增殖性糖尿病性視網(wǎng)膜病變患者血清及玻璃體中PEDF和AngⅡ的表達*

王小敏，陳 悅

鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院眼科 鄭州 450052

增殖性糖尿病性視網(wǎng)膜病變患者血清及玻璃體中PEDF和AngⅡ的表達*

王小敏，陳 悅#

鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院眼科 鄭州 450052

#通訊作者，女，1964年9月生，教授，主任醫(yī)師，研究方向：眼底病與眼外傷，E-mail:chenyue@zzu.edu.cn

糖尿病性視網(wǎng)膜病變；色素上皮衍生因子；血管緊張素2

糖尿病性視網(wǎng)膜病變(diabetic retinopathy,DR)是糖尿病患者最嚴(yán)重的微血管并發(fā)癥之一，已成為當(dāng)今世界成年人主要致盲眼病之一。DR的發(fā)病機制尚不完全明確，臨床缺乏有效的預(yù)防和根治方案。目前發(fā)現(xiàn)眼內(nèi)血管形成刺激因子與抑制因子的失衡是DR發(fā)生的主要原因。色素上皮衍生因子(pigment epithelium derived factor,PEDF)和血管緊張素2(angiotensin 2,AngⅡ)在DR發(fā)生中的作用逐漸得到認識。該研究通過測定DR患者血清和玻璃體中兩者的含量，探討兩者與DR的關(guān)系。

1 對象與方法

1.1研究對象選擇2013年1月至7月在鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院眼科住院行玻璃體切割術(shù)的患者65例(65眼)。增殖性糖尿病性視網(wǎng)膜病變(proliferative diabetic retinopathy,PDR)組34例(34眼)，其中男18例，女16例，年齡47～72(53.9±2.6)歲，糖尿病病程為(11.1±0.9) a。 對照組31例(31眼)為單純孔源性視網(wǎng)膜脫離20例(20眼)和特發(fā)性黃斑裂孔11例(11眼),其中男17例，女14例，年齡40～70(50.1±2.2)歲。對照組排除標(biāo)準(zhǔn)為：患有糖尿病、高血壓等全身重大系統(tǒng)性疾病及眼部其他疾病。

1.2標(biāo)本采集血清：取患者晨起空腹靜脈血2 mL，3 500 r/min、4 ℃離心15 min后取上清液，置于無菌EP管內(nèi)，迅速放置于-80 ℃冰箱內(nèi)備用。玻璃體：取自玻璃體切割術(shù)中，在行標(biāo)準(zhǔn)三通道玻璃體切割術(shù)時，將5 mL一次性無菌注射器接在玻切管處，在未打開灌注閥前切除0.3～1.0 mL的玻璃體，將所得玻璃體液置于無菌EP管中，迅速置于-80 ℃冰箱內(nèi)備用。

1.3血清及玻璃體中PEDF和AngⅡ的檢測方法

采用雙抗體夾心ELISA法進行檢測，試劑盒均購自北京康為世紀(jì)生物科技有限公司，嚴(yán)格按照試劑盒說明書要求進行操作。主要步驟：加標(biāo)準(zhǔn)品在96孔酶標(biāo)包被板上，設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品孔12孔，劑量依次由低到高，每孔加標(biāo)準(zhǔn)品50 μL,每個劑量設(shè)2個平行孔；先加樣品稀釋液40 μL，然后再加待測樣品10 μL，37 ℃溫育30 min；將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水稀釋30倍后備用；洗滌5次，拍干，加酶標(biāo)試劑50 μL，37 ℃溫育30 min；洗滌5次，拍干，顯色；每孔加終止液50 μL，終止反應(yīng)；以空白孔調(diào)零，450 nm波長下依序測量各孔的吸光度值；建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，計算各樣本含量。

1.4統(tǒng)計學(xué)處理采用SPSS 19.0對數(shù)據(jù)進行分析，PDR組血清與玻璃體中PEDF和AngⅡ含量的比較采用重復(fù)測量數(shù)據(jù)的方差分析，2組間血清及玻璃體中PEDF和AngⅡ含量的比較采用兩獨立樣本的t檢驗，PDR組血清和玻璃體中AngⅡ與PEDF含量的關(guān)系采用Pearson積差相關(guān)分析，檢驗水準(zhǔn)α=0.05。

2 結(jié)果

2.1PDR組、對照組玻璃體和血清中AngⅡ及PEDF含量的比較結(jié)果見表1。

表1 PDR組、對照組玻璃體和血清中AngⅡ及PEDF含量的比較

*：與PDR組玻璃體比較，F(xiàn)=0.376，P=0.217；#：與PDR組玻璃體比較，F(xiàn)=14.348，P<0.001。

2.2PDR組血清、玻璃體中AngⅡ和PEDF含量的相關(guān)性分析結(jié)果PDR組血清中AngⅡ和PEDF含量呈正相關(guān)(r=0.530，P=0.042)，玻璃體中AngⅡ和PEDF含量無關(guān)(r=-0.418，P=0.121)。

3 討論

DR是一種缺血缺氧所致的增殖性病變，其最主要的病理生理改變?yōu)樾律苄纬珊脱?視網(wǎng)膜屏障破壞[1]。PDR的新生血管形成的病理機制可能與刺激和抑制新生血管信號的平衡失衡有關(guān)[2]。

PEDF是由Tombran-Tink等[3]于1989年從胎兒的視網(wǎng)膜色素上皮細胞(RPE)培養(yǎng)液中首次發(fā)現(xiàn)、分離并命名的一種蛋白質(zhì)，其相對分子質(zhì)量為50 000，屬于絲氨酸蛋白酶抑制劑超家族。研究[4]發(fā)現(xiàn), PEDF主要是一種眼部新生血管抑制因子，也是一種抗炎的細胞因子，可抑制過氧化氫引起的RPE凋亡，抑制炎癥及氧化應(yīng)激反應(yīng)，促進內(nèi)皮細胞凋亡等，從而抑制新生血管形成。 研究[5]發(fā)現(xiàn),在視網(wǎng)膜內(nèi)皮細胞中，PEDF 可以發(fā)揮抗血管生成作用，阻斷對糖尿病性視網(wǎng)膜的損傷來延緩DR的發(fā)展。其次，PEDF也是一種神經(jīng)營養(yǎng)因子,可刺激細胞外信號，調(diào)節(jié)激酶磷酸化, 促進細胞分化，通過控制細胞周期而影響細胞凋亡的過程，起到保護細胞作用[6-7]。目前臨床研究[8]表明，PDR患者的玻璃體及房水中PEDF的表達降低。而關(guān)于血清中PEDF的含量存在爭議。該研究結(jié)果顯示，PDR組玻璃體中PEDF的含量降低，和以往研究[8]結(jié)果一致;PDR組血清中PEDF含量低于對照組。

AngⅡ是腎素-血管緊張素系統(tǒng)(renin-angiotensin system,RAS)中的關(guān)鍵成分，前體為AngⅠ。 血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制劑(angiotensin converting enzyme inhibitor,ACEI)可抑制AngⅡ的生物合成。視網(wǎng)膜內(nèi)有AngⅡ受體。 DR患者視網(wǎng)膜的RAS 活性增強，活躍的RAS系統(tǒng)可誘導(dǎo)血管內(nèi)皮生長因子等活性成分的增加[9-12]。AngⅡ參與內(nèi)皮細胞功能的紊亂，它通過血管緊張素受體Ⅰ型通道增加單核細胞黏滯性，使得血管內(nèi)皮細胞形成單細胞層；還可促進白細胞與內(nèi)皮細胞的結(jié)合反應(yīng)，增加局部分泌的細胞因子如組織壞死因子等。這些均可導(dǎo)致血管內(nèi)皮功能紊亂、 血管痙攣、 血栓形成，引起視網(wǎng)膜組織缺血缺氧，導(dǎo)致新生血管形成，最終引起增殖性病變。另外，AngⅡ結(jié)合于內(nèi)皮細胞而誘導(dǎo)Ⅰ型纖溶酶原激活物抑制劑的產(chǎn)生，引起凝血機制平衡失調(diào)，導(dǎo)致血管性疾病發(fā)生[13-15]。該研究結(jié)果表明，PDR組玻璃體和血清中AngⅡ含量與對照組比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義，說明血清和玻璃體中AngⅡ含量的升高在PDR的發(fā)生發(fā)展中起到了重要的作用。而且PDR組血清中PEDF和AngⅡ含量呈正相關(guān)，玻璃體中PEDF和AngⅡ含量無關(guān)。

綜上所述，PEDF和AngⅡ可能共同參與了DR的發(fā)生發(fā)展，PEDF可能抑制了DR的進展，抑制新生血管的形成；AngⅡ可能促進了新生血管的形成，PEDF含量的降低及AngⅡ含量的升高可能共同促進了PDR的發(fā)生發(fā)展。研究[16-17]發(fā)現(xiàn)ACEI類藥物可有效控制PDR的發(fā)生發(fā)展。今后臨床在對DR的預(yù)防和治療上可以考慮ACEI類藥物及PEDF的應(yīng)用，這為DR的治療提供了新的思路。

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(2013-08-04 收稿 責(zé)任編輯 姜春霞)

*河南省教育廳基金資助項目 2011A320022

10.3969/j.issn.1671-6825.2014.01.037