• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    魚(yú)肉中磺胺類抗生素的表面增強(qiáng)拉曼光譜探測(cè)與分析

    2014-08-27 01:18:54馬海寬韓曉紅張財(cái)華史曉鳳
    激光生物學(xué)報(bào) 2014年6期
    關(guān)鍵詞:二甲基曼光譜嘧啶

    馬海寬,韓曉紅,張財(cái)華,張 旭,史曉鳳,馬 君

    (中國(guó)海洋大學(xué)光學(xué)光電子實(shí)驗(yàn)室, 山東 青島 266100)

    0 引言

    二十世紀(jì)三十年代,磺胺類抗生素被發(fā)現(xiàn)可有效治療感染性疾病后,被長(zhǎng)期用于臨床治療[1]。近年來(lái),磺胺類抗生素在水產(chǎn)品養(yǎng)殖業(yè)中的濫用對(duì)人體健康及生態(tài)環(huán)境產(chǎn)生嚴(yán)重的危害。目前國(guó)內(nèi)外對(duì)磺胺類抗生素殘留的檢測(cè)方法主要包括理化檢測(cè)法、生物測(cè)定法及免疫分析法[2]。這些方法雖然靈敏度比較高,但是儀器和材料價(jià)格昂貴,操作復(fù)雜,很難實(shí)現(xiàn)現(xiàn)場(chǎng)探測(cè)。目前,急需一種可檢測(cè)水產(chǎn)品中殘留痕量抗生素的簡(jiǎn)單、快速、便捷的方法。

    表面增強(qiáng)拉曼光譜(Surface-enhanced Raman Spectroscopy, SERS)技術(shù)具有簡(jiǎn)單、快速、方便、高靈敏度、高準(zhǔn)確度的痕量檢測(cè)等優(yōu)點(diǎn),當(dāng)檢測(cè)分子發(fā)生諧振時(shí),增強(qiáng)效果可達(dá)1014-1015倍[3, 4],在理論上可達(dá)到單分子檢測(cè)的水平,在多個(gè)領(lǐng)域已被廣泛應(yīng)用。近年來(lái),國(guó)內(nèi)外多個(gè)研究小組相繼將SERS技術(shù)應(yīng)用于對(duì)抗生素的檢測(cè)與分析,并取得了一定的成果。2006年,羅馬尼亞的Lliescu[5]等人利用銀溶膠作為增強(qiáng)基底對(duì)青霉素鉀進(jìn)行了拉曼光譜探測(cè)。2011年,中國(guó)科學(xué)技術(shù)大學(xué)的陳乾旺[6]等人制備了空心金納米材料,并以此為增強(qiáng)基底對(duì)四環(huán)素溶液進(jìn)行SERS光譜檢測(cè),能夠檢測(cè)到的最低濃度為0.1 ppb。2013年,上海海洋大學(xué)的賴克強(qiáng)[7]等人用購(gòu)買的Klarite材料作增強(qiáng)基底對(duì)魚(yú)肉中孔雀石綠和結(jié)晶紫進(jìn)行SERS光譜探測(cè),能夠檢測(cè)的最低濃度分別為10 ppb和15 ppb。2013年,中國(guó)海洋大學(xué)馬君[8]等利用自組裝法制備了銀溶膠膜,使用顯微拉曼系統(tǒng)對(duì)氯霉素、環(huán)丙沙星和恩諾沙星進(jìn)行了SERS光譜探測(cè),最低檢測(cè)濃度分別為40 ppb、5 ppb、40 ppb。

    本文通過(guò)制備高靈敏度的銀溶膠,探測(cè)分析了魚(yú)肉中磺胺甲基嘧啶和磺胺二甲基嘧啶的SERS光譜,確定了提取上述物質(zhì)的最佳提取方法,并計(jì)算了兩者在魚(yú)肉中的檢測(cè)限。

    1 實(shí)驗(yàn)部分

    1.1 試劑與材料

    氫氧化鈉、氨水、硝酸銀、檸檬酸三鈉、鹽酸、硝酸、無(wú)水硫酸鈉等均購(gòu)于國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司;水產(chǎn)品中限制使用的兩種磺胺類抗生素(磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲基嘧啶)由上海源葉生物科技有限公司提供;比目魚(yú)購(gòu)自超市;甲醇、乙醇、乙酸乙酯、正己烷來(lái)自天津科密歐化學(xué)試劑有限公司;去離子水為中國(guó)海洋大學(xué)化學(xué)學(xué)院自制。所有試劑和藥品均為分析純,使用時(shí)未進(jìn)一步提純。

    1.2 實(shí)驗(yàn)儀器

    磁力攪拌器(RCT basic,德國(guó)IKA公司);超聲清洗器(KQ2200DB,昆山超聲儀器公司);恒溫干燥箱(DHG-9037A,上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備廠);微波爐(MM823ESJ-PA,美的集團(tuán)有限公司);離心機(jī)(TG16-WS,湖南湘儀實(shí)驗(yàn)室儀器開(kāi)發(fā)有限公司);掃描電子顯微鏡(S-4800,日本日立公司)

    光譜儀為美國(guó)Ocean optics公司生產(chǎn)的新一代QE65Pro便攜式拉曼光譜儀,光柵刻痕密度為900 g/mm,光譜分辨率為10 cm-1。光源采用VA-I-N532固體連續(xù)激光器,激發(fā)波長(zhǎng)為532 nm,激光最大功率為400 mW。

    1.3 實(shí)驗(yàn)方法

    1.3.1 銀溶膠的制備

    將150 mL、0.02%的硝酸銀溶液放入微波爐中加熱[9]。溶液沸騰后,放入熱水浴中,900 r/min攪拌,同時(shí)緩慢加入4 mL、1%的檸檬酸鈉溶液,2 min后放回微波爐中繼續(xù)加熱9 min后取出冷卻至室溫。

    1.3.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配置及魚(yú)肉中抗生素的提取

    以氨水、乙酸乙酯作為溶劑,分別配置濃度為50 ppm、30 ppm、20 ppm、15 ppm、12 ppm、10 ppm、8 ppm、5 ppm、2 ppm、1 ppm的磺胺甲基嘧啶和磺胺二甲基嘧啶標(biāo)準(zhǔn)溶液待用。

    為排除魚(yú)肉中脂肪和蛋白質(zhì)等大分子對(duì)光譜的影響,魚(yú)肉中抗生素的提取方法非常重要。主要包括勻漿、離心、去脂、定容這四個(gè)步驟。首先,將1 g魚(yú)肉、1 mL抗生素標(biāo)準(zhǔn)溶液和提取劑混合,勻漿使魚(yú)肉與抗生素充分混合;再將勻漿后的混合物離心取出上清液,向殘?jiān)屑尤胍欢康奶崛?,重?fù)提取一次,合并上清液;進(jìn)一步將上清液水浴蒸發(fā)濃縮至近干,加入一定量的甲醇與正己烷,離心去除正己烷,以去除魚(yú)肉中油脂類物質(zhì);最后,用提取劑定容至10 mL,得待測(cè)物提取液。 4 ℃保存,用于SERS光譜測(cè)定。

    2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與結(jié)論

    光譜數(shù)據(jù)分析采用Origin8.1軟件進(jìn)行平滑和去基線處理,光譜探測(cè)時(shí),到達(dá)樣品的激光功率為50 mW,積分時(shí)間為10 s,每個(gè)樣品探測(cè)五次進(jìn)行平均。

    2.1 銀溶膠的表征

    經(jīng)微波加熱法制備的銀溶膠顏色為棕綠色,掃描電鏡圖(Scanning election microscope SEM)及紫外可見(jiàn)吸收光譜如圖1所示,可以看出銀納米顆粒是不規(guī)則的球狀,粒徑大小較為均勻,粒徑范圍在45-65 nm之間,吸收峰位于424 nm。

    圖1 銀溶膠的掃描電鏡圖及消光光譜Fig.1 Scanning election microscope image and extinction spectrum of silver colloid solution

    2.2 魚(yú)肉中抗生素的SERS探測(cè)

    2.2.1 磺胺甲基嘧啶與磺胺二甲基嘧啶固體拉曼光譜分析

    從分子結(jié)構(gòu)上看,磺胺甲基嘧啶與磺胺二甲基嘧啶只在嘧啶環(huán)上相差一個(gè)甲基,為了分析其拉曼效應(yīng)的異同,取少許磺胺甲基嘧啶和磺胺二甲基嘧啶固體進(jìn)行拉曼光譜的探測(cè),圖2為獲得的典型光譜圖。

    圖2 典型磺胺類抗生素固體拉曼光譜. (a) 磺胺甲基嘧啶; (b) 磺胺二甲基嘧啶Fig.2 Typical Raman Spectra of solid sulfonamide antibiotics. (a) sulfamerazine; (b) sulfamethazine

    通過(guò)對(duì)比兩者的拉曼光譜發(fā)現(xiàn),其主要特征峰大致相似,分別為:1 636 cm-1(1 644 cm-1)、1 598 cm-1(1 598 cm-1)處的對(duì)位二取代苯環(huán)伸縮振動(dòng),1 512 cm-1(1 512 cm-1)、1 417 cm-1(1 417 cm-1)處的嘧啶環(huán)伸縮振動(dòng),1 374 cm-1(1 386 cm-1)的嘧啶環(huán)呼吸振動(dòng),842 cm-1(838 cm-1)、747 cm-1(719 cm-1)、685 cm-1(686 cm-1)處的對(duì)位二取代苯環(huán)呼吸振動(dòng)。表1列出了磺胺甲基嘧啶和磺胺二甲基嘧啶主要拉曼峰及其歸屬[10]。從表1可知磺胺甲基嘧啶相比磺胺二甲基嘧啶分別在1 564 cm-1、1 194 cm-1處出現(xiàn)了明顯的拉曼峰,依次代表嘧啶環(huán)的伸縮振動(dòng)、嘧啶環(huán)的呼吸振動(dòng)。分析原因,主要由于兩種物質(zhì)分子結(jié)構(gòu)上的差異,磺胺甲基嘧啶結(jié)構(gòu)中嘧啶環(huán)為2,4-雙取代,而磺胺二甲基嘧啶中嘧啶環(huán)為2,4,6-三取代。嘧啶環(huán)中的2,4,6-三取代使得嘧啶環(huán)結(jié)構(gòu)對(duì)稱性更好,影響了嘧啶的拉曼活性,從而影響嘧啶環(huán)的伸縮和呼吸振動(dòng),導(dǎo)致部分拉曼峰的缺失。

    2.2.2 提取劑的確定

    由于磺胺類抗生素易溶于部分有機(jī)溶劑和銨鹽溶液,實(shí)驗(yàn)中分別以乙酸乙酯和pH=10的氨水作為抗生素標(biāo)準(zhǔn)溶液的溶劑和魚(yú)肉中抗生素的提取劑。實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn),兩種溶劑配置的磺胺類抗生素標(biāo)準(zhǔn)溶液的SERS光譜探測(cè)均具有較好的效果,且氨水作為溶劑時(shí)效果更佳。但在用氨水對(duì)魚(yú)肉中磺胺類抗生素進(jìn)行提取的過(guò)程中,發(fā)現(xiàn)溶液極易變渾濁,而用乙酸乙酯作為提取劑時(shí)得到的提取物溶液無(wú)色透明。圖3 為兩種提取劑的魚(yú)肉中磺胺甲基嘧啶的SERS光譜圖。

    圖中顯示,用乙酸乙酯作為提取劑時(shí),磺胺甲基嘧啶增強(qiáng)效果好,探測(cè)靈敏度高,能夠檢測(cè)到1 605 cm-1、1 551 cm-1、1 342cm-1、1 197 cm-1、1 102 cm-1、734 cm-1處的主要特征峰,相對(duì)于固體拉曼光譜,其峰位有十個(gè)左右波數(shù)的偏移。用氨水作為提取劑時(shí),受魚(yú)肉中大分子信號(hào)干擾大,對(duì)磺胺甲基嘧啶的探測(cè)效果差,信噪比低,僅能夠探測(cè)到磺胺甲基嘧啶在1 605 cm-1和734 cm-1處微弱的峰。究其原因,可能是因?yàn)榘彼芤号c魚(yú)肉中的大分子蛋白質(zhì)發(fā)生某些反應(yīng),導(dǎo)致溶液變渾濁,影響了磺胺甲基嘧啶的提取和增強(qiáng)吸附。因此,實(shí)驗(yàn)中均選取乙酸乙酯作為定容溶劑和提取劑。

    表1 兩種磺胺類抗生素主要拉曼峰歸屬[10]Tab.1 Raman bands of two kinds of sulfa antibiotics

    圖3 兩種提取劑的魚(yú)肉中磺胺甲基嘧啶的SERS光譜圖及銀溶膠溶液和純魚(yú)肉拉曼光譜. (a) 銀溶膠, (b) 純魚(yú)肉, (c,d)為分別采用氨水、乙酸乙酯提取魚(yú)肉中磺胺甲基嘧啶;(e) 磺胺甲基嘧啶固體Fig.3 SERS Spectra of sulfamerazine in different solution extracted from fish and Raman spectrum of gold colloid solution and fish. (a) silver colloid, (b) fish fresh, (c, d) sulfamerazine extracted from fish fresh in ammonia water and ethyl acetate respectively, (e) solid sulfamerazine

    2.2.3 魚(yú)肉中磺胺類抗生素的檢測(cè)

    以乙酸乙酯作為提取劑,按1.3.2中方法對(duì)魚(yú)肉中的不同濃度的磺胺類抗生素進(jìn)行提取,提取液與銀溶膠1∶1混合,進(jìn)行SERS光譜探測(cè)。圖4為磺胺甲基嘧啶固體拉曼光譜及魚(yú)肉中不同濃度的磺胺甲基嘧啶提取液的SERS光譜。如前所述,相對(duì)于磺胺甲基嘧啶固體的拉曼光譜,提取液中能夠檢測(cè)到1 605 cm-1、1 551 cm-1、1 342 cm-1、1 197 cm-1、1 102 cm-1、734 cm-1的主要特征峰。但相對(duì)于磺胺甲基嘧啶固體的拉曼峰大約有3~15個(gè)波數(shù)的頻移,可能是納米銀顆粒與吸附的磺胺甲基嘧啶發(fā)生電荷轉(zhuǎn)移,從而引起拉曼峰的漂移。當(dāng)濃度為1 ppm時(shí),在1 605 cm-1和1 102 cm-1處仍還存在微弱的磺胺甲基嘧啶的拉曼特征信號(hào),因此可檢測(cè)到在魚(yú)肉中的濃度為1 ppm的磺胺甲基嘧啶。

    圖4 魚(yú)肉中不同濃度磺胺甲基嘧啶提取液的SERS光譜及銀溶膠溶液和純魚(yú)肉拉曼光譜. (a) 銀溶膠, (b) 純魚(yú)肉提取液, (c, d, e)魚(yú)肉中不同濃度(1 ppm, 5 ppm 和50 ppm)磺胺甲基嘧啶提取液, (f) 磺胺甲基嘧啶固體Fig.4 SERS Spectra of sulfamerazine solution with different concentration extracted from fish and Raman spectrum of gold colloid solution and fish. (a) silver colloid, (b) solution extracted from fish, (c, d, e) sulfamerazine solution with different concentration (1 ppm, 5 ppm and 50 ppm) extracted from fish fresh, (f) solid sulfamerazine

    圖5為魚(yú)肉中磺胺甲基嘧啶1 102 cm-1處的特征峰峰強(qiáng)與濃度之間的關(guān)系曲線。可以看出,峰強(qiáng)隨濃度的升高而升高,在低濃度范圍內(nèi)呈線性關(guān)系。經(jīng)LOD公式計(jì)算[11],魚(yú)肉中磺胺甲基嘧啶的檢測(cè)限約為0.16 ppm。

    圖5 魚(yú)肉中磺胺甲基嘧啶的特征峰強(qiáng)度與濃度變化關(guān)系曲線Fig.5 Dependence of peak intensity of sulfamerazine in fish on Concentration

    圖6為磺胺二甲基嘧啶固體及魚(yú)肉中不同濃度的磺胺二甲基嘧啶提取液的SERS光譜。從圖中可知,對(duì)魚(yú)肉中的磺胺二甲基嘧啶進(jìn)行提取后,探測(cè)到的磺胺二甲基嘧啶的拉曼特征峰相對(duì)較少,且在1 601 cm-1、1 024 cm-1、859 cm-1處出現(xiàn)了魚(yú)肉中大分子蛋白質(zhì)的拉曼特征峰。在濃度不低于1 ppm時(shí)可以檢測(cè)到1 134 cm-1處的磺胺二甲基嘧啶的拉曼特征信號(hào),因此可檢測(cè)到在魚(yú)肉中的濃度為1 ppm的磺胺二甲基嘧啶。

    圖6 魚(yú)肉中不同濃度磺胺二甲基嘧啶提取液的SERS光譜及銀溶膠溶液和純魚(yú)肉拉曼光譜. (a) 銀溶膠, (b) 純魚(yú)肉提取液, (c, d, e)魚(yú)肉中不同濃度(1 ppm, 5 ppm, 50 ppm)磺胺二甲基嘧啶提取液, (f) 磺胺二甲基嘧啶固體Fig.6 SERS Spectra of sulfamethazine solution with different concentration extracted from fish and Raman spectrum of gold colloid solution and fish. (a) silver colloid, (b) solution extracted from fish, (c, d, e) sulfamethazine solution with different concentration (1 ppm, 5 ppm and 50 ppm) extracted from fish, (f) solid sulfamethazine

    圖7為魚(yú)肉中磺胺二甲基嘧啶在1 134 cm-1處的特征峰強(qiáng)度與濃度變化關(guān)系曲線,由圖中可以看出,在低濃度范圍內(nèi)兩者呈線性關(guān)系,計(jì)算得出魚(yú)肉中磺胺二甲基嘧啶的檢測(cè)限為0.59 ppm。

    圖7 魚(yú)肉中磺胺二甲基嘧啶的特征峰強(qiáng)度與濃度變化關(guān)系曲線Fig.7 Dependence of peak intensity of sulfamethazinein fish on Concentration

    由2.2.1討論可知,磺胺甲基嘧啶相對(duì)磺胺二甲基嘧啶固體在1 564 cm-1、1 194 cm-1處出現(xiàn)了明顯的拉曼峰。對(duì)比圖4與圖6發(fā)現(xiàn),魚(yú)肉中抗生素濃度為5 ppm時(shí),磺胺甲基嘧啶相對(duì)磺胺二甲基嘧啶在1 551 cm-1、1 197 cm-1處依然有明顯的拉曼特征峰,可以據(jù)此差異區(qū)分低濃度時(shí)魚(yú)肉中的磺胺甲基嘧啶與磺胺二甲基嘧啶的存在情況。

    3 結(jié)論

    本文通過(guò)分析磺胺甲基嘧啶與磺胺二甲基嘧啶固體的分子結(jié)構(gòu)和拉曼光譜,得出了兩者分子結(jié)構(gòu)差異對(duì)拉曼特征信號(hào)的影響。通過(guò)對(duì)魚(yú)肉中磺胺類抗生素提取方法的研究,確定了最佳提取劑和定容溶劑。結(jié)果表明,以銀溶膠為基底,乙酸乙酯作為提取劑和定容溶劑,探測(cè)到魚(yú)肉中磺胺甲基嘧啶和磺胺二甲基嘧啶的最低濃度均為1 ppm,檢測(cè)限分別為0.16 ppm和0.59 ppm,在低濃度范圍內(nèi)特征峰強(qiáng)度與濃度呈線性關(guān)系。研究表明,SERS技術(shù)可以實(shí)現(xiàn)魚(yú)肉磺胺類抗生素的檢測(cè),為實(shí)現(xiàn)水產(chǎn)品中抗生素的快速檢測(cè)提供了實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。

    [1] 周筱青, 劉皈陽(yáng), 朱士俊. 醫(yī)院抗生素應(yīng)用政策的制定、實(shí)施和成效[J]. 中國(guó)抗生素雜志, 2003, 28(4):204-211.

    ZHOU Xiaoqing, LIU Guiyang, ZHU Shijun. The promulgation of hospital antibiotic policies and their practice, accomplishment[J]. Chinese Journal of Antibitics, 2003, 28(4):204-211.

    [2] 劉小云, 舒為群. 水中抗生素污染現(xiàn)狀及檢測(cè)技術(shù)研究進(jìn)展[J]. 中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志, 2005, 15(8):1011-1014.

    LIU Xiaoyun, SHU Weiqun. The advances of pollution and detection technology about antibiotics in water[J]. Chinese Journal of Health Laboratory Technology, 2005, 15(8):1011-1014.

    [3] JEANMAIRED L, RICHARD P, VAN DUYNE. Surface raman spectroelectrochemistry:Part I. Heterocyclic, aromatic, and aliphatic amines adsorbed on the anodized silver electrode[J]. Electronal Chem, 1977, 84(1):1-20.

    [4] KNEIPP K, HAKA A S, KNEIPP H K,etal. Surface-enhanced raman spectroscopy in single living cells using gold nanoparticles[J]. Appl Spectrosc, 2002, 56 (2):150-154.

    [5] LLIESCU T, BAIAL M, PAVEL I. Raman and SERS investigations of potassium benzylpenicillin[J]. Raman Spectroscopy, 2006, 37(1-3):318-325.

    [6] LI R, ZHANG H, CHEN Q W,etal. Improved surface-enhanced raman scattering on micro-scale Au hollow spheres:Synthesis and application in detecting tetracycline[J]. Analyst, 2011, 136(12):2527-2532.

    [7] 李春穎, 賴克強(qiáng), 張?jiān)磮A, 等. 表面增強(qiáng)拉曼光譜檢測(cè)魚(yú)肉中禁用和限用藥物研究[J]. 化學(xué)學(xué)報(bào), 2013, 71:221-226.

    LI Chunying, LAI Keqiang, ZHANG Yuanyuan,etal. The study of banned and restricted drugs in fish based on surface-enhanced Raman spectroscopy technology[J]. Acta Chimica Sinica, 2013, 71:221-226.

    [8] 馬君, 孔德地, 韓曉紅, 等. 應(yīng)用銀溶膠膜探測(cè)水中抗生素的表面增強(qiáng)拉曼光譜研究[J]. 光譜學(xué)與光譜分析, 2013, 33(10):2688-2693.

    MA Jun, KONG Dedi, HAN Xiaohong,etal. Detection of antibiotics in water using silver colloids films as substrate of surface-enhanced Raman scattering[J]. Spectroscopy and Spectral Analysis, 2013, 33(10):2688-2693.

    [9] LEE P C, MEISEAL D. Adsorption and SERS of dyes on silver and gold sols[J]. The Journal of Physical Chemistry, 1982, 86(17):3391-3395.

    [10] DOLISH F R, FATELEY W G, BENTLEY F F, 等. 有機(jī)化合物的特征拉曼頻率[M]. 北京:中國(guó)化學(xué)會(huì), 1980:210-212.

    DOLISH F R, FATELEY W G, BENTLEY F F,etal. Raman frequencies of organic compounds[M]. Beijing:Chinese Chemical Society, 1980:210-212.

    [11] YU L L, FASSETT J D, GUTHRIE W F. Detection limit of isotope dilution mass spectrometry[J]. Analytical Chemistry, 2002, 74(15):3887-3891.

    猜你喜歡
    二甲基曼光譜嘧啶
    紫紅獐牙菜對(duì)四氧嘧啶性糖尿病小鼠的降糖作用
    二甲基硅油結(jié)構(gòu)及熱穩(wěn)定性
    磺胺嘧啶銀混懸液在二度燒傷創(chuàng)面治療中的應(yīng)用
    復(fù)合溶劑萃取N,N-二甲基乙酰胺
    N-甲基嘧啶酮類化合物的綠色合成研究
    固相微萃取-氣質(zhì)聯(lián)用法測(cè)定水中痕量土臭素和二甲基異崁醇
    兩種磺胺嘧啶鋅配合物的合成、晶體結(jié)構(gòu)和熒光性質(zhì)
    BMSCs分化為NCs的拉曼光譜研究
    便攜式薄層色譜-拉曼光譜聯(lián)用儀重大專項(xiàng)獲批
    苯的激光拉曼光譜研究
    物理與工程(2013年1期)2013-03-11 16:03:39
    成熟少妇高潮喷水视频| 黑人欧美特级aaaaaa片| 国产有黄有色有爽视频| 久久精品91无色码中文字幕| 欧美精品一区二区免费开放| 免费不卡黄色视频| √禁漫天堂资源中文www| 国产激情久久老熟女| 国产成人av激情在线播放| 啦啦啦视频在线资源免费观看| 丝袜美足系列| 老司机亚洲免费影院| 色婷婷久久久亚洲欧美| 岛国在线观看网站| 黄频高清免费视频| 丰满的人妻完整版| 精品亚洲成国产av| 婷婷成人精品国产| 手机成人av网站| 亚洲中文日韩欧美视频| 9色porny在线观看| 夜夜躁狠狠躁天天躁| 国产男女内射视频| 亚洲男人天堂网一区| 一区二区三区国产精品乱码| 免费在线观看黄色视频的| 国产亚洲精品久久久久5区| 成人影院久久| 日本一区二区免费在线视频| 老鸭窝网址在线观看| 十八禁网站免费在线| 精品久久久久久,| 国产精品亚洲一级av第二区| 亚洲一区二区三区不卡视频| 国产精品一区二区在线不卡| 91麻豆av在线| 欧美日韩一级在线毛片| 18禁美女被吸乳视频| 美女高潮到喷水免费观看| 久久久精品免费免费高清| 亚洲 国产 在线| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡| 亚洲欧美一区二区三区久久| 黑人欧美特级aaaaaa片| 国产单亲对白刺激| 日韩有码中文字幕| 91国产中文字幕| 亚洲欧美一区二区三区黑人| 91成年电影在线观看| 国产精品二区激情视频| 亚洲国产看品久久| 精品人妻1区二区| 老司机靠b影院| 麻豆成人av在线观看| 757午夜福利合集在线观看| 王馨瑶露胸无遮挡在线观看| 国产片内射在线| 久久青草综合色| 欧美大码av| 大片电影免费在线观看免费| 欧美人与性动交α欧美精品济南到| 国产精品久久久久久人妻精品电影| 十八禁网站免费在线| 色在线成人网| 天堂俺去俺来也www色官网| 久久久久国产精品人妻aⅴ院 | 黄色丝袜av网址大全| 国产成人一区二区三区免费视频网站| 国产成人影院久久av| 成在线人永久免费视频| 欧美黄色片欧美黄色片| 亚洲欧美色中文字幕在线| 男人舔女人的私密视频| 丰满饥渴人妻一区二区三| 久久国产精品影院| 香蕉久久夜色| 精品国产乱子伦一区二区三区| 色综合欧美亚洲国产小说| 国产成人av教育| 91国产中文字幕| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片 | 怎么达到女性高潮| 午夜久久久在线观看| 可以免费在线观看a视频的电影网站| 免费看十八禁软件| 高清黄色对白视频在线免费看| 精品人妻熟女毛片av久久网站| 宅男免费午夜| 日韩精品免费视频一区二区三区| 日本五十路高清| 新久久久久国产一级毛片| 亚洲美女黄片视频| 建设人人有责人人尽责人人享有的| 欧美乱色亚洲激情| 午夜日韩欧美国产| 黄色a级毛片大全视频| 日韩欧美在线二视频 | 欧美日韩精品网址| 中文字幕高清在线视频| 两个人看的免费小视频| 久久草成人影院| 99香蕉大伊视频| 久久精品成人免费网站| 国产成人精品无人区| 狠狠婷婷综合久久久久久88av| 19禁男女啪啪无遮挡网站| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区 | 国产成人av激情在线播放| www.精华液| videosex国产| 久久久精品免费免费高清| 国产淫语在线视频| 国产精品影院久久| 久久久精品区二区三区| av免费在线观看网站| 一本大道久久a久久精品| 国产1区2区3区精品| 两个人看的免费小视频| 国产亚洲欧美精品永久| 可以免费在线观看a视频的电影网站| 夜夜夜夜夜久久久久| 亚洲成国产人片在线观看| 婷婷丁香在线五月| 久久久国产一区二区| 一级片'在线观看视频| 国产成人啪精品午夜网站| 精品欧美一区二区三区在线| 欧美成人免费av一区二区三区 | 欧美性长视频在线观看| 午夜两性在线视频| 999精品在线视频| 村上凉子中文字幕在线| 成年动漫av网址| 日韩欧美三级三区| 日韩熟女老妇一区二区性免费视频| 久久精品国产亚洲av高清一级| 夜夜爽天天搞| 18在线观看网站| 国产欧美日韩综合在线一区二区| 色综合欧美亚洲国产小说| 亚洲在线自拍视频| 人妻丰满熟妇av一区二区三区 | 欧美成人午夜精品| 妹子高潮喷水视频| 午夜影院日韩av| 国产高清激情床上av| 99精品欧美一区二区三区四区| 啦啦啦 在线观看视频| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 丝袜美腿诱惑在线| 中文字幕人妻丝袜制服| 丝袜人妻中文字幕| 成人黄色视频免费在线看| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 国产单亲对白刺激| 黄片播放在线免费| 一级毛片精品| 国产亚洲精品一区二区www | 亚洲av成人av| 免费女性裸体啪啪无遮挡网站| 中国美女看黄片| 亚洲一区二区三区欧美精品| 91国产中文字幕| 狂野欧美激情性xxxx| 国产99久久九九免费精品| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲| 欧美成人午夜精品| 99国产极品粉嫩在线观看| 国产又色又爽无遮挡免费看| 黄片小视频在线播放| 免费在线观看完整版高清| 久久国产精品大桥未久av| 男女免费视频国产| 18在线观看网站| 免费在线观看黄色视频的| 亚洲第一欧美日韩一区二区三区| 高清av免费在线| 亚洲在线自拍视频| 久久精品亚洲熟妇少妇任你| 黑人巨大精品欧美一区二区mp4| 国产一区二区三区视频了| av中文乱码字幕在线| 在线观看一区二区三区激情| 一进一出好大好爽视频| 老汉色av国产亚洲站长工具| 性色av乱码一区二区三区2| 成在线人永久免费视频| 亚洲九九香蕉| av超薄肉色丝袜交足视频| 久久午夜亚洲精品久久| 十分钟在线观看高清视频www| 欧美精品av麻豆av| 好看av亚洲va欧美ⅴa在| 老熟妇乱子伦视频在线观看| 国产亚洲av高清不卡| 国产一区二区三区视频了| 精品亚洲成国产av| 亚洲,欧美精品.| 性色av乱码一区二区三区2| 久久精品亚洲av国产电影网| 91国产中文字幕| 老司机午夜福利在线观看视频| 午夜成年电影在线免费观看| 91老司机精品| 丝袜美足系列| 欧美日韩av久久| 欧美 日韩 精品 国产| 涩涩av久久男人的天堂| 亚洲精品一二三| 国产精品久久久久成人av| av不卡在线播放| 亚洲欧美激情在线| 91字幕亚洲| 亚洲片人在线观看| 日韩熟女老妇一区二区性免费视频| a级毛片在线看网站| 后天国语完整版免费观看| 成年女人毛片免费观看观看9 | 99久久99久久久精品蜜桃| 久久香蕉精品热| 亚洲国产看品久久| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 亚洲精品自拍成人| 波多野结衣一区麻豆| 国产麻豆69| svipshipincom国产片| 国精品久久久久久国模美| 色老头精品视频在线观看| 纯流量卡能插随身wifi吗| 国产真人三级小视频在线观看| 岛国毛片在线播放| 高清黄色对白视频在线免费看| 精品熟女少妇八av免费久了| 法律面前人人平等表现在哪些方面| 午夜免费鲁丝| 在线观看66精品国产| 大型黄色视频在线免费观看| 欧美午夜高清在线| 国产成人精品在线电影| 国产av又大| 午夜久久久在线观看| 精品高清国产在线一区| 欧美精品亚洲一区二区| 成人国产一区最新在线观看| 国产精品久久久人人做人人爽| 国产成人精品在线电影| 两性夫妻黄色片| 亚洲精品乱久久久久久| 在线观看免费高清a一片| 亚洲午夜精品一区,二区,三区| 亚洲全国av大片| 高清视频免费观看一区二区| 51午夜福利影视在线观看| 国产成人一区二区三区免费视频网站| 黑人猛操日本美女一级片| 99国产精品99久久久久| 欧美成人午夜精品| 欧美+亚洲+日韩+国产| 黄色女人牲交| 99国产综合亚洲精品| 久久九九热精品免费| 日韩欧美在线二视频 | 露出奶头的视频| 久久午夜亚洲精品久久| 无人区码免费观看不卡| 久久久久精品国产欧美久久久| 中文字幕精品免费在线观看视频| 女人被躁到高潮嗷嗷叫费观| 久久亚洲精品不卡| 99国产综合亚洲精品| 大香蕉久久成人网| 色综合欧美亚洲国产小说| 国产1区2区3区精品| 精品一区二区三区视频在线观看免费 | 久久精品91无色码中文字幕| 久久久久精品国产欧美久久久| 精品久久久精品久久久| 亚洲美女黄片视频| 免费人成视频x8x8入口观看| 婷婷丁香在线五月| 女性被躁到高潮视频| 一区二区日韩欧美中文字幕| 黄频高清免费视频| 国产成人一区二区三区免费视频网站| 99久久99久久久精品蜜桃| 乱人伦中国视频| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 麻豆国产av国片精品| 在线播放国产精品三级| 岛国在线观看网站| 精品国产一区二区三区四区第35| 中亚洲国语对白在线视频| 狂野欧美激情性xxxx| 韩国av一区二区三区四区| 欧美 日韩 精品 国产| 午夜福利一区二区在线看| 国产三级黄色录像| 免费女性裸体啪啪无遮挡网站| 亚洲成a人片在线一区二区| 99久久综合精品五月天人人| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 美女午夜性视频免费| 精品久久久久久久毛片微露脸| 亚洲人成电影观看| 欧美中文综合在线视频| 精品久久久精品久久久| 国产一区二区三区视频了| 亚洲第一av免费看| 国产精品.久久久| 国产成人影院久久av| 在线av久久热| 久久ye,这里只有精品| 成人永久免费在线观看视频| 成人特级黄色片久久久久久久| 午夜免费观看网址| 国产精品偷伦视频观看了| 欧美黄色淫秽网站| 国精品久久久久久国模美| 久热爱精品视频在线9| 国产一区有黄有色的免费视频| 黄色视频不卡| 亚洲精品自拍成人| 亚洲一区高清亚洲精品| 国产精品一区二区在线不卡| 亚洲人成伊人成综合网2020| 午夜久久久在线观看| 亚洲av成人一区二区三| 一边摸一边做爽爽视频免费| av天堂在线播放| 亚洲精品美女久久av网站| 1024视频免费在线观看| 中文字幕色久视频| 久久 成人 亚洲| 动漫黄色视频在线观看| 亚洲美女黄片视频| 日本黄色日本黄色录像| 丝袜人妻中文字幕| 色综合欧美亚洲国产小说| 欧美人与性动交α欧美软件| 亚洲全国av大片| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频| 国产成人精品久久二区二区91| 99久久精品国产亚洲精品| 久久人人爽av亚洲精品天堂| 曰老女人黄片| 国产亚洲精品第一综合不卡| 啦啦啦 在线观看视频| 高清毛片免费观看视频网站 | 精品久久久久久,| 女性生殖器流出的白浆| 国产成人影院久久av| 国产男女内射视频| 午夜福利影视在线免费观看| ponron亚洲| 天堂动漫精品| 国产成人影院久久av| 法律面前人人平等表现在哪些方面| 一本综合久久免费| 大型黄色视频在线免费观看| 90打野战视频偷拍视频| 国产亚洲欧美精品永久| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 18禁国产床啪视频网站| 18在线观看网站| 看免费av毛片| 免费看a级黄色片| 叶爱在线成人免费视频播放| 亚洲综合色网址| 9热在线视频观看99| 在线永久观看黄色视频| 久久九九热精品免费| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 亚洲伊人色综图| 国产亚洲精品久久久久5区| 欧美另类亚洲清纯唯美| 曰老女人黄片| 久久亚洲精品不卡| 这个男人来自地球电影免费观看| 亚洲情色 制服丝袜| 在线观看www视频免费| 啦啦啦 在线观看视频| 国产亚洲欧美98| av免费在线观看网站| 男女床上黄色一级片免费看| 两人在一起打扑克的视频| 亚洲国产精品合色在线| 免费在线观看完整版高清| 国产精品亚洲av一区麻豆| 国产免费男女视频| 十八禁网站免费在线| 女人被狂操c到高潮| 中文字幕制服av| 中亚洲国语对白在线视频| 我的亚洲天堂| 18禁观看日本| 99精国产麻豆久久婷婷| 国产男女内射视频| 久久久久久久国产电影| 国产精品自产拍在线观看55亚洲 | 国产精品99久久99久久久不卡| 国产欧美日韩一区二区三| 成人手机av| 女人爽到高潮嗷嗷叫在线视频| 他把我摸到了高潮在线观看| 国产成人一区二区三区免费视频网站| 无限看片的www在线观看| 啦啦啦免费观看视频1| 一级,二级,三级黄色视频| 国产日韩一区二区三区精品不卡| 女人被躁到高潮嗷嗷叫费观| 一个人免费在线观看的高清视频| 亚洲成国产人片在线观看| 欧美精品亚洲一区二区| 男女床上黄色一级片免费看| 午夜精品在线福利| 亚洲成人手机| 色在线成人网| a级毛片在线看网站| 夜夜躁狠狠躁天天躁| 国产精品影院久久| 人成视频在线观看免费观看| 99国产精品99久久久久| 国产精品久久久av美女十八| 久久精品国产亚洲av高清一级| 黄色a级毛片大全视频| 91字幕亚洲| 1024视频免费在线观看| 午夜91福利影院| 国产蜜桃级精品一区二区三区 | av免费在线观看网站| 天堂√8在线中文| 精品一区二区三区四区五区乱码| 成年版毛片免费区| 亚洲第一青青草原| 亚洲人成伊人成综合网2020| 又黄又爽又免费观看的视频| 一区福利在线观看| 欧美日韩成人在线一区二区| 国产亚洲精品一区二区www | www.熟女人妻精品国产| 极品少妇高潮喷水抽搐| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 美国免费a级毛片| 欧美黑人欧美精品刺激| 性少妇av在线| 飞空精品影院首页| 久久中文字幕人妻熟女| 亚洲精品国产一区二区精华液| 亚洲av成人不卡在线观看播放网| 久久中文字幕一级| 两个人看的免费小视频| 精品国产一区二区三区四区第35| 欧美人与性动交α欧美精品济南到| 午夜福利影视在线免费观看| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 亚洲av成人不卡在线观看播放网| 久久精品成人免费网站| 精品久久久精品久久久| 在线免费观看的www视频| 极品人妻少妇av视频| 国产精品一区二区精品视频观看| 国产免费现黄频在线看| 黑人猛操日本美女一级片| 韩国精品一区二区三区| cao死你这个sao货| 国产激情欧美一区二区| 国产又色又爽无遮挡免费看| 欧美人与性动交α欧美精品济南到| 热99国产精品久久久久久7| 美女高潮喷水抽搐中文字幕| 国产成人免费观看mmmm| 日韩中文字幕欧美一区二区| 黄色视频,在线免费观看| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 亚洲成人免费av在线播放| 午夜精品在线福利| 国产亚洲av高清不卡| 一级片免费观看大全| 国产成人精品久久二区二区免费| 天堂动漫精品| 法律面前人人平等表现在哪些方面| 亚洲 国产 在线| 国产精品久久视频播放| 国产成人精品久久二区二区免费| 黄片小视频在线播放| 中出人妻视频一区二区| 老熟妇仑乱视频hdxx| 69av精品久久久久久| 精品卡一卡二卡四卡免费| 成年人免费黄色播放视频| 欧美精品av麻豆av| 一级a爱片免费观看的视频| 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| 国产精品久久久久成人av| 成人亚洲精品一区在线观看| 久久青草综合色| 美女高潮喷水抽搐中文字幕| 多毛熟女@视频| 亚洲精品在线观看二区| 青草久久国产| 日韩免费高清中文字幕av| avwww免费| 99精品久久久久人妻精品| 一边摸一边抽搐一进一出视频| 亚洲人成77777在线视频| 亚洲精品久久午夜乱码| 他把我摸到了高潮在线观看| 成年女人毛片免费观看观看9 | av天堂在线播放| 如日韩欧美国产精品一区二区三区| 成年版毛片免费区| 香蕉丝袜av| 久久 成人 亚洲| 美女高潮喷水抽搐中文字幕| 国产激情久久老熟女| 精品亚洲成国产av| 99热国产这里只有精品6| 在线观看免费视频日本深夜| 亚洲七黄色美女视频| 黄色怎么调成土黄色| 国产欧美日韩一区二区三| 少妇的丰满在线观看| 自线自在国产av| 欧美色视频一区免费| 午夜两性在线视频| 亚洲黑人精品在线| 中文字幕精品免费在线观看视频| 少妇裸体淫交视频免费看高清 | 久久精品国产亚洲av香蕉五月 | 一进一出抽搐gif免费好疼 | 亚洲免费av在线视频| 欧美+亚洲+日韩+国产| 99久久国产精品久久久| 自线自在国产av| 热99re8久久精品国产| 国产精品久久久久久精品古装| 99国产精品一区二区蜜桃av | 亚洲成av片中文字幕在线观看| 久久国产精品人妻蜜桃| 丰满的人妻完整版| 高清在线国产一区| 国产精品久久久av美女十八| 极品人妻少妇av视频| 99国产极品粉嫩在线观看| 黄色片一级片一级黄色片| 国产亚洲精品久久久久久毛片 | 亚洲一区二区三区不卡视频| av有码第一页| xxxhd国产人妻xxx| 免费在线观看完整版高清| 法律面前人人平等表现在哪些方面| 天天影视国产精品| 少妇的丰满在线观看| 村上凉子中文字幕在线| 久久久精品国产亚洲av高清涩受| 免费在线观看影片大全网站| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片 | 在线播放国产精品三级| 精品视频人人做人人爽| 成年女人毛片免费观看观看9 | 国产精品av久久久久免费| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲| 少妇裸体淫交视频免费看高清 | 国产欧美日韩一区二区三| www.精华液| av欧美777| 国产精品 欧美亚洲| 精品一品国产午夜福利视频| 国产精品免费大片| 国产精品香港三级国产av潘金莲| 大码成人一级视频| 搡老岳熟女国产| 精品欧美一区二区三区在线| 亚洲第一av免费看| 欧美黄色淫秽网站| 精品久久久久久,| 十分钟在线观看高清视频www| 亚洲精品在线观看二区| 国产单亲对白刺激| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 亚洲国产中文字幕在线视频| 国产亚洲精品第一综合不卡| 久99久视频精品免费| 三上悠亚av全集在线观看| 久99久视频精品免费| 91字幕亚洲| 无人区码免费观看不卡| 欧美+亚洲+日韩+国产| 老司机午夜十八禁免费视频| 亚洲av成人不卡在线观看播放网| bbb黄色大片| av线在线观看网站| x7x7x7水蜜桃| 99久久人妻综合| 欧美丝袜亚洲另类 | 又黄又粗又硬又大视频| 亚洲国产欧美一区二区综合| 欧美性长视频在线观看| 亚洲精品中文字幕一二三四区| 不卡av一区二区三区| 男女之事视频高清在线观看| 757午夜福利合集在线观看| 大型av网站在线播放| 亚洲一区中文字幕在线| 亚洲av欧美aⅴ国产| 国产精品99久久99久久久不卡| 亚洲精华国产精华精| 成人特级黄色片久久久久久久| 欧美人与性动交α欧美精品济南到| 国产成人欧美| x7x7x7水蜜桃| 丁香欧美五月| 免费av中文字幕在线| 亚洲熟妇中文字幕五十中出 |