非小細(xì)胞肺癌組織中P-ACC與COX-2的表達(dá)及相關(guān)性研究

錢(qián) 洪, 沈雙雙, 呂 楊, 楊金鳳

(解放軍海軍安慶醫(yī)院, 1. 腫瘤內(nèi)科; 2. 病理科, 安徽 安慶, 246003)

肺癌是一種嚴(yán)重威脅人類健康的疾病，其發(fā)病率和死亡率的逐年升高，引起了世界越來(lái)越多研究者的關(guān)注。非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)是最常見(jiàn)的肺癌類型，約占肺癌總數(shù)的70%～80%。約70%的NSCLC患者在確診時(shí)已無(wú)法手術(shù)摘除，或完全切除術(shù)后輔助化療出現(xiàn)耐藥性，是NSCLC整體治療效果不佳的重要原因[1-2]。近年來(lái)研究[3]表明，體內(nèi)失控的炎癥反應(yīng)可能是導(dǎo)致NSCLC發(fā)生發(fā)展?jié)撛跈C(jī)制。環(huán)氧合酶-2(COX-2)是炎癥反應(yīng)重要參與因子，在NSCLC的發(fā)展過(guò)程中發(fā)揮諸多作用[4]，而國(guó)內(nèi)外COX-2與磷酸化乙酰輔酶A羧化酶(P-ACC)相關(guān)性的研究鮮見(jiàn)報(bào)道。本研究通過(guò)免疫組化法，比較P-ACC和COX-2蛋白在NSCLC患者肺組織及正常肺組織中的表達(dá)情況，并探討二者的相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2011年10月—2014年3月收治住院的病理檢查確診為NSCLC且具有完整臨床病理資料的52例患者肺組織標(biāo)本作為NSCLC組，16例因炎性假瘤或其他結(jié)核瘤行肺葉切除患者的肺組織標(biāo)本作為對(duì)照組，所有腫瘤患者術(shù)前均未行放化療治療。NSCLC組，男38例，女14例；年齡22～72歲，平均(58.56±10.21)歲；其中鱗癌26例，腺癌12例，腺鱗癌9例，大細(xì)胞癌5例; TNM分期: Ⅰ～Ⅱ期20例，Ⅲ～Ⅳ期32例。2組患者的性別、年齡、病程等一般資料無(wú)顯著差異(P>0.05), 具有可比性。本實(shí)驗(yàn)經(jīng)本院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，受試者均簽署知情同意書(shū)。

1.2 方法

所有標(biāo)本經(jīng)中性甲醛固定，石蠟包埋切片，厚度約4 μm。采用免疫組織化學(xué)二步法檢測(cè)蛋白著色程度。根據(jù)所應(yīng)用的P-ACC一抗(購(gòu)自美國(guó)Cell Signaling Technology公司)及COX-2一抗(購(gòu)自美國(guó)Santa Cruz公司)的說(shuō)明書(shū)要求預(yù)處理組織切片; 3%過(guò)氧化氫去離子水孵育5 min，PBS沖洗3 min 3次；滴加一抗, 37 ℃孵育1 h, PBS沖洗3 min 3次；滴加二抗, 37 ℃孵育15 min，PBS沖洗3 min 3次；應(yīng)用DAB溶液顯色，水洗、蘇木素復(fù)染2 min、鹽酸酒精分化、100%乙醇脫水、氨水返藍(lán)5 min; 二甲苯透明、中性樹(shù)膠封片、鏡檢。

1.3 結(jié)果判定

結(jié)果由2名不知情病理醫(yī)師進(jìn)行評(píng)判。在400倍視野下每例標(biāo)本隨機(jī)選取不重復(fù)5個(gè)視野。陽(yáng)性率即視野中陽(yáng)性細(xì)胞占全部細(xì)胞的百分比：陽(yáng)性率0～10%，即為表達(dá)陰性(-); 10%～25%，為表達(dá)弱陽(yáng)性(+); 25%～50%, 為表達(dá)中度陽(yáng)性(2+); 陽(yáng)性率>50%，為表達(dá)強(qiáng)陽(yáng)性(3+)。

2 結(jié) 果

2.1 2組肺組織中P-ACC和COX-2蛋白表達(dá)情況

對(duì)照組肺組織P-ACC蛋白染色主要為陽(yáng)性(13/16，81.25%), 而NSCLC組僅15例呈陽(yáng)性染色(15/52，28.85%), 2組比較有顯著差異(P<0.01); COX-2在對(duì)照組肺組織中陽(yáng)性表達(dá)較低(3/16, 18.75%), 而在NSCLC組織中陽(yáng)性率較高(33/52，63.46%), 2組比較有顯著差異 (P<0.01)。

表1 P-ACC與COX-2蛋白表達(dá)情況 n

2.2 P-ACC和COX-2蛋白表達(dá)與NSCLC臨床病理參數(shù)的關(guān)系

NSCLC組織中P-ACC蛋白的陽(yáng)性率與患者性別、年齡、腫瘤部位、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及臨床病理類型均無(wú)相關(guān)性，而與腫瘤大小和TNM分期密切相關(guān)(P<0.05)。

COX-2的陽(yáng)性率與患者性別、年齡、腫瘤部位、腫瘤大小及病理類型不相關(guān)，與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期則密切相關(guān)(P<0.05)。見(jiàn)表2。

2.3 P-ACC和COX-2蛋白表達(dá)的相關(guān)性

52例NSCLC組織中, P-ACC表達(dá)陰性的NSCLC組織COX-2陽(yáng)性表達(dá)率為86.67%, P-ACC表達(dá)陽(yáng)性的NSCLC組織COX-2陽(yáng)性表達(dá)率為59.09%, 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。P-ACC表達(dá)與COX-2表達(dá)呈顯著負(fù)相關(guān)(P<0.05)。見(jiàn)表3。

表2 P-ACC和COX-2蛋白表達(dá)與NSCLC臨床病理參數(shù)的關(guān)系

表3 NSCLC組織中P-ACC和COX-2蛋白表達(dá)的相關(guān)性

3 討 論

NSCLC早期診斷困難[5], 發(fā)現(xiàn)腫瘤時(shí)已有超過(guò)40%的患者出現(xiàn)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，且治療生存率低，5年生存率僅為15%左右[6]。腫瘤的組織學(xué)類型檢查和傳統(tǒng)臨床表現(xiàn)分期對(duì)于判斷預(yù)后和指導(dǎo)治療的效力有限。近年來(lái)，隨著基因、表觀遺傳學(xué)的發(fā)展，從分子生物學(xué)角度深入研究NSCLC等，有利于從本質(zhì)上認(rèn)識(shí)腫瘤的發(fā)病機(jī)制，實(shí)現(xiàn)早期診斷和個(gè)體化治療[7]。

P-ACC是乙酰輔酶A羧化酶(ACC)的磷酸化形式，炎癥反應(yīng)中AMP活化蛋白激酶(AMPK)被激活，磷酸化其下游直接靶蛋白ACC使其失活，因此P-ACC可作為AMPK被激活的直接指標(biāo)[8]。AMPK的活性與炎癥分子的表達(dá)水平存在密切關(guān)系，其激活后可顯著減輕機(jī)體炎癥介質(zhì)的表達(dá)，減少組織的炎癥損傷[9]。COX-2作為炎癥反應(yīng)重要節(jié)點(diǎn)，在腫瘤發(fā)生發(fā)展過(guò)程中，誘導(dǎo)腫瘤部位血管生成，抑制細(xì)胞凋亡與免疫功能，促進(jìn)腫瘤浸潤(rùn)與侵襲等[10-11]。有學(xué)者[12]研究證實(shí)了在發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的肺癌組織中, COX-2蛋白染色程度強(qiáng)于未發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的肺癌組織。有報(bào)告研究COX-2在Ⅰ期NSCLC患者的表達(dá)情況，結(jié)果顯示早期NSCLC中COX-2過(guò)表達(dá)則患者預(yù)后較差，提示過(guò)表達(dá)的COX-2可作為判斷NSCLC患者預(yù)后獨(dú)立不良因素[13]。本研究表明COX-2蛋白在正常肺組織中低表達(dá)，而在NSCLC組織中高表達(dá)，并且在晚期NSCLC中表達(dá)強(qiáng)烈，與上述研究結(jié)果一致，進(jìn)一步表明COX-2在NSCLC的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中發(fā)揮重要作用。

本研究重點(diǎn)研究了P-ACC與COX-2的關(guān)系，結(jié)果顯示P-ACC及COX-2幾乎與臨床病理參數(shù)無(wú)關(guān)，可能與病例選擇有關(guān)，因?yàn)椴±x擇上沒(méi)有特意選擇發(fā)病率最高的腺癌[14]。但本研究證實(shí)P-ACC陰性組的COX-2蛋白表達(dá)陽(yáng)性率與P-ACC陽(yáng)性組差異顯著, P-ACC表達(dá)與COX-2表達(dá)呈顯著負(fù)相關(guān)。說(shuō)明在NSCLC組織中, P-ACC蛋白表達(dá)下調(diào)可能激活COX-2的陽(yáng)性表達(dá)，促進(jìn)NSCLC的發(fā)生、發(fā)展及侵襲轉(zhuǎn)移。

綜上所述，聯(lián)合檢測(cè)NSCLC組織的P-ACC與COX-2蛋白表達(dá)水平，對(duì)臨床評(píng)估NSCLC病理分期、惡性程度及預(yù)后有顯著意義，為NSCLC的臨床治療提供了新的思路。

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