麻黃桂枝組方對豚鼠銀屑病樣模型的影響

郭 順，時 樂，張璐璐，魏躍鋼

(南京中醫(yī)藥大學，1. 第一臨床醫(yī)學院; 2. 藥學院，江蘇 南京，210023;3. 江蘇省中醫(yī)院 皮膚科，江蘇 南京，210029)

銀屑病，中醫(yī)又名“白 ”，是一種常見并易復發(fā)的慢性炎癥性皮膚病。傳統(tǒng)中醫(yī)辨證多從“血”論治，近年來從新的視角對銀屑病病因進行探索，提出從"玄府"論治[1]，采用發(fā)汗法治療。本研究選用了麻黃湯中的麻黃和桂枝組方，觀察其對豚鼠銀屑病樣模型的影響，現報告如下。

1 材料與方法

1.1 實驗動物

健康雄性豚鼠50只(由江蘇省南京市江寧區(qū)青龍山動物繁殖場提供)，周齡4～5周，體質量250～300 g。

1.2 儀器與試劑

XSB-3顯微鏡(上海物理光學儀器廠)，Lecia EG1160生物組織包埋機(德國萊卡)，鹽酸普萘洛爾(江蘇省常州康普藥液有限公司，國藥準字H32021276)，甲氨蝶呤片(上海信誼藥業(yè)有限公司，國藥準字H31020644)，聚山梨酯80(上海一研生物科技有限公司)，凡士林乳膏，生理鹽水等。

1.3 藥物制備

1.3.1 麻黃桂枝組方：麻黃180 g、桂枝120 g(由南京中醫(yī)藥大學百草堂中醫(yī)門診部藥房提供)，制備過程：將藥材粉碎后置于圓底燒瓶中，加入10倍量的水，浸泡8 h后煮沸，提取5 h，同時安裝揮發(fā)油提取器，將藥液過濾去渣，濾液濃縮至生藥含量為1.5 g/mL。將揮發(fā)油用乙醚提取后添加聚山梨酯80和少量濾液，攪拌至乙醚揮發(fā)后再與其余藥液混合。

1.3.2 犀角地黃湯：取水牛角210 g，生地168 g，赤芍84 g，丹皮63 g(由南京中醫(yī)藥大學百草堂中醫(yī)門診部藥房提供)，制備過程：水煎煮2次，合并煎煮液，濃縮至生藥含量為3 g/mL。

1.3.3 普萘洛爾乳膏：將普萘洛爾片劑碾成粉，過篩后取粉劑5 g加入凡士林基質中，沿同一方向充分攪拌配置成5%普萘洛爾乳膏。

1.4 模型制備

使用新鮮配制的10%的硫化鈉水溶液對豚鼠耳部脫毛，脫毛后間隔24 h開始造模。采用文獻法[2]，除空白組外，其余各組用5%普萘洛爾乳劑均勻外涂豚鼠雙耳背皮膚，每耳涂抹0.1 mL，用玻璃棒涂勻，3次/d，連續(xù)2周，使其產生銀屑病樣皮損?？瞻捉M動物采用乳膏基質同法操作。

1.5 分組及給藥

1.5.1 分組方法：適應性喂養(yǎng)1周后將50只實驗豚鼠隨機分為空白組、模型組、麻桂組、甲氨蝶呤組、犀角地黃湯組，每組10只。

1.5.2 給藥方法：造模2周后，停止外涂5%普萘洛爾乳劑，開始用藥?？瞻捉M、模型組給予等體積生理鹽水，麻桂組給藥劑量為每天7.35 g/kg，犀角地黃湯組每天36.8 g/kg，甲氨蝶呤組每天2.92 mg/kg。連續(xù)給藥2周，末次給藥30 min后，手術切取各組豚鼠左側耳部及左側腋窩部的皮膚組織，置10%甲醛固定，石蠟包埋，切片，常規(guī)HE染色，光鏡下逐一觀察耳部皮膚病理變化和汗腺細胞。

1.6 觀察指標

觀察各組豚鼠耳背皮膚形態(tài)變化，耳部組織病理積分及腋窩皮膚汗腺空泡發(fā)生率。

1.7 判定標準

1.7.1 皮損組織病理評估：參考Baker法[3]制定組織學評分標準，角質層中發(fā)現Munro小膿腫計2.0分；過度角化計0.5分；角化不全計1.0分。表皮層中發(fā)現顆粒層變薄或消失計1.0分；棘層肥厚計1.0分；皮突延長、起伏，根據輕、中、重程度分別計0.5、1.0、1.5分。真皮層炎細胞浸潤，根據輕、中、重程度分別計0.5、1.0、2.0分；乳突上頂計0.5分；毛細血管擴張計0.5分。各項評分相加為最終病理積分。

1.7.2 汗腺空泡發(fā)生率：在顯微鏡下觀察汗腺細胞，記錄細胞總數和空泡細胞數，計算百分率[4]。

2 結 果

2.1 各組豚鼠雙耳形態(tài)觀察

造模2周后，空白組豚鼠雙耳形態(tài)無改變；模型組及各給藥組耳背部涂藥處皮膚出現紅斑，皮溫升高，并覆有較厚鱗屑，毛細血管擴張明顯；麻桂組和甲氨蝶呤組在給藥過程中癥狀逐漸改善，2周后顯著好轉；模型組和犀角地黃湯組皮損恢復相對較慢。

2.2 各組耳部組織形態(tài)學及汗腺變化

光鏡下空白組耳廓皮膚組織形態(tài)學正常；模型組及各給藥組見廣泛角化過度及灶性角化不全，顆粒層變薄，棘層肥厚，表皮突延伸呈棒狀，真皮淺層血管周圍炎性細胞浸潤，毛細血管擴張。分組給藥2周后，除空白組，其余4組組織形態(tài)學均有一定改善，其中麻桂組和甲氨蝶呤組改善更明顯，見圖1。麻桂湯組豚鼠腋窩皮膚汗腺導管擴張，腺體擴張，腺上皮胞漿豐富，分泌旺盛，出現核下空泡。其余組可見正常腺體，腺體成大管狀分布，汗管擴張不明顯，腺上皮排列致密，未見明顯分泌現象，見圖2。

2.3 各組皮損病理積分及汗腺空泡發(fā)生率比較

經統(tǒng)計學分析，給藥2周后，模型組與各給藥組病理積分均顯著高于空白組(P<0.01)，各給藥組較模型組均有不同程度下降，其中麻桂組與甲氨蝶呤組顯著低于模型組和犀角地黃湯組(P<0.01)，麻桂組與甲氨蝶呤組之間無顯著差異(P>0.05)，犀角地黃湯組與模型組之間無顯著差異(P>0.05)。給藥2周后，麻桂組汗腺空泡發(fā)生率顯著增加(P<0.01)，其余各組與空白組無顯著差異(P>0.05)。見表1。

圖1 各組豚鼠耳部組織形態(tài)學特征

圖2 各組汗腺組織形態(tài)學特征

表1 各組皮損病理積分及汗腺空泡發(fā)生率比較±s)

3 討 論

銀屑病是一種多基因遺傳病，發(fā)病過程涉及復雜的細胞免疫紊亂、其病理生理改變包括皮膚損害和多系統(tǒng)受累[5]。豚鼠是常用的銀屑病模型動物，多數學者均采用普萘洛爾涂在豚鼠耳背側皮膚，造成表皮角化過度、角化不全和棘層肥厚等類似銀屑病的組織病理改變來制備銀屑病模型[6-7]，其機制可能是普萘洛爾通過阻斷了角質形成細胞的β-腎上腺素能受體，導致細胞內cAMP水平下降，細胞增殖；非選擇性β阻滯劑增加了TNF-α誘導的HaCaT細胞中的CCL20表達，可能造成加重銀屑病的機制。本研究采用同樣方法成功制備豚鼠銀屑病模型，驗證了該法的可行性。

中醫(yī)藥治療銀屑病具有確切療效，但臨床辨證或相關實驗研究傳統(tǒng)多從熱、瘀、燥、虛等角度論治，近年來很多學者探索以汗法治療銀屑病，臨床用藥以麻黃類方為主[9-10]。麻黃湯是發(fā)汗解表的代表性方劑，其發(fā)汗的功效在臨床和實驗中均得到驗證，相關實驗表明麻黃、桂枝在發(fā)汗中起主要作用[4]，且二者配伍后發(fā)汗作用更強[11]。方中麻黃的主要成分麻黃堿對α和β受體均有激動作用，在機體內可直接激動腎上腺素受體，并間接促進去甲腎上腺素神經遞質的釋放而興奮交感神經促進機體排汗；桂枝中的主要成分桂醛、桂皮酸鈉、桂皮油能擴張血管、促進血液循環(huán)、促使血液流向體表、加強麻黃的發(fā)汗等作用。既往研究[12]提示麻桂湯能通過抑制表皮細胞過度增殖來改善咪喹莫特誘導的小鼠銀屑病樣皮損。

本研究以麻黃湯中的麻黃桂枝進行組方，對豚鼠銀屑病模型進行汗法治療干預，同時選取甲氨蝶呤和犀角地黃湯作為對照藥物。甲氨蝶呤是

一種免疫抑制劑，與其他藥物聯合應用對銀屑病具有一定療效，而犀角地黃湯是臨床治療血熱證銀屑病的經典方劑。本研究結果表明麻桂組對豚鼠銀屑病樣皮損的改善效果與甲氨蝶呤相似，其病理積分顯著低于模型組和犀角地黃湯組，而犀角地黃湯對豚鼠銀屑病樣模型的改善療效不佳，可能與方中以水牛角代替犀角等因素相關；同時，本研究結果還表明，麻桂組的汗腺空泡發(fā)生率顯著高于其他各組，提示麻桂湯具有顯著的發(fā)汗作用，可促進銀屑病患者汗腺分泌，但其發(fā)汗功效與改善銀屑病樣皮損之間的具體作用機制，還有待進一步的研究。

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