電針五臟俞配合益髓通經(jīng)方對EAN家兔神經(jīng)電生理功能的影響

李樂文，王洪峰，于 磊，陳新華

(1.雙遼市中醫(yī)院，吉林 雙遼136400；2.長春中醫(yī)藥大學(xué)，吉林 長春130117)

實(shí)驗(yàn)性自身免疫性神經(jīng)炎(EAN)是急性格林-巴利綜合征(GBS)的經(jīng)典動(dòng)物模型，兩者在發(fā)病機(jī)制、臨床表現(xiàn)、神經(jīng)電生理等方面極為相似。GBS屬于中醫(yī)學(xué)“痿證”范疇，中藥和針灸療法對GBS的具有良好的臨床療效[1-3]。本實(shí)驗(yàn)通過觀察電針五臟俞配合益髓通經(jīng)方對EAN家兔神經(jīng)電生理功能的影響。

1 材料和方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

健康大耳白兔64只，雌雄不限，體重在2.0-2.5 kg之間，皮毛光滑潤澤，呼吸道通暢，足部皮膚紅潤，由長春生物制品研究所提供[許可證號SCXK-(吉)2003-0002]。自由給水和家兔飼料，實(shí)驗(yàn)室溫度保持在17-24℃之間。

1.2 主要實(shí)驗(yàn)試劑和儀器

益髓通經(jīng)方(主要藥物為馬錢子和龜板膠，由長春中醫(yī)藥大學(xué)制劑實(shí)驗(yàn)室提供)；完全弗氏佐劑(北京鼎國生物技術(shù)有限責(zé)任公司)；兔免疫球蛋白標(biāo)準(zhǔn)品(北京鼎國生物技術(shù)有限責(zé)任公司)；牛坐骨神經(jīng)髓鞘堿性蛋白(MBP，由吉林大學(xué)酶工程實(shí)驗(yàn)室提取)；五通道肌電圖誘發(fā)電位儀(英國Medelec Synergy)。

1.3 EAN動(dòng)物模型建立方法

參照郭向東[4]方法建立國際公認(rèn)的髓鞘堿性蛋白II(P2)免疫動(dòng)物模型。取3 ml提取的牛坐骨神經(jīng)髓鞘堿性蛋白(MBP)加上3 ml完全弗氏佐劑，經(jīng)試管振蕩器搖勻，將兩者充分混合后多點(diǎn)注入兔背部皮下。第21 d加強(qiáng)免疫，以出現(xiàn)下述癥狀表現(xiàn)為造模成功：精神萎靡，活動(dòng)減少，食欲減退，體重下降，尾部及足爪皮毛不潔，四肢無力，軟癱，以后肢為重，反射和應(yīng)激機(jī)能減低。加強(qiáng)免疫后第2天開始實(shí)驗(yàn)治療。

1.4 動(dòng)物分組與給藥

64只家兔隨機(jī)分為空白組、模型組、免疫球蛋白組和針?biāo)幗Y(jié)合組，每組16只。除空白組外，其余三組均按造模方法制備EAN動(dòng)物模型?？瞻捉M和模型組，不予任何治療，僅作同期對照觀察。免疫球蛋白組予以腹腔注射丙種球蛋白(IVIG)治療，每只家兔治療劑量為400 mg/kg/d，連續(xù)治療5 d。針?biāo)幗Y(jié)合組采用電針膀胱經(jīng)五臟俞治療，其中心俞、肝俞、脾俞、肺俞四穴向內(nèi)下方斜刺0.5-1 cm，腎俞向下斜刺0.5-1 cm，然后接電針疏密波，電壓2v，頻率2-30 Hz，15 min/次，1次/d，連續(xù)治療14 d；同時(shí)配合益髓通經(jīng)方灌胃治療，10 ml/次，2次/d。各組分別于第7 d、14 d各半數(shù)動(dòng)物評價(jià)1次。

1.5 評價(jià)指標(biāo)及檢測方法

1.5.1 運(yùn)動(dòng)神經(jīng)傳導(dǎo)速度測定 每只家兔取雙側(cè)坐骨神經(jīng)進(jìn)行測定，沿家兔坐骨神經(jīng)走行路線備皮，在其臀橫紋處放置刺激電極，遠(yuǎn)端肌腹與肌腱處放置記錄電極，給予電刺激，記錄時(shí)間。再向下移動(dòng)刺激電極的位置，給予電刺激，記錄時(shí)間。用皮軟尺測量出兩次刺激電極的距離及潛伏期時(shí)間差，計(jì)算出家兔坐骨神經(jīng)運(yùn)動(dòng)傳導(dǎo)速度。刺激電脈沖頻率為20 Hz，強(qiáng)度為10-20 V，波寬0.2 ms，掃描速度定為2 ms/cm。

1.5.2 坐骨神經(jīng)F波檢測 將刺激電極置于坐骨神經(jīng)近端某一端點(diǎn)，陰極置于遠(yuǎn)端，以表面電極在相應(yīng)支配肌肉處記錄。用刺激電極對坐骨神經(jīng)施以超強(qiáng)刺激，引起一個(gè)大的順行傳導(dǎo)的復(fù)合肌肉動(dòng)作電位為M波，在肌肉動(dòng)作電位(M波)后又出現(xiàn)一個(gè)小的肌肉反應(yīng)電位稱為F波，不隨刺激強(qiáng)度的增加而減小。本實(shí)驗(yàn)通過檢測F波的出現(xiàn)頻率作為確認(rèn)F波異常的指標(biāo)，實(shí)驗(yàn)中對各組家兔雙側(cè)坐骨神經(jīng)分別施以20次超強(qiáng)刺激，檢測其F波出現(xiàn)頻率，以F波出現(xiàn)頻率低于刺激數(shù)的80%作為F波異常的判定標(biāo)準(zhǔn)[5]。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

運(yùn)動(dòng)神經(jīng)傳導(dǎo)速度及F波異常率檢測數(shù)據(jù)采用雙樣本t檢驗(yàn)，檢驗(yàn)水準(zhǔn)為α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 一般情況

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物在免疫后第14天左右開始出現(xiàn)不同程度的EAN臨床癥狀，發(fā)病率達(dá)78%。其表現(xiàn)為精神萎靡，活動(dòng)減少，食欲減退，體重下降，尾部及足爪部皮毛不潔，四肢無力，反射和應(yīng)激機(jī)能減低，先出現(xiàn)雙后肢癱，繼而發(fā)展到四肢癱，約在免疫后第21天達(dá)到高峰。各組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物在實(shí)驗(yàn)治療后，至第1次評價(jià)(第7天)時(shí)，模型組死亡2只；至第2次評價(jià)(第14天)時(shí)模型組死亡4只。

2.2 坐骨神經(jīng)運(yùn)動(dòng)傳導(dǎo)速度的測定結(jié)果

實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，在第7天時(shí)，模型組、免疫球蛋白組、針?biāo)幗Y(jié)合組與空白組比較，坐骨神經(jīng)運(yùn)動(dòng)傳導(dǎo)速度明顯降低，具有極顯著性差異(P<0.01)；但免疫球蛋白組、針?biāo)幗Y(jié)合組與模型組比較，坐骨神經(jīng)運(yùn)動(dòng)傳導(dǎo)速度顯著加快，具有極顯著性差異(P<0.01)。在第14天時(shí)，免疫球蛋白組、針?biāo)幗Y(jié)合組與模型組比較，具有極顯著性差異(P<0.01)；與第7天時(shí)比較，兩組家兔坐骨神經(jīng)運(yùn)動(dòng)傳導(dǎo)速度均明顯加快，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，但兩組間比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，詳見表1。

表1 各組家兔坐骨神經(jīng)運(yùn)動(dòng)傳導(dǎo)速度測定結(jié)果(m/s)

注：◇表示與空白組比較P<0.01；△表示與模型組比較P<0.01；□表示與第7 d比較P<0.05；▽表示與免疫球蛋白組比較P>0.05。

2.3 坐骨神經(jīng)F波異常出現(xiàn)率的測定結(jié)果

實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，在第7天時(shí)，免疫球蛋白組、針?biāo)幗Y(jié)合組與模型組比較，坐骨神經(jīng)F波異常出現(xiàn)率明顯降低，具有極顯著性差異(P<0.01)。在第14天時(shí)，免疫球蛋白組、針?biāo)幗Y(jié)合組與模型組比較，同樣具有極顯著性差異(P<0.01)；與第7天時(shí)比較，兩組家兔坐骨神經(jīng)F波異常出現(xiàn)率明顯改善，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，但兩組間比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。詳見表2。

表2 各組家兔坐骨神經(jīng)F波異常出現(xiàn)率測定結(jié)果(m/s)

注：△表示與模型組比較P<0.01；□表示與第7 d比較P<0.05；▽表示與免疫球蛋白組比較P>0.05

3 討論

GBS作為一種免疫介導(dǎo)的炎性脫髓鞘性多發(fā)性神經(jīng)根疾病，神經(jīng)電生理檢查在GBS診斷中有重要價(jià)值，GBS的神經(jīng)肌電圖主要表現(xiàn)為神經(jīng)傳導(dǎo)阻滯，神經(jīng)傳導(dǎo)速度明顯減慢，不同程度的失神經(jīng)改變等異常。江文等[6]對100例GBS病人神經(jīng)電生理資料進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)原發(fā)性脫髓鞘型51例，原發(fā)性軸索型25例，神經(jīng)失電位型8例，不明確型12例，正常型4例，表明GBS主要發(fā)病形式是原發(fā)性脫髓鞘型。李淮玉等[7]對GBS神經(jīng)電生理改變特點(diǎn)進(jìn)行了分析，約96%患者的神經(jīng)電生理改變符合脫髓鞘損害，4%患者神經(jīng)電生理改變?yōu)檩S索損害型。

中醫(yī)學(xué)認(rèn)為GBS的發(fā)病，因髓虛導(dǎo)致邪毒易襲，邪毒侵襲后又能導(dǎo)致氣滯血瘀，致使五臟陰陽失衡、腎精虧虛，加重髓虛，成為一個(gè)惡性循環(huán)。因此，五臟失衡、髓虛不足的表現(xiàn)存在于該病的全過程。在治療上，不僅要注意疏通經(jīng)絡(luò)、導(dǎo)邪外出，更要注意調(diào)和五臟，益髓養(yǎng)精。五臟俞是五臟之氣輸注于背部的腧穴，具有反應(yīng)五臟功能狀態(tài)、調(diào)節(jié)五臟氣血精微、治療五臟相關(guān)疾病的作用，電針膀胱經(jīng)五臟俞可通調(diào)五臟氣機(jī)，恢復(fù)五臟正常功能。益髓通經(jīng)方由龜板和馬錢子組成，兩者配伍，補(bǔ)中有通，相得益彰。其中，龜板為血肉有情之品，善滋腎損，腎為先天之本，腎中精氣是機(jī)體生命活動(dòng)的根本，對機(jī)體各方面的生理活動(dòng)起著重要的作用，既能發(fā)揮對臟腑組織的滋養(yǎng)、濡潤作用，又能對組織器官起到推動(dòng)、溫煦作用，腎精得以充養(yǎng)，則氣血流暢，經(jīng)絡(luò)暢通；馬錢子疏通經(jīng)絡(luò)，促進(jìn)氣血運(yùn)行，既可促進(jìn)毒邪的排出，又可使五臟功能和調(diào)，則腎精充盈，脊髓得養(yǎng)，兩藥共同針對痿病的發(fā)病機(jī)制而發(fā)揮治療作用。本研究表明，電針膀胱經(jīng)五臟俞配合益髓通經(jīng)方可以明顯提高EAN家兔坐骨神經(jīng)運(yùn)動(dòng)傳導(dǎo)速度，降低F波異常出現(xiàn)率，充分證明該治療方法能有效恢復(fù)EAN家兔的神經(jīng)傳導(dǎo)功能，對GBS等痿證具有良好的治療作用，在臨床中可采用該療法以提高GBS等痿證的治療水平。

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