高同型半胱氨酸、淀粉樣β蛋白和腫瘤壞死因子-α在阿爾茨海默病中的表達(dá)意義

郭軍英 陳東偉 焦建軍 趙云霞 陳石平

·論著·

高同型半胱氨酸、淀粉樣β蛋白和腫瘤壞死因子-α在阿爾茨海默病中的表達(dá)意義

郭軍英 陳東偉 焦建軍 趙云霞 陳石平

目的研究高同型半胱氨酸、淀粉樣β蛋白和腫瘤壞死因子-α在阿爾茨海默病中的表達(dá)意義。方法129例癡呆患者根據(jù)患者臨床表現(xiàn)和影像學(xué)診斷分為AD組(n=65)和VD組(n=64)，選取同期健康體檢者30例作為正常對照組。取患者入院時清晨空腹周靜脈血3管，每管5 ml，正常對照組為體檢時抽取的血液，另抽取腦脊液2 ml。采用熒光偏振法測定高同型半胱氨酸，采用放射免疫測定法測定淀粉樣β蛋白和腫瘤壞死因子-α。結(jié)果正常對照組高同型半胱氨酸、淀粉樣β蛋白水平與AD組、VD組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。正常對照組和VD組腦脊液中腫瘤壞死因子-α水平與AD組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。AD組淀粉樣β蛋白水平與VD組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。重度AD高同型半胱氨酸、淀粉樣β蛋白、腫瘤壞死因子-α水平與輕度比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，中度AD淀粉樣β蛋白水平與輕度、重度比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。中度AD腫瘤壞死因子-α水平與重度比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論AD患者高同型半胱氨酸、淀粉樣β蛋白和腫瘤壞死因子-α存在高表達(dá)，且其表達(dá)水平隨著病情加重而遞增。

阿爾茨海默?。桓咄桶腚装彼?；淀粉樣β蛋白；腫瘤壞死因子-α

阿爾茨海默病(AD)是一種起病隱匿且不斷發(fā)展的的神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病，主要表現(xiàn)為認(rèn)知障礙和精神行為異常。隨著我國步入老齡化社會，其發(fā)病人數(shù)逐漸增多，發(fā)病率也日益增加，其對病患、家屬社會帶來了一定影響[1]。目前AD的發(fā)病原因不明，其發(fā)病機(jī)制有多種學(xué)說，且臨床表現(xiàn)與血管性癡呆相近，對臨床確切診斷、治療和療效判定帶來了一定困難[2-4]。因此，特異性的實(shí)驗(yàn)室檢測指標(biāo)在診斷和鑒別診斷中有重要意義。我院通過對文獻(xiàn)匯總分析，篩選出高同型半胱氨酸、淀粉樣β蛋白和腫瘤壞死因子-α作為AD的特異性檢測指標(biāo)，以期對臨床工作提供借鑒。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取河北省趙縣人民醫(yī)院2012年8月至2013年11月在我院就診的129例癡呆患者作為研究對象，入選患者臨床病歷資料完整，其中男83例，女46例；年齡47～91歲，平均年齡(68±10)歲；文化程度：小學(xué)及以下40例，初中33例，高中37例，大學(xué)及以上19例；病程4～62個月，平均病程(41±23)個月；合并心臟病病史19例，糖尿病病史21例，高血壓病史62例。根據(jù)患者臨床表現(xiàn)和影像學(xué)診斷分為AD組(n=65)和VD組(n=64)。AD組中，男42例，女23例；年齡47～89歲，平均年齡(67±11)歲；文化程度：小學(xué)及以下20例，初中16例，高中19例，大學(xué)及以上10例；病程4～62個月，平均病程(42±21)個月；合并心臟病病史10例，糖尿病病史10例，高血壓病史33例；根據(jù)臨床癡呆評定量表，輕度19例、中度24例、重度22例。VD組中，男41例，女23例；年齡48～91歲，平均年齡(68±9)歲；文化程度：小學(xué)及以下20例，初中17例，高中18例，大學(xué)及以上9例；病程4～61個月，平均病程(40±22)個月；合并心臟病病史9例，糖尿病病史11例，高血壓病史29例。選取同期健康體檢者30例作為對照組，其中男17例，女13例；年齡45～72歲，平均年齡(65±12)歲；文化程度：小學(xué)及以下15例，初中4例，高中6例，大學(xué)及以上5例；合并心臟病病史6例，糖尿病病史5例，高血壓病史11例。3組性別比、年齡、文化程度、合并癥發(fā)病率間比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。

1.2 入選與排除標(biāo)準(zhǔn)

1.2.1 入選標(biāo)準(zhǔn)：①AD患者符合美國國立神經(jīng)病語言障礙卒中研究所AD及相關(guān)疾病協(xié)會(NINCDS-ADRDA)診斷標(biāo)準(zhǔn)；②VD患者符合《中國癡呆診療指南》相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)；③入選前一個月未服用促進(jìn)智力發(fā)育或其他治療精神疾病藥物；④研究均得到患者家屬理解同意，并簽署知情同意書。

1.2.2 排除標(biāo)準(zhǔn)：①排除其他原因?qū)е碌陌V呆，如帕金森病癡呆、腦部腫瘤或癲癇導(dǎo)致的癡呆、酗酒或藥物導(dǎo)致的癡呆等；②有其他精神疾患、語言或聽力障礙或其他原因?qū)е陆Y(jié)果偏倚或無法配合試驗(yàn)進(jìn)行者。

1.3 方法 取患者入院時清晨空腹周靜脈血2管，每管5 ml，正常對照組為體檢時抽取的血液，血液放置于肝素抗凝管中，食管為一次性的無熱源，無內(nèi)毒素試管，室溫放置2 h后，采用離心機(jī)離心，1 000 r/min，取上清液進(jìn)行測定。另抽取腦脊液2 ml測定腫瘤壞死因子-α。

1.3.1 高同型半胱氨酸：采用熒光偏振法測定，選用美國雅培公司生產(chǎn)的AXSYM全自動免疫化學(xué)發(fā)光分析儀，將已包被了抗體的塑料微珠和待測標(biāo)本加入反應(yīng)杯中，再加入堿性磷酸酶標(biāo)記的抗體，經(jīng)溫育后，形成固相包被抗體-抗原-酶標(biāo)記抗體復(fù)合物。然后將其轉(zhuǎn)移到玻璃纖維柱上，用緩沖液洗滌，沒有結(jié)合的抗原、酶標(biāo)抗體被洗去，結(jié)合抗原抗體的塑料微珠則被保留在纖維柱濾膜上。這時再加入底物4-MUP，酶標(biāo)抗體上的堿性磷酸酶將4-MUP分解，脫磷酸形成4-MU。它在365 nm激發(fā)光的照射下，發(fā)出448 nm的熒光。經(jīng)過熒光讀數(shù)儀的記錄、放大，最后由電腦計算出被測物質(zhì)的含量。

1.3.2 淀粉樣β蛋白：放射免疫分析法，采用上海研域生物科技有限公司生產(chǎn)的人β淀粉樣蛋白1-42 (Aβ1-42)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒。設(shè)定空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔和待測樣品孔分別進(jìn)行加樣，后孵育90 min，棄液體甩干，每孔加入生物素化抗體工作液，棄液體，甩干、洗板3次，后加入酶結(jié)合物工作也，再次棄孔內(nèi)液體，甩干、洗板5次，然后每孔加入底物溶液，覆膜37℃孵育15 min，每孔加終止液，終止反應(yīng)，立即采用酶標(biāo)儀在450 nm波長測定各孔光密度值。

1.3.3 腫瘤壞死因子α：放射免疫分析法測定，采用上海撫生實(shí)業(yè)有限公司生產(chǎn)的腫瘤壞死因子αElisa試劑盒。實(shí)驗(yàn)前試劑充分混勻，避免產(chǎn)生氣泡，加入稀釋好的標(biāo)準(zhǔn)品和待測樣品于反應(yīng)孔，立即加入生物素標(biāo)記的抗體，覆膜，震蕩混勻，37℃孵育1 h，棄孔內(nèi)液體，洗滌，重復(fù)3次。每孔加入親和鏈霉素-HRP，震蕩混勻，37℃孵育0.5 h，棄孔內(nèi)液體，洗滌。每孔加入第五A、B震蕩混勻，37℃孵育10 min，取出酶標(biāo)板，加入終止液，立即在450 nm波長測定各孔光密度值。

2 結(jié)果

2.1 3組檢測指標(biāo)比較 對照組高同型半胱氨酸、淀粉樣β蛋白水平與AD組、VD組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。對照組和VD組腦脊液中腫瘤壞死因子-α水平與AD組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。AD組淀粉樣β蛋白水平與VD組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。見表1。

表1 3組檢測指標(biāo)比較

表1 3組檢測指標(biāo)比較

組別高同型半胱氨酸(μmol/L)淀粉樣β蛋白(ng/ml)腫瘤壞死因子-α(ng/ml)AD組(n=65)26±11652±121152±13VD組(n=64)24±10 530±101* 116±17*對照組(n=30) 15±6*# 355±90*# 111±21* F值13.27101.47102.28 P值<0.01<0.01<0.01

注：與AD組比較，*P<0.01；與VD組比較，#P<0.01

2.2 不同嚴(yán)重程度AD觀察指標(biāo)比較 重度AD高同型半胱氨酸、淀粉樣β蛋白、腫瘤壞死因子-α水平與輕度比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，中度AD淀粉樣β蛋白水平與輕度、重度比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。中度AD腫瘤壞死因子-α水平與重度比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

表2 不同嚴(yán)重程度AD觀察指標(biāo)水平比較

表2 不同嚴(yán)重程度AD觀察指標(biāo)水平比較

組別高同型半胱氨酸(μmol/L)淀粉樣β蛋白(ng/ml)腫瘤壞死因子-α(ng/ml)輕度(n=19)15±6664±139125±17中度(n=22)19±8 586±123*128±16重度(n=24) 23±11* 465±120#△ 139±17*△F值4.4312.794.35P值<0.05<0.01

注：與輕度比較，*P<0.05，#P<0.01；與中度比較，△P<0.05

3 討論

AD是世界范圍內(nèi)中老年人普遍發(fā)生的慢性神經(jīng)退行性疾病，隨著人口老齡化，AD的發(fā)病率日益增加。特異性指標(biāo)聯(lián)合檢測，對AD的診斷和鑒別診斷有重要意義。研究發(fā)現(xiàn)，高同型半胱氨酸是AD發(fā)病的危險因素[2]。研究表明AD患者大腦存在明顯的炎癥反應(yīng)，且可以表達(dá)出多種炎性因子[3]。淀粉樣β蛋白是近年，淀粉樣β蛋白成為AD研究的熱點(diǎn)，美國國立衛(wèi)生研究院研究表明，淀粉樣β蛋白的分子結(jié)構(gòu)決定了AD的不同的臨床表現(xiàn)和不同的腦損傷程度[5]。

3.1 高同型半胱氨酸 是一種含巰基的氨基酸，其與心腦血管疾病密切相關(guān)。研究發(fā)現(xiàn)高同型半胱氨酸可以通過毒性、應(yīng)激等作用損害患者的認(rèn)知功能[6]。高水平的高同型半胱氨酸可以增加患者氧自由基的含量，促進(jìn)NO的生成，加重AD患者的病情。本研究發(fā)現(xiàn)AD患者高同型半胱氨酸水平與正常對照組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，且重度AD高同型半胱氨酸水平與輕、中度AD比較明顯升高(P<0.05)。這與相關(guān)研究結(jié)果相近。

3.2 淀粉樣β蛋白 淀粉樣β蛋白由β淀粉樣前體蛋白水解生成，其在細(xì)胞基質(zhì)沉淀、聚積后具有很強(qiáng)的神經(jīng)毒性作用。其沉積不僅與神經(jīng)元的退行性病變有關(guān)，可以激活一系列病理事件，包括星型膠質(zhì)細(xì)胞和小膠質(zhì)細(xì)胞的激活、血腦屏障的破環(huán)和微循環(huán)的變化等，是AD患者腦內(nèi)老年斑周邊神經(jīng)元變性和死亡的主要原因[5]。本研究發(fā)現(xiàn)AD患者淀粉樣β蛋白水平與VD患者和健康體檢者比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，且隨著AD病情的不斷加重，其表達(dá)水平不斷降低(P<0.05)。因此，淀粉樣β蛋白可以作為AD、VD的鑒別診斷標(biāo)準(zhǔn)之一。

3.3 腫瘤壞死因子-α 研究表明，AD發(fā)生發(fā)展過程中炎癥反應(yīng)起到了重要作用[3]。其在病灶區(qū)的明顯表達(dá)，促進(jìn)了相關(guān)急性期蛋白的產(chǎn)生，尤其增加了淀粉樣β蛋白的沉淀、聚積，造成線粒體能量代謝障礙，細(xì)胞結(jié)構(gòu)的破壞，甚至誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，導(dǎo)致病情不斷加重。本研究中AD組腦脊液中腫瘤壞死因子-α的表達(dá)明顯高于VD組和正常對照組(P<0.05)，且其表達(dá)水平隨AD病情的加重而增加(P<0.05)。

綜上所訴，AD患者高同型半胱氨酸、淀粉樣β蛋白和腫瘤壞死因子-α存在高表達(dá)，且其表達(dá)水平隨著病情加重而遞增。因此AD患者炎性因子的高水平表達(dá)和淀粉樣β蛋白的沉積，可加重神經(jīng)毒性，使患者病情進(jìn)一步惡化，上述三項(xiàng)指標(biāo)可反應(yīng)出AD的疾病進(jìn)程，能作為臨床指導(dǎo)診斷和療效判定的依據(jù)。

1 林英堂，邢孔鴦，李龍宣.阿爾茨海默病不同臨床階段腦脊液中炎前和抗炎細(xì)胞因子水平的變化.廣東醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2006,24:349-350.

2 徐安平，李璐，李衛(wèi)寧，等.阿爾茨海默病患者血清同型半胱氨酸水平變化.微循環(huán)學(xué)雜志，2012,22:52-53,56.

3 曾赤佳，孟霞，胡河.阿爾茨海默病患者淀粉樣β蛋白和腫瘤壞死因子測定的臨床意義.中國基層醫(yī)藥，2004,11:1461-1462.

4 吳映曼，蔡毅.阿爾茨海默病患者血清和腦脊液中腫瘤壞死因子-α及IL-6和IL-8水平研究.中國全科醫(yī)學(xué)，2010,13:3738-3740.

5 李毅，張中興，呂路線，等.阿爾茨海默病與血管性癡呆患者腦脊液tau蛋白及β-淀粉樣蛋白1-42濃度的對照研究.中華精神科雜志，2004,37:220-222.

6 張媛媛，張本恕.同型半胱氨酸與阿爾茨海默病及血管性癡呆.中風(fēng)與神經(jīng)疾病雜志，2007,24:573-575.

10.3969/j.issn.1002-7386.2014.07.018

051530 河北省趙縣人民醫(yī)院(郭軍英、陳東偉、焦建軍)；河北省趙縣中醫(yī)院(趙云霞、陳石平)

R 742

A

1002-7386(2014)07-1008-03

2013-10-28)