胃腺癌突變型P53蛋白和PCNA的表達(dá)及對比研究

廖謙和,徐 丹,紀(jì)竹青,范麗麗

(沭陽人民醫(yī)院 病理科，江蘇 沭陽223600)

胃癌的發(fā)生是多因素、多途徑和多階段的，與抑癌基因的失活、癌基因的激活以及細(xì)胞增殖與凋亡失衡等有關(guān)，而細(xì)胞增殖活性及某些癌基因突變與胃癌的關(guān)系尤為密切。本研究應(yīng)用免疫組化法檢測胃腺癌組織中突變型P53蛋白和增殖細(xì)胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)的表達(dá)情況，以探討其在胃癌發(fā)生發(fā)展中的作用。

1 材料與方法

1.1材料收集我院2008年1月至2012年12月經(jīng)外科手術(shù)切除的胃腺癌標(biāo)本42例，所有患者術(shù)前均未接受過化療或放療，術(shù)后手術(shù)標(biāo)本經(jīng)病理確診?；颊咧心?1例，女11例，年齡39-81歲，平均65.6歲。TNM分期：胃癌Ⅰ期6例，Ⅱ期14例，Ⅲ期18例，Ⅳ期4例。胃腺癌病理組織學(xué)分級：高分化腺癌6例，中分化腺癌22例，低分化腺癌14例。伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移29例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移13例。

1.2方法每例胃癌標(biāo)本取組織2-3塊，包括胃癌病變組織的胃壁黏膜、肌層及漿膜。標(biāo)本經(jīng)10%中性福爾馬林固定，常規(guī)石蠟切片，HE染色。免疫組織化學(xué)采用EnVision法，標(biāo)記以正常胃黏膜組織10例作對照。所用試劑購自基因科技(上海)有限公司，抗體為突變型P53蛋白(DO-7)、PCNA(PC10)，一抗稀釋濃度為1∶50。

1.3結(jié)果判定陽性細(xì)胞標(biāo)記為棕黃色顆粒，突變型P53蛋白、PCNA陽性細(xì)胞定位在細(xì)胞核。每張切片隨機(jī)選擇10個高倍視野，根據(jù)切片中陽性細(xì)胞所占同類細(xì)胞總數(shù)百分比和陽性標(biāo)記細(xì)胞著色強(qiáng)度的差異，分別記為-、+、++、+++四個等級，即不著色為陰性(-)，0-25%為(+)，25%-50%為(++)，>50%為(+++)。

1.4統(tǒng)計學(xué)處理用SPSS13.0統(tǒng)計軟件處理，采用χ2檢驗，相關(guān)性分析采用Spearman等級相關(guān)檢驗，P<0.05為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 突變型P53蛋白陽性表達(dá) 突變型P53蛋白在胃腺癌組織中的陽性細(xì)胞表達(dá)在胃腺癌的細(xì)胞核，呈棕黃色顆粒狀(圖1)，P53陽性細(xì)胞表達(dá)率為81.0%，P53表達(dá)與胃腺癌分化程度，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有顯著性意義(P<0.05)，而與患者年齡、性別、胃腺癌浸潤深度之間無顯著性意義(P>0.05)，見表1。

2.2 PCNA陽性表達(dá) PCNA在胃腺癌組織中的陽性細(xì)胞表達(dá)在胃腺癌的細(xì)胞核，呈棕黃色顆粒狀(圖2)，PCNA陽性細(xì)胞表達(dá)率為85.7%。PCNA表達(dá)與胃腺癌分化程度，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有顯著性意義(P<0.05)，而與患者年齡、性別、胃腺癌浸潤深度之間無顯著性意義(P>0.05)，見表1。

2.3 突變型P53蛋白、PCNA與胃腺癌分化程度的關(guān)系 42例胃腺癌陽性率隨病理分級增加陽性率有上升趨勢， 突變型P53蛋白在高、中、低分化組的胃腺癌中陽性率分別為50.0%(3/6)、81.8%(18/22)和92.9%(13/14)，低分化組顯著高于高分化組(P<0．05)。PCNA在高、中、低分化組的胃腺癌中陽性率分別為50.0%(3/6)、86.4%(19/22)和100.0%(14/14),低分化組顯著高于高分化組(P<0．05)。中、低分化腺癌中P53和PCNA陽性表達(dá)強(qiáng)度多在“++”以上。正常胃黏膜組織中突變型P53蛋白不表達(dá)，正常胃黏膜中PCNA不表達(dá)或僅見于基底層的單個細(xì)胞表達(dá)。突變型P53蛋白、PCNA在胃腺癌組與正常胃黏膜兩組間的差異具有顯著性(P<0.05)。

圖1突變型P53蛋白在胃腺癌細(xì)胞核中的陽性表達(dá)(LSAB×400)圖2PCNA在胃腺癌細(xì)胞核中的陽性表達(dá)(LSAB×400)

表1 突變型P53蛋白、PCNA在胃腺癌組織中的陽性表達(dá)(n=42)

2.4突變型P53蛋白、PCNA與胃腺癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組29例中，突變型P53蛋白檢測陽性率為93.1%,陽性強(qiáng)度多在++以上，PCNA檢測陽性率為96,6%，陽性強(qiáng)度亦在++～+++以上。突變型P53蛋白、PCNA在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組與無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移兩組間的差異具有顯著性(P<0.05)。

2.5突變型P53蛋白和PCNA在胃腺癌組織中表達(dá)的相關(guān)性突變型P53蛋白和PCNA在胃腺癌組織中均有較高的表達(dá)，42例胃腺癌中突變型P53蛋白表達(dá)陽性占33例(78.6%)，PCNA表達(dá)陽性占37例(88.1%)，兩指標(biāo)的陽性表達(dá)多在“++”以上，經(jīng)等級相關(guān)性分析突變型P53蛋白和PCNA呈顯著正相關(guān)(P<0.01)。

3 討論

人類P53基因定位于17p13.1，是一個非常重要的抑癌基因，全長16-20 kb，基因組有11個外顯子，10個內(nèi)含子。P53分野生型和突變型，野生型P53因半衰期短，含量低，用免疫組化方法檢測不到，而突變型P53蛋白降解緩慢，積聚在核內(nèi)易于被檢測。野生型P53具有抑制癌細(xì)胞的增殖和促進(jìn)癌細(xì)胞凋亡的作用，而突變型P53蛋白通常不再能控制細(xì)胞增殖，這就導(dǎo)致無效的DNA修復(fù)和遺傳不穩(wěn)定。大多數(shù)突變型P53通過阻止野生型P53結(jié)合到靶基因啟動子而施加明顯的負(fù)面效應(yīng)，因此突變型P53參與腫瘤的惡性轉(zhuǎn)化[1]。本組研究結(jié)果顯示，胃腺癌組織中突變型p53蛋白的表達(dá)與胃癌的分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，各組間差異顯著(P<0.05),與文獻(xiàn)研究結(jié)果相符[2]。突變型P53蛋白過度表達(dá)與侵襲性增加和預(yù)后不良相關(guān)，與腫瘤細(xì)胞的高度增生及分化程度有關(guān)，分化越低的腫瘤，突變型P53蛋白的表達(dá)水平越高，具有重要的預(yù)后價值[3]。本組研究結(jié)果提示突變型p53蛋白在胃癌發(fā)生發(fā)展中有重要作用，突變型P53蛋白在胃腺癌組織中的過度表達(dá)反映了其對癌細(xì)胞的抑制作用喪失或減弱，并失去對癌細(xì)胞增殖的負(fù)調(diào)節(jié)作用，使癌細(xì)胞不斷增殖而促進(jìn)癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移。

PCNA又稱周期抗原，是一種與細(xì)胞周期相關(guān)的酸性核蛋白，分子量為36 000，其表達(dá)在細(xì)胞增殖周期Gl后期開始升高，Gi/S期時達(dá)高峰，S期持續(xù)高水平，能與DNA多聚酶輔助蛋白結(jié)合，參與細(xì)胞DNA的復(fù)制，是反映細(xì)胞增殖活性的一個良好指標(biāo)[4]。其在細(xì)胞增殖中發(fā)揮重要作用，因此PCNA的表達(dá)可反映局部細(xì)胞的增生狀態(tài)[5]。PCNA在癌細(xì)胞中高表達(dá)反映腫瘤細(xì)胞過度增殖，可促進(jìn)腫瘤的發(fā)生。有研究報道PCNA可在多種腫瘤組織中高表達(dá)[6]。本組研究結(jié)果顯示，胃腺癌組織中PCNA的表達(dá)與胃癌的分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，各組間差異顯著(P<0.05),說明癌組織中細(xì)胞增殖活性明顯增高，細(xì)胞增殖旺盛，分化差易轉(zhuǎn)移，預(yù)后較差。與文獻(xiàn)研究結(jié)果相符[7,8]。

本組資料中突變型P53蛋白、PCNA在胃腺癌組織中均有較高表達(dá)，提示這兩個指標(biāo)與胃癌發(fā)生發(fā)展存在密切相關(guān)性，其陽性表達(dá)在評估胃癌惡性程度、估計患者預(yù)后和指導(dǎo)臨床治療等方面有著重要的參考價值。

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