影響荷斯坦奶牛胚胎移植成功率的因素

鄒阿玲，張光偉，肖 銳，張建軍，劉水濤，牛志宏，李 強

(1.克拉瑪依綠成農(nóng)業(yè)開發(fā)有限責任公司，新疆 克拉瑪依 834000；2.新疆動物胚胎工程技術研究中心，新疆 呼圖壁 831203)

商品化牛胚胎移植工作在我國已經(jīng)進行了多年，但由于多種因素的影響，不同的作者獲得了不同的結論。對于長期從事胚胎移植的商業(yè)化公司，術者之間的移植結果差異相對較小。從我們多年實踐可以看出，有的術者在多數(shù)情況下能獲得較高的移植妊娠率，但有的術者的移植妊娠率出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況。術者4在多數(shù)牛場的移植率均能達到50%以上，但在本試驗的牛場，移植妊娠率最低(37.5%)。

在移植不同發(fā)育階段胚胎的報道中，因移植地點和方法等的不同，出現(xiàn)了完全不同的結果。Dochi等報道[1]，桑葚胚的妊娠率高于囊胚。也有人認為，囊胚的妊娠率高于桑葚胚[2]。而Otler等[3]則報道，囊胚與桑葚胚的妊娠率相似。李樹靜等報道[4]，桑葚胚和囊胚，囊胚和擴張囊胚的妊娠率差異不顯著，但桑葚胚和擴張囊胚的妊娠率差異顯著。我們的結果表明，桑葚胚與囊胚的移植妊娠率差異不顯著，但擴張囊胚的妊娠率顯著較高(見表6)。

1 材料和方法

2003年，在新疆伊犁佳弘牛場進行了荷斯坦奶牛胚胎移植。該場受體牛為當?shù)赝练N牛，中等膘情。

1.1 胚胎

來自發(fā)情后第7～7.5天的高產(chǎn)荷斯坦奶牛青年母牛，胚胎發(fā)育階段分別為致密桑葚胚、早期囊胚、囊胚和擴張囊胚。

1.2 胚胎解凍

30～35 ℃水浴10 s解凍胚胎。采用一步法移植胚胎。

1.3 受體牛的選擇和同期發(fā)情

根據(jù)受體母牛的黃體情況，用PGF2α(齊魯制藥廠)進行同期發(fā)情處理，發(fā)情后6～8 d進行移植胚胎。移植后60～80 d，經(jīng)直腸檢查診斷是否妊娠。

2 結果

移植結果表明(見表1)，不同的胚胎移植人員，移植胚胎后，得到了不同的結果。最高妊娠率為67.1%(術者1)，最低為37.5%(術者4)，兩者差異極顯著(P<0.01)。術者2和術者3的移植結果差異不顯著(P>0.05)。

表1 不同術者胚胎移植的妊娠率

不同胚胎發(fā)育階段的胚胎移植后妊娠率，因不同術者而有所不同。術者1移植的不同發(fā)育階段的胚胎，妊娠率均較高(見表2)。術者2的擴張囊胚移植妊娠率明顯高于桑葚胚和囊胚(見表3)。術者2和術者3的各組胚胎的妊娠率沒有明顯差異(見表3和4)。術者4整體妊娠率均較低，但不同發(fā)育階段的胚胎之間差異不顯著(見表5)。4個術者移植的平均妊娠率：致密桑葚胚和早期囊胚為50.2%，囊胚為47.2%，擴張囊胚為66.7%。

表2 不同發(fā)育階段的胚胎對妊娠率的影響(術者1)

注：CM致密桑葚胚，EB早期囊胚，B囊胚，EXB擴張囊胚

表3 不同發(fā)育階段的胚胎對妊娠率的影響(術者2)

表4 不同發(fā)育階段的胚胎對妊娠率的影響(術者3)

表5 不同發(fā)育階段的胚胎對妊娠率的影響(術者4)

表6 不同發(fā)育階段的胚胎對妊娠率的影響

3 討論

本研究是在同一年，同一個牛場，使用同一個人冷凍的胚胎，移植的均為A級胚胎。從試驗結果看，不同的移植人員，移植的妊娠率存在差異。經(jīng)過胚胎移植人員的總結交流，筆者認為，主要因素有以下幾點：受體的選擇，包括發(fā)情后的黃體和子宮質地的選擇；受體發(fā)情的準確性，包括發(fā)情的準確開始和結束時間，發(fā)情持續(xù)期的長短；胚胎不同發(fā)育階段，胚胎越接近受體母牛的子宮內(nèi)環(huán)境，妊娠率越高。我們的擴張囊胚移植后妊娠率較高(66.7%)。

很多進行胚胎移植的牛場，由于人工成本較高，在大規(guī)模進行胚胎移植時，不進行發(fā)情觀察，按PG注射后60 h，作為發(fā)情開始時間，之后的第7天，檢查黃體后，移植胚胎。所以，就不同發(fā)育階段胚胎而言，由于牛場的情況不同，同期發(fā)情方法的差異，以及不同的處理方法和發(fā)情后移植的不同天數(shù)，許多學者對不同發(fā)育階段胚胎的移植妊娠率，得出了不同的結果。

[1] Dochi O，et al.Direct transfer of propylene glycol or ethylene glycol under-on-farm conditions in an interacted embryo transfer program.Theriogenology [J]，49，1051-1054.

[2] Donaldson L E et al.Matching of embryo stages and grade with recipient oestrous synchrony in bovine embryo transfer.Vet.Rec.1985,489-490.

[3] Other，J.et al.pregnancy rate of fresh and frozen thawed cattle embryo.Proc.of the 10th proceedings of cryopreserved bovine embryo.Theriogenology [J].1998，49，abstract.

[4] 李樹靜.牛胚胎的發(fā)育階段和質量對移植妊娠的影響研究[C].〈中國畜牧獸醫(yī)學會繁殖學分會〉，2006，360-362.