PRINS技術(shù)在產(chǎn)前診斷21、18、13號(hào)染色體數(shù)目異常的研究及與FISH技術(shù)、羊水細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)的比較

吳忠琴 李廣萍 楊雪 王碧

PRINS技術(shù)在產(chǎn)前診斷21、18、13號(hào)染色體數(shù)目異常的研究及與FISH技術(shù)、羊水細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)的比較

吳忠琴 李廣萍 楊雪 王碧

目的 探討引物原位標(biāo)記(PRINS)技術(shù)在產(chǎn)前診斷21、18、13號(hào)染色體數(shù)目異常中的價(jià)值,并與FISH技術(shù)、羊水細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)進(jìn)行比較。方法 選擇本院2008年1月~2010年12月期間收治的263例唐氏篩查高危和高齡孕婦為研究對(duì)象, 所有孕婦均行PRINS技術(shù)、FISH技術(shù)檢測(cè)和羊水細(xì)胞培養(yǎng)染色體核型分析。統(tǒng)計(jì)并比較兩種技術(shù)在產(chǎn)前21、18、13號(hào)染色體數(shù)目異常中的檢出率及檢出時(shí)間。結(jié)果 PRINS技術(shù)檢測(cè)產(chǎn)前21、18、13號(hào)染色體數(shù)目異常中的檢出率為100%, 與FISH技術(shù)檢測(cè)和羊水細(xì)胞培養(yǎng)染色體核型分析相符合率100%, 兩組比較, 且PRINS技術(shù)的平均檢出時(shí)間均短于FISH技術(shù)(P＜0.05)。結(jié)論 PRINS技術(shù)在產(chǎn)前21、18、13號(hào)染色體數(shù)目異常中的檢出率較高, 且檢出時(shí)間短, 具有良好的應(yīng)用價(jià)值。

染色體數(shù)目異常；PRINS技術(shù)；FISH技術(shù)

染色體數(shù)目異常是引發(fā)唐氏綜合征、18-三體綜合征、13-三體綜合征、TURNER綜合征和克氏綜合征等疾病的重要原因［1］。如何加強(qiáng)高危孕婦產(chǎn)前21、18、13號(hào)染色體數(shù)目異常的診斷, 減少出生缺陷患兒具有重要的意義。引物原位標(biāo)記技術(shù)(PRINS技術(shù))是近年發(fā)展起來(lái)的一項(xiàng)新的遺傳物質(zhì)原位標(biāo)記技術(shù), 本文以本院2008年1月~2010年12月期間收治的263例唐氏篩查高危和高齡孕婦為研究對(duì)象, 探討PRINS技術(shù)在產(chǎn)前診斷21、18、13號(hào)染色體數(shù)目異常中的應(yīng)用價(jià)值, 并與FISH技術(shù)、羊水細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)進(jìn)行比較,現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇本院2008年1月~2010年12月期間收治的263例高危孕婦為研究對(duì)象, 其中高齡孕婦73例, 唐氏篩查高危、18-三體高危190例, 年齡22~38歲, 平均年齡(28.4±3.4)歲。孕周17~23周, 平均孕周(20.3±2.2)周。

1.2 方法 所有孕婦均行PRINS技術(shù)和FISH技術(shù)診斷、羊水細(xì)胞培養(yǎng)染色體核型分析。

1.2.1 PRINS技術(shù)檢測(cè) B超監(jiān)護(hù)下經(jīng)腹行羊膜穿刺抽取采集羊水5 ml。PRINS反應(yīng)：①反應(yīng)液(雜交體系), 總體積為25 μl。設(shè)計(jì)第21、18、13號(hào)染色體較小分子的寡核苷酸引物(18-30bp), 選擇不同標(biāo)記物標(biāo)記的dUTP(生物素-16-dUTP, 地高辛-11-dUTP, 熒光素-12-dUTP等)分別設(shè)計(jì)并進(jìn)行三次PRINS反應(yīng)的步驟。②反應(yīng)過(guò)程。37℃條件下進(jìn)15 min的蛋白酶K消化, 退火, 延伸, 洗脫, 復(fù)染。③熒光顯微鏡監(jiān)測(cè)。50個(gè)中期細(xì)胞進(jìn)行記數(shù), 對(duì)染色體總數(shù)及雜交位點(diǎn)進(jìn)行觀察, 分別統(tǒng)計(jì)含1、2、3、≥4個(gè)雜交信號(hào)的細(xì)胞核數(shù)。信號(hào)間距應(yīng)大于信號(hào)直徑［2］。

1.2.2 FISH技術(shù)檢測(cè) B 超引導(dǎo)下行產(chǎn)婦羊膜腔穿刺, 抽取5 ml羊水。FISH檢測(cè)采用金菩嘉FISH非整倍體試劑盒,根據(jù)試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行檢測(cè)步驟的操作。每例羊水均有不同的兩個(gè)雜交區(qū)域, 使用熒光顯微鏡和圖像分析軟件共進(jìn)行21、18、13三條染色體的數(shù)目分析。并根據(jù)存檔保存的染色體數(shù)目異常的陽(yáng)性標(biāo)本進(jìn)行雙盲方法對(duì)照組, 以判斷染色體數(shù)目異常。

1.2.3 經(jīng)典羊水細(xì)胞培養(yǎng)染色體核型分析 采用經(jīng)典細(xì)胞遺傳性學(xué)分析技術(shù)對(duì)本組孕婦進(jìn)行染色體G帶分析。

1.3 觀察指標(biāo) 統(tǒng)計(jì)記錄兩種檢測(cè)技術(shù)的染色體數(shù)目異常檢出率與檢出時(shí)間。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件, 計(jì)量檢測(cè)數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差( x-±s)表示, 計(jì)數(shù)檢測(cè)數(shù)據(jù)以率(%)的形式表示, 組間兩均數(shù)比較用t檢驗(yàn), 計(jì)數(shù)資料比較用χ2檢驗(yàn)。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 PRINS技術(shù)和FISH技術(shù)在產(chǎn)前21、18、13號(hào)染色體數(shù)目異常中的檢出率。詳見(jiàn)表1。

從表1可以看出, PRINS技術(shù)檢測(cè)下, 本組263例高危孕婦產(chǎn)前共篩選出8例18-三體, 7例21-三體和2例13-三體, 與染色體G帶分析一致。因此, PRINS技術(shù)在產(chǎn)前21、18、13號(hào)染色體數(shù)目異常中的檢出率為100%。FISH技術(shù)檢測(cè)下, 本組263例高危孕婦產(chǎn)前共篩選出8例18-三體, 7例21-三體和2例13-三體, 與染色體G帶分析結(jié)果比較,檢出率為100%。PRINS技術(shù)和FISH技術(shù)的檢出率比較, 差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。

2.2 PRINS技術(shù)和FISH技術(shù)在產(chǎn)前21、18、13號(hào)染色體數(shù)目異常中的檢出時(shí)間。詳見(jiàn)表2。

表1 PRINS技術(shù)和FISH技術(shù)在產(chǎn)前21、18、13號(hào)染色體數(shù)目異常中的檢出率對(duì)比分析 ［n(%)］

表2 PRINS技術(shù)和FISH技術(shù)在產(chǎn)前21、18、13號(hào)染色體數(shù)目異常中的檢出時(shí)間對(duì)比分析( x-±s)

從表2可以看出, PRINS技術(shù)在產(chǎn)前21、18、13號(hào)染色體數(shù)目異常中的平均檢出時(shí)間均短于FISH技術(shù)(P＜0.05)。

3 討論

臨床研究表明,染色體數(shù)目異常發(fā)生率較高的為13、18、21、X和Y號(hào)染色體, 其異常發(fā)生率占染色體數(shù)目異常的80%~95%［3］。相較于FISH技術(shù)和羊水細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù), PRINS技術(shù)結(jié)合FISH和PCR的特點(diǎn), 最先用于DNA重復(fù)序列的分析, 具有操作快速簡(jiǎn)便、高度易控的特異性和成本經(jīng)濟(jì)等優(yōu)勢(shì), 已經(jīng)廣泛應(yīng)用于染色體數(shù)目異常的檢測(cè)。本研究中, 所有孕婦均行PRINS技術(shù)和FISH技術(shù)診斷。PRINS技術(shù)檢測(cè)產(chǎn)前21、18、13號(hào)染色體數(shù)目異常中的檢出率為100%, 與FISH技術(shù)檢測(cè)結(jié)果和染色體核型分析結(jié)果相符合。且PRINS技術(shù)的平均檢出時(shí)間均短于FISH技術(shù)。與FISH技術(shù)相比, PRINS技術(shù)無(wú)須使用價(jià)格高昂的FISH探針, 實(shí)驗(yàn)成本較FISH低廉。因此, PRINS技術(shù)在產(chǎn)前21、18、13號(hào)染色體數(shù)目異常中的檢出率較高, 且檢出時(shí)間短, 成本低廉,具有良好的應(yīng)用價(jià)值。

［1］ 黃元河,馮治,潘喬丹.引物原位標(biāo)記技術(shù)在人類(lèi)染色體非整倍體嵌合體診斷中的應(yīng)用.中國(guó)婦幼保健, 2013, 28(004): 714-716.

［2］ 趙欣榮,吳怡,韓旭,等.熒光原位雜交產(chǎn)前診斷染色體異常的臨床應(yīng)用.中國(guó)優(yōu)生與遺傳雜志, 2012, 20(5): 46-47.

［3］ 魏霞, 代紅瑩 ,高加良,等.引物原位標(biāo)記聯(lián)合核型分析快速檢測(cè)克氏綜合征.中國(guó)優(yōu)生與遺傳雜志, 2012,15(02):162-168.

2014-03-11］

550002 貴陽(yáng)市婦幼保健院優(yōu)生遺傳科