HPV L1殼蛋白和MMP—2在宮頸病變表達(dá)及臨床意義

周利娟

【摘要】 目的 探討人乳頭狀瘤病毒（HPV）L1殼蛋白及MMP-2在不同宮頸病變表達(dá)及臨床意義。方法 宮頸疾病患者121例， 術(shù)前HPV-DNA均為陽性， 采用免疫組化方法檢測(cè)HPV L1殼蛋白和MMP-2在各級(jí)宮頸病變組織的表達(dá)情況。結(jié)果 121例患者中， HPV L1蛋白在正常宮頸組、CIN I組、CINⅡ組、CINⅢ組、SCC組陽性表達(dá)分別為69.69%（23/33）、83.33%（15/18）、36.84%（7/19）、4.70%（1/21）、0（0/30）。CIN中為37.93%（23/58）。除了CINⅢ與SCC比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）外， 其他不同宮頸病變間比較， 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；MMP-2 在正常宮頸組、CINⅠ組、CINⅡ組、CINⅢ組、SCC組的陽性表達(dá)分別為6.06%（2/33）、33.33%（6/18）、57.89%（11/19）、66.66%（14/21）、76.66%（23/30）， CIN中53.44%（31/58）。正常組織中MMP-2 的陽性率明顯低于CIN 組及SCC組。MMP-2 在正常宮頸組、CIN組、SCC組比較， 三組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。CINⅠ組中HPV L1蛋白陽性表達(dá)率最高， 隨著病變程度的增加， 其陽性表達(dá)率明顯下降。SCC組中MMP-2陽性表達(dá)率最高， 隨著病變程度的增加， 其陽性表達(dá)率明顯增加經(jīng)相關(guān)性結(jié)果分析顯示宮頸病變中HPV L1殼蛋白和MMP-2表達(dá)呈負(fù)相關(guān)（P<0.05）。結(jié)論 HPV L1殼蛋白陽性表達(dá)率隨著宮頸病變的演變及發(fā)展而呈降低趨勢(shì)， MMP-2陽性表達(dá)率隨著宮頸病變的演變及發(fā)展而呈增加趨勢(shì)。聯(lián)合二者在宮頸病變的發(fā)生發(fā)展中具有一定意義， 可作為宮頸癌前病變進(jìn)展的生物學(xué)標(biāo)志物。

【關(guān)鍵詞】 人乳頭狀瘤病毒L1殼蛋白；MMP-2；宮頸上皮內(nèi)瘤變；鱗狀細(xì)胞癌；免疫組化

宮頸上皮內(nèi)瘤變（CIN）反映了子宮頸癌發(fā)生發(fā)展中的連續(xù)過程， 通過篩查發(fā)現(xiàn)CIN， 及時(shí)治療高級(jí)別病變， 是預(yù)防子宮頸癌行之有效的措施[1]。研究已表明， 生殖道感染人乳頭瘤病毒（HPV）是婦女宮頸癌和癌前病變的主要危險(xiǎn)因素， HPV L1殼蛋白是HPV 感染復(fù)制早期所必須的結(jié)構(gòu)蛋白， 故可通過檢測(cè)HPV L1殼蛋白來研究HPV感染狀態(tài)。細(xì)胞外基質(zhì)（ extracellular matrix， ECM） 降解對(duì)于腫瘤的浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移和血管生成至關(guān)重要?；|(zhì)金屬蛋白酶（ MMPs） 是降解ECM 的重要酶類， MMP-2可能在宮頸癌細(xì)胞增殖、血管生成、浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移等過程中發(fā)揮重要作用。本研究通過免疫組化檢測(cè)HPV L1蛋白及MMP-2在不同宮頸病變過程的表達(dá)情況， 探討其在宮頸上皮內(nèi)瘤變及宮頸癌發(fā)展中的相關(guān)性。

1 資料與方法

1. 1 一般資料 入選2010年9月～2013年9月許昌市中心醫(yī)院手術(shù)治療的宮頸疾病患者121例， 術(shù)前HPV-DNA均為陽性， 其中宮頸鱗狀細(xì)胞癌（SCC）30例、CIN 58例（其中CIN I、CINⅠ、CINⅢ分別為18例、19例、21例）， 正常宮頸33例（因子宮良性病變而行子宮全切除標(biāo)本， 術(shù)前宮頸外觀正常， 術(shù)后病理診斷為宮頸炎標(biāo)本）。所有患者均無宮頸錐切、子宮切除、放化療史。

1. 2 方法 MMP-2及HPV L1檢測(cè)法應(yīng)用鏈霉素親生物素-過氧化物酶法（SP法）進(jìn)行檢測(cè)。

1. 3 試劑 HPV L1鼠抗人單克隆抗體購自賽泰公司， SP試劑盒及DAB酶底物顯色劑等均購自福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司。兔抗人MMP-2抗體購自北京博奧森科技實(shí)業(yè)有限公司。

1. 4 判斷和評(píng)估標(biāo)準(zhǔn) MMP-2結(jié)果按照以下評(píng)判標(biāo)準(zhǔn)[2]進(jìn)行半定量判斷：兩位病理醫(yī)師專家各自獨(dú)立觀察隨機(jī)每例切片隨機(jī)選取10個(gè)高倍視野進(jìn)行結(jié)果判定。按染色強(qiáng)度及陽性細(xì)胞數(shù)所占百分比綜合計(jì)分。即：0分為陽性細(xì)胞數(shù)<5%， 1分為5%～25%， 2分為 26%～50%， 3分為51%～75%， 4分為>75% 。按著色強(qiáng)度記分：1分為染色呈淡黃色， 2分為染色呈黃色， 3分為染色呈棕黃色。兩種記分的乘積即為陽性強(qiáng)度：0分為陰性（-）， 1～4分為弱陽性（+）， 5～8分為中度陽性（++）， 9～12分為強(qiáng)陽性（+++）。有一個(gè)被染色的細(xì)胞核呈紅色即認(rèn)為HPV L1 殼蛋白表達(dá)呈陽性。

1. 5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用 SPSS18.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理。計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)和Fishers 確切概率法， 相關(guān)分析使用單因素直線相關(guān)分析， P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2. 1 HPV L1殼蛋白和MMP-2在不同宮頸病變組織中的表達(dá) HPV L1殼蛋白在正常宮頸組、CINⅠ組、CINⅡ組、CINⅢ組、SCC組陽性表達(dá)分別為69.69%（23/33）、83.33% （15/18）、36.84%（7/19）、4.70%（1/21）、0（0/30）。CIN中為37.93%（23/58）。除了CINⅢ與SCC比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）外， 其他不同宮頸病變間比較， 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；MMP-2 在正常宮頸組、CINⅠ組、CINⅡ組、CINⅢ組、SCC組的陽性表達(dá)分別為6.06%（2/33）、33.33%（6/18）、57.89%（11/19）、66.66%（14/21）、76.66%（23/30）， CIN中53.44%（31/58）。正常組織中MMP-2 的陽性率明顯低于CIN組及SCC組。MMP-2 在正常宮頸組、CIN組、SCC組比較， 三組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見表1。

2. 2 HPV L1 殼蛋白和MMP-2的相關(guān)性 CIN I組中HPV L1蛋白陽性表達(dá)率最高， 隨著病變程度的增加， 其陽性表達(dá)率明顯下降。SCC組中MMP-2陽性表達(dá)率最高， 隨著病變程度的增加， 其陽性表達(dá)率明顯增加經(jīng)相關(guān)性結(jié)果分析顯示宮頸病變中HPV L1殼蛋白與MMP-2表達(dá)呈負(fù)相關(guān)（P<0.05）， 見表2。endprint

3 討論

宮頸癌是婦科常見腫瘤之一， 有年輕化的趨勢(shì)， 主要源于對(duì)婦女進(jìn)行有效的宮頸篩查和癌前病變的早期診斷， 宮頸癌的5 年生存率在90%以上， 因此有效地預(yù)測(cè)宮頸癌的早期病變即可通過早期干預(yù)降低宮頸癌的死亡率[3]。

目前已證實(shí)高危型HPV感染是宮頸癌發(fā)生的重要原因。近年感染HPV的有效評(píng)估指標(biāo)為L(zhǎng)1蛋白， 宮頸惡變程度的增高， HPV L1蛋白陽性表達(dá)率降低。Lee H等[4]則提出宿主病毒相互干擾學(xué)說， 即隨著CIN分度的升高甚則惡變， 可缺失L1殼蛋白。HPV L1殼蛋白陰性提示感染HPV具有進(jìn)展性， 出現(xiàn)宮頸癌或CIN的高發(fā)病率。作者的研究表明隨著宮頸病變級(jí)別的增高， HPV L1殼蛋白在慢性宮頸炎、CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ、宮頸鱗癌陽性表達(dá)逐漸減少， 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）， 同相關(guān)研究一致。

基質(zhì)金屬蛋白酶（MMPs）是降解ECM 的重要酶類。MMP-2為MMPs家族成員， 推測(cè) MMP-2的陽性表達(dá)提示， 腫瘤細(xì)胞擁有侵襲、轉(zhuǎn)移的能力， 細(xì)胞就具有惡性侵略的特性[5]。滕燕伊等[6]采用免疫組化研究顯示：MMP-2在宮頸癌中的表達(dá)高于CIN及正常宮頸組織， 并認(rèn)為 MMP-2是早期腫瘤的標(biāo)志。作者的研究表明MMP-2 在正常宮頸組、CIN 組、SCC組的陽性表達(dá)分別為6.06%（2/33）、53.44%（31/58）、76.66%（23/30）， 正常組織中MMP-2的陽性率明顯低于CIN 組及SCC組。MMP-2在正常宮頸組、CIN組、SCC組比較， 三組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）， 同相關(guān)研究一致；作者同時(shí)檢測(cè)HPV L1殼蛋白和MMP-2的表達(dá)顯示兩者在宮頸病變的發(fā)生發(fā)展過程中具有負(fù)相關(guān)， 提示兩者聯(lián)合能用于宮頸癌的早期診斷、預(yù)后判斷及術(shù)后早期復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的隨訪監(jiān)測(cè)， 但仍需多中心研究結(jié)論。

綜上所述， 通過對(duì)不同宮頸組織中HPV L1蛋白與MMP-2的免疫組化測(cè)定表明：HPV Ll蛋白表達(dá)隨著宮頸病變程度的加重而下降；MMP-2隨著宮頸病變程度的加重而增加。因此， 作者推測(cè)HPV L1蛋白與MMP-2在宮頸病變的發(fā)生發(fā)展中具有一定意義， 可以幫助了解宮頸的病變程度， 預(yù)測(cè)宮頸病變的發(fā)展趨勢(shì)。

參考文獻(xiàn)

[1] 謝幸.婦產(chǎn)科學(xué).第8版.北京：人民衛(wèi)生出版社， 2013：301-302.

[2] 朱華， 施錚錚， 楊孝軍， 等. Survivin、Bcl-2、HPV 16 /18在宮頸上皮內(nèi)瘤變及宮頸癌中的表達(dá)及臨床意義.實(shí)用婦產(chǎn)科雜志， 2010， 26 （1）：57.

[3] 陳恒禧， 甘曉玲， 傅璟. HPV L1 檢測(cè)預(yù)測(cè)宮頸鱗狀上皮內(nèi)病變預(yù)后的意義.現(xiàn)代婦產(chǎn)科進(jìn)展， 2009， 18（11）：865.

[4] Lee H， Lee KJ， Jung CK， et al. Expression of HPVL1 capsid protein in cervical specimens with HPV infection. Diagn Cytopathol， 2008， 36（12）：864.

[5] Banerji A， Chakrabarti J， Mitra A， et al. Cell menbrane-associated MT1-MMP-dependent activation of pro-MMP-2 in A375 melanoma cells. J Env Path Tox Oncol， 2005， 24（1）：3-17.

[6] 滕燕伊， 劉曉云， 鄭洪， 等. Ki-67、MMP-7、MMP-2 在宮頸 CIN 和宮頸癌中的表達(dá)及意義.重慶醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)， 2010， 35（7）：989-991.

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宮頸癌是婦科常見腫瘤之一， 有年輕化的趨勢(shì)， 主要源于對(duì)婦女進(jìn)行有效的宮頸篩查和癌前病變的早期診斷， 宮頸癌的5 年生存率在90%以上， 因此有效地預(yù)測(cè)宮頸癌的早期病變即可通過早期干預(yù)降低宮頸癌的死亡率[3]。

目前已證實(shí)高危型HPV感染是宮頸癌發(fā)生的重要原因。近年感染HPV的有效評(píng)估指標(biāo)為L(zhǎng)1蛋白， 宮頸惡變程度的增高， HPV L1蛋白陽性表達(dá)率降低。Lee H等[4]則提出宿主病毒相互干擾學(xué)說， 即隨著CIN分度的升高甚則惡變， 可缺失L1殼蛋白。HPV L1殼蛋白陰性提示感染HPV具有進(jìn)展性， 出現(xiàn)宮頸癌或CIN的高發(fā)病率。作者的研究表明隨著宮頸病變級(jí)別的增高， HPV L1殼蛋白在慢性宮頸炎、CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ、宮頸鱗癌陽性表達(dá)逐漸減少， 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）， 同相關(guān)研究一致。

基質(zhì)金屬蛋白酶（MMPs）是降解ECM 的重要酶類。MMP-2為MMPs家族成員， 推測(cè) MMP-2的陽性表達(dá)提示， 腫瘤細(xì)胞擁有侵襲、轉(zhuǎn)移的能力， 細(xì)胞就具有惡性侵略的特性[5]。滕燕伊等[6]采用免疫組化研究顯示：MMP-2在宮頸癌中的表達(dá)高于CIN及正常宮頸組織， 并認(rèn)為 MMP-2是早期腫瘤的標(biāo)志。作者的研究表明MMP-2 在正常宮頸組、CIN 組、SCC組的陽性表達(dá)分別為6.06%（2/33）、53.44%（31/58）、76.66%（23/30）， 正常組織中MMP-2的陽性率明顯低于CIN 組及SCC組。MMP-2在正常宮頸組、CIN組、SCC組比較， 三組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）， 同相關(guān)研究一致；作者同時(shí)檢測(cè)HPV L1殼蛋白和MMP-2的表達(dá)顯示兩者在宮頸病變的發(fā)生發(fā)展過程中具有負(fù)相關(guān)， 提示兩者聯(lián)合能用于宮頸癌的早期診斷、預(yù)后判斷及術(shù)后早期復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的隨訪監(jiān)測(cè)， 但仍需多中心研究結(jié)論。

綜上所述， 通過對(duì)不同宮頸組織中HPV L1蛋白與MMP-2的免疫組化測(cè)定表明：HPV Ll蛋白表達(dá)隨著宮頸病變程度的加重而下降；MMP-2隨著宮頸病變程度的加重而增加。因此， 作者推測(cè)HPV L1蛋白與MMP-2在宮頸病變的發(fā)生發(fā)展中具有一定意義， 可以幫助了解宮頸的病變程度， 預(yù)測(cè)宮頸病變的發(fā)展趨勢(shì)。

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[3] 陳恒禧， 甘曉玲， 傅璟. HPV L1 檢測(cè)預(yù)測(cè)宮頸鱗狀上皮內(nèi)病變預(yù)后的意義.現(xiàn)代婦產(chǎn)科進(jìn)展， 2009， 18（11）：865.

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[6] 滕燕伊， 劉曉云， 鄭洪， 等. Ki-67、MMP-7、MMP-2 在宮頸 CIN 和宮頸癌中的表達(dá)及意義.重慶醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)， 2010， 35（7）：989-991.

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宮頸癌是婦科常見腫瘤之一， 有年輕化的趨勢(shì)， 主要源于對(duì)婦女進(jìn)行有效的宮頸篩查和癌前病變的早期診斷， 宮頸癌的5 年生存率在90%以上， 因此有效地預(yù)測(cè)宮頸癌的早期病變即可通過早期干預(yù)降低宮頸癌的死亡率[3]。

目前已證實(shí)高危型HPV感染是宮頸癌發(fā)生的重要原因。近年感染HPV的有效評(píng)估指標(biāo)為L(zhǎng)1蛋白， 宮頸惡變程度的增高， HPV L1蛋白陽性表達(dá)率降低。Lee H等[4]則提出宿主病毒相互干擾學(xué)說， 即隨著CIN分度的升高甚則惡變， 可缺失L1殼蛋白。HPV L1殼蛋白陰性提示感染HPV具有進(jìn)展性， 出現(xiàn)宮頸癌或CIN的高發(fā)病率。作者的研究表明隨著宮頸病變級(jí)別的增高， HPV L1殼蛋白在慢性宮頸炎、CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ、宮頸鱗癌陽性表達(dá)逐漸減少， 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）， 同相關(guān)研究一致。

基質(zhì)金屬蛋白酶（MMPs）是降解ECM 的重要酶類。MMP-2為MMPs家族成員， 推測(cè) MMP-2的陽性表達(dá)提示， 腫瘤細(xì)胞擁有侵襲、轉(zhuǎn)移的能力， 細(xì)胞就具有惡性侵略的特性[5]。滕燕伊等[6]采用免疫組化研究顯示：MMP-2在宮頸癌中的表達(dá)高于CIN及正常宮頸組織， 并認(rèn)為 MMP-2是早期腫瘤的標(biāo)志。作者的研究表明MMP-2 在正常宮頸組、CIN 組、SCC組的陽性表達(dá)分別為6.06%（2/33）、53.44%（31/58）、76.66%（23/30）， 正常組織中MMP-2的陽性率明顯低于CIN 組及SCC組。MMP-2在正常宮頸組、CIN組、SCC組比較， 三組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）， 同相關(guān)研究一致；作者同時(shí)檢測(cè)HPV L1殼蛋白和MMP-2的表達(dá)顯示兩者在宮頸病變的發(fā)生發(fā)展過程中具有負(fù)相關(guān)， 提示兩者聯(lián)合能用于宮頸癌的早期診斷、預(yù)后判斷及術(shù)后早期復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的隨訪監(jiān)測(cè)， 但仍需多中心研究結(jié)論。

綜上所述， 通過對(duì)不同宮頸組織中HPV L1蛋白與MMP-2的免疫組化測(cè)定表明：HPV Ll蛋白表達(dá)隨著宮頸病變程度的加重而下降；MMP-2隨著宮頸病變程度的加重而增加。因此， 作者推測(cè)HPV L1蛋白與MMP-2在宮頸病變的發(fā)生發(fā)展中具有一定意義， 可以幫助了解宮頸的病變程度， 預(yù)測(cè)宮頸病變的發(fā)展趨勢(shì)。

參考文獻(xiàn)

[1] 謝幸.婦產(chǎn)科學(xué).第8版.北京：人民衛(wèi)生出版社， 2013：301-302.

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[3] 陳恒禧， 甘曉玲， 傅璟. HPV L1 檢測(cè)預(yù)測(cè)宮頸鱗狀上皮內(nèi)病變預(yù)后的意義.現(xiàn)代婦產(chǎn)科進(jìn)展， 2009， 18（11）：865.

[4] Lee H， Lee KJ， Jung CK， et al. Expression of HPVL1 capsid protein in cervical specimens with HPV infection. Diagn Cytopathol， 2008， 36（12）：864.

[5] Banerji A， Chakrabarti J， Mitra A， et al. Cell menbrane-associated MT1-MMP-dependent activation of pro-MMP-2 in A375 melanoma cells. J Env Path Tox Oncol， 2005， 24（1）：3-17.

[6] 滕燕伊， 劉曉云， 鄭洪， 等. Ki-67、MMP-7、MMP-2 在宮頸 CIN 和宮頸癌中的表達(dá)及意義.重慶醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)， 2010， 35（7）：989-991.

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