊密的聯(lián)系。

研究[7-8]已經(jīng)表明T淋巴細(xì)胞在免疫過程中扮演重要的角色，對免疫過程起著重要的調(diào)控作用。T淋巴細(xì)胞根據(jù)表型的不同分為CD4+細(xì)胞和CD8+細(xì)胞亞群，正常情況下，這兩個亞群在數(shù)量和功能上保持穩(wěn)定、相互協(xié)調(diào)，維持機(jī)體正常的免疫應(yīng)答[9]。其中，CD4+細(xì)胞為免疫輔助性細(xì)胞，作用是促進(jìn)體液免疫和細(xì)胞免疫；而CD8+為細(xì)胞毒性細(xì)胞或抑制性細(xì)胞，抑制免疫反應(yīng)，CD4+細(xì)胞和CD8+細(xì)胞兩者協(xié)調(diào)，調(diào)節(jié)機(jī)體的免疫反應(yīng)，CD4+細(xì)胞數(shù)量、CD8+細(xì)胞數(shù)量以及CD4+/CD8+比值維持穩(wěn)定或處于平衡狀態(tài)是機(jī)體免疫功能得以發(fā)揮的重要前提條件，因此，檢測T淋巴細(xì)胞亞群對免疫性疾病的發(fā)生發(fā)展和預(yù)后有重要的臨床意義[10]。本研究中，和對照組相比，病例組T淋巴細(xì)胞總數(shù)、CD4+細(xì)胞數(shù)量、CD8+細(xì)胞數(shù)量以及CD4+/CD8+比值均下降，提示HFMD患兒患病后出現(xiàn)免疫功能紊亂，抗病毒感染能力嚴(yán)重不足，免疫清除致病原的能力減弱。因此，在使用抗病毒藥物如干擾素等的同時，還要關(guān)注如何使用有益于調(diào)節(jié)機(jī)體免疫功能的方法或藥物。中西醫(yī)結(jié)合綜合治療有可能縮短治療周期并預(yù)防出現(xiàn)危重癥[11]。例如，部分“扶正固本”中藥具有免疫功能雙向調(diào)節(jié)作用，可以考慮使用。

HFMD患兒感染病毒后，機(jī)體發(fā)生免疫應(yīng)答，伴有炎癥反應(yīng)，使與之相關(guān)的細(xì)胞因子水平發(fā)生變化，從有關(guān)細(xì)胞因子的變化可以推測炎癥對組織的損害和病變的嚴(yán)重程度。研究表明IL-17與受體結(jié)合后誘導(dǎo)成纖維細(xì)胞、上皮及內(nèi)皮細(xì)胞分泌IL-22、IL-23等細(xì)胞因子，引起局部炎癥和皮膚斑丘疹損害[12-13]，其中IL-23通過TNF-α和IL-22能誘導(dǎo)表皮增生、炎性滲出等維持皮膚斑丘疹或皰疹形態(tài)[14]，TNF-α還可以直接啟動炎性反應(yīng)過程[15]，IL-17、 IL-22、IL-23和TNF-α等細(xì)胞因子相互作用，是HFMD炎癥反應(yīng)的病理環(huán)節(jié)。在本研究中，和對照組相比，病例組IL-17、IL-22、IL-23和TNF-α水平均升高，表明HFMD患兒存在炎癥反應(yīng)，針對HFMD的治療需要考慮抗感染治療，因此，完善的HFMD治療方案既包括抗病毒治療也要考慮相關(guān)細(xì)胞因子正常水平的恢復(fù)問題，綜合考慮后制定全面的治療方案。

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