山楂葉總黃酮對糖尿病大鼠血糖、血脂代謝的影響*

朱柳瑩，吳忠祥，李苗苗 ，涂 星 ，魯 強(qiáng) ，萬夢思，舒朝輝， 張 倦，張敏麗，閔 清**

(1．湖北科技學(xué)院臨床醫(yī)學(xué)院，湖北 咸寧 437100；2．湖北科技學(xué)院藥學(xué)院)

隨著生活水平的提高，糖尿病及其并發(fā)癥已成為嚴(yán)重危害人們健康的一種常見病和多發(fā)病。糖、脂代謝紊亂是糖尿病并發(fā)癥的一個(gè)重要因素[1，2]，積極改善糖尿病糖代謝及脂代謝異常對降低患者的死亡率和提高生活質(zhì)量有十分重要意義。因此，尋找降低血糖、血脂的藥物一直備受廣大醫(yī)藥工作者的重視。山楂葉總黃酮(hawthorn leaves flavonoids，HLF)系薔薇科植物山楂葉的主要活性成分之一，現(xiàn)研究表明山楂葉總黃酮對心血管系統(tǒng)有明顯的藥理作用。如擴(kuò)張冠狀動(dòng)脈，降血脂、降血壓、抗氧化以及降血糖等[3]，但對糖尿病大鼠糖脂代謝是否有影響報(bào)道不多。本研究采用高糖高脂飼料喂養(yǎng)并腹腔注射STZ(40mg/kg)[4]建立糖尿病大鼠模型，探討不同劑量山楂葉總黃酮對糖尿病大鼠血糖血脂代謝的影響，為臨床合理使用HLF及其開發(fā)利用提供了一定的參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)藥品 山楂葉總黃酮，購于山西省晉城中晉藥業(yè)有限公司，純度95.4%。

1.2 動(dòng)物 健康雄性SD大鼠，體重(290±10)g，共50只，購于湖北省醫(yī)科院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究中心(合格證號(hào)：SCXK(鄂)2008-0005)。

1.3 試劑 甘油三酯(TG)、膽固醇(TC)、高密度脂蛋白(HDL-C)、低密度脂蛋白(LDL-C)等測定試劑盒均購于南京建成試劑盒公司，鏈脲佐菌素(STZ)為美國Sigma產(chǎn)品。

1.4 儀器 三諾血糖儀及配套試紙(長沙三諾生物傳感技術(shù)有限公司，2303N1)；TGL-16C高速臺(tái)式離心機(jī)(上海安亭科學(xué)儀器廠)；TBA-40F2自動(dòng)生化分析儀(東芝醫(yī)療系統(tǒng)中國有限公司)。

1.5 方法

1.5.1 大鼠糖尿病模型建立 將實(shí)驗(yàn)大鼠于本實(shí)驗(yàn)室適應(yīng)性喂養(yǎng)一周后開始實(shí)驗(yàn)。先隨機(jī)選取10只作為正常對照組， 40只用于建立糖尿病大鼠模型組。正常組以普通飼料喂養(yǎng)，造模大鼠以高糖高脂飼料[5,6]喂養(yǎng)，飲用水均為專用去離子水。4周后，將用于造模的40只大鼠禁食12h后，腹腔注射STZ(40mg/kg)檸檬酸緩沖液，正常對照組10只大鼠腹腔注射等濃度檸檬酸緩沖液。1周后，取大鼠尾靜脈血進(jìn)行血糖測定，血糖>16.7mmol/L為造模成功[7]。

1.5.2 隨機(jī)分組給藥 將造模成功的大鼠隨機(jī)分成模型組和HLF組(低、中、高劑量)，其中低、中、高劑量給藥組，各組分別給予50mg/kg、100mg/kg、200mg/kg山楂葉總黃酮5ml/d灌胃，模型組以及正常組以5ml/d生理鹽水灌胃，定期檢測大鼠體重和血糖水平，連續(xù)6周。

1.5.3 生化指標(biāo)檢測 取材前，大鼠禁食不禁水12h，戊巴比妥麻醉下，從腹主動(dòng)脈取血，進(jìn)行血液分離，將分離的血清置于-80℃冰柜中保存，按試劑說明書測定血糖和血脂等相關(guān)生化指標(biāo)[8]。

2 結(jié) 果

2.1 各組大鼠的一般狀態(tài) 正常組大鼠飲水飲食及大小便均無明顯異常。模型組和低、中、高劑量給藥組大鼠均出現(xiàn)飲水飲食明顯增多、尿量增多、體重下降，毛松、毛色暗黃、懶動(dòng)等癥狀。給藥組經(jīng)山楂葉總黃酮治療后狀況好轉(zhuǎn)，模型組癥狀明顯，并出現(xiàn)少數(shù)大鼠死亡現(xiàn)象。

2.2 山楂葉總黃酮對糖尿病大鼠體重的影響 大鼠經(jīng)過高脂高糖4周喂養(yǎng)以后，各組體重?zé)o明顯差異。給予STZ 1周以后，正常組大鼠體重有所增加，而給予STZ的所有大鼠體重都有所降低。給予山楂葉總黃酮后，正常組大鼠體重不斷增加，模型組大鼠體重一直降低，糖尿病“三多一少”癥狀明顯，模型組大鼠體重與正常相比有明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。低、中、高劑量HLF組大鼠體重在給藥第3周時(shí)較實(shí)驗(yàn)前有所下降，給藥4周后，體重下降緩慢，給藥5周后體重有所回升，較模型組顯著(P<0.05),到給藥6周后與模型組比較非常顯著(P<0.01),用藥各組呈劑量效應(yīng)關(guān)系，見表1。

表1 山楂葉總黃酮對糖尿病大鼠體重的影響

2.3 山楂葉總黃酮對糖尿病大鼠血糖的影響 給予STZ處理前，正常對照組、模型組與HLF組大鼠血糖無顯著差異(P﹥0.01)，給予STZ處理后，模型組與正常對照組比較差異顯著(P<0.01)，說明糖尿病模型建立成功。給藥后，HLF各組隨著實(shí)驗(yàn)時(shí)間的增加，血糖在逐漸下降，同時(shí)隨著山楂葉總黃酮?jiǎng)┝康纳?，血糖下降越來越明顯，有一定的量效關(guān)系，與模型對照組相比，差異顯著，而模型對照組小鼠血糖仍維持在較高的水平，說明HLF具有顯著降低血糖的作用。見表2。

表2 山楂葉總黃酮對糖尿病大鼠血糖的影響

2.4 山楂葉總黃酮對糖尿病大鼠血脂的影響 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)6周后檢測糖尿病大鼠血清TG、TC、HDL-C,LDL-C.與正常組相比明顯偏高(P<0.05)，說明糖尿病大鼠的血脂水平比正常組高；低、中、高劑量給藥組與模型組相比TG、TC、LDL-C水平逐漸下降，HDL-C水平逐漸升高，且隨著HLF劑量的升高，降血脂作用越來越明顯，呈一定的量效關(guān)系，說明山楂葉總黃酮具有一定降低血脂的作用。見表3。

表3 山楂葉總黃酮對糖尿病大鼠血脂的影響

3 討 論

在糖尿病發(fā)病過程中，由于胰島素分泌絕對或相對不足，使體內(nèi)糖、脂等多種代謝紊亂，進(jìn)而導(dǎo)致多種并發(fā)癥的發(fā)生，嚴(yán)重危害人們的身心健康。糖尿病治療的主要難題是防止并發(fā)癥，盡管目前通過一些藥物能很好地控制血糖，但仍然無法避免并發(fā)癥的發(fā)生，說明還是要了解糖尿病并發(fā)癥的發(fā)病機(jī)制以及治療策略。脂代謝異常是糖尿病并發(fā)癥發(fā)生的重要因素，糖、脂代謝異常的關(guān)系是研究糖尿病并發(fā)癥的重要內(nèi)容，這也是為什么糖尿病患者比非糖尿病患者更易患動(dòng)脈硬化性疾病的原因[9，10]。能否糾正糖脂代謝紊亂是治療糖尿病及其并發(fā)癥的重要環(huán)節(jié)。

本研究用高糖高脂飼料喂養(yǎng)和大鼠腹腔注射鏈脲佐菌素誘發(fā)糖尿病模型，伴有明顯的血脂TG、TC、LDL-C等升高，HDL-C降低，經(jīng)過山楂葉總黃酮給藥6周治療結(jié)果表明：能明顯降低血糖水平，與糖尿病模型組相比差異有顯著性。而且能適當(dāng)增加糖尿病大鼠的體重。同時(shí)，山楂葉總黃酮用藥6周后，糖尿病大鼠血清中TC、 TG、 LDL-C明顯升高而HDL-C水平明顯降低的作用；在一定程度上糾正了糖尿病糖脂代謝紊亂。本研究結(jié)果與報(bào)道[11]一致，而且從結(jié)果可以看出山楂葉總黃酮對血糖的影響較溫和，給藥后立即降低血糖的程度較輕，但長期給藥的降血糖效果是肯定的。

在實(shí)驗(yàn)過程中，本研究也觀察到糖尿病大鼠出現(xiàn)典型的“三多一少”癥狀，飲水、飲食量明顯高于正常對照組，而且糖尿病大鼠的體重明顯減低給予不同劑量山楂葉總黃酮后大鼠體重也逐日增加。糖尿病大鼠還出現(xiàn)皮毛脫落無光澤、體虛，對外界刺激的敏感，尾巴潰爛變黑， 類似于臨床上的糖尿病足。但山楂葉總黃酮給藥組該類癥狀較輕，說明山楂葉總黃酮對糖尿病大鼠病變以及并發(fā)癥具有良好的控制作用。

[1]Fara JM，Lu HL，CianfloneK．Diabetes,lipids and adipocyte secretagogues[J]．Biochem Cell Biol，2004，82(1):170

[2]Lawrence JM，Reid J，Taylor GJ，et al.The effect of highdose atorvastatin therapy on lipids and lipoprotein subfractions in overweight patients with type 2 diabetes[J].Atherosclerosis,2004，174(1):141

[3]王芳．山楂葉總黃酮的藥理作用[J]．浙江中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2010，34(2):295

[4]李桂云，吳正治．STZ建立2型糖尿病大鼠模型的劑量探討[J]．深圳中西醫(yī)結(jié)合雜志，2007，7(2)：74

[5]曾艷，賈正平．地黃寡糖在2型糖尿病大鼠模型上的降血糖作用及機(jī)制[J]．中國藥理學(xué)通報(bào)，2006，22(4)：411

[6]黃昕，崔磊，曹誼林．STZ誘導(dǎo)裸鼠糖尿病模型的建立及觀察[J]．組織工程與重建外科，2007，3 (4)：186

[7]何清華，周迎生，王征，等．2型糖尿病大鼠模型制備的影響因素及其特點(diǎn)[J]．中國實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)報(bào)，2007，15(6)：425

[8]陳嘉，張永斌，桑傳蘭，等．SD大鼠2型糖尿病模型的建立及相關(guān)指標(biāo)的測定[J]．動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2012，(6)：91

[9]沈?qū)?，李彩娜，環(huán)奕，等．小檗堿調(diào)節(jié)血糖血脂代謝紊亂機(jī)制研究進(jìn)展[J].藥學(xué)學(xué)報(bào)，2010，45(6)：699

[10]Dunlop M．Aldose reductase and the polyols pathway in diabetic nephropathy[J]．Kidney Int，2000，58(Suppl 77)：3

[11]葉希韻，張隆，沈菊，等．山楂葉總黃酮對糖尿病小鼠糖脂代謝的影響[J]．中草藥，2005，36(11)：1683