健脾化濕顆粒對實驗性IBS－D大鼠結(jié)腸黏膜5－HT表達的影響＊

趙立波，王迎寒，劉玉玲，張曉峰，董岫巖，郭洪杰△，趙淑艷

（1.河北承德護理職業(yè)學院涉外護理系，河北承德 067000；2.河北省中藥研究與開發(fā)重點實驗室，河北承德 067000；3.承德醫(yī)學院附屬肛腸醫(yī)院中醫(yī)內(nèi)科，河北承德 067000）

腸易激綜合征（Irritable bowel syndrome，IBS）是一種以腹痛、腹脹伴有大便性狀改變和排便習慣改變?yōu)樘卣鞯陌Y候群，是一種功能性胃腸紊亂性疾病［1］。臨床以腹瀉型腸易激綜合征（IBS－D）最為常見［2］。其發(fā)病機制尚不明確，臨床越來越多的研究表明腦－腸軸［3］及胃腸肽類激素［4］與IBS密切相關(guān)，5－羥色胺（5－HT）［5－6］作為重要的胃腸肽激素在IBS發(fā)生發(fā)展中起重要作用。本實驗從實驗大鼠結(jié)腸組織5－HT表達水平的變化，探討健脾化濕顆粒治療IBS－D可能的作用機制，現(xiàn)將結(jié)果報道如下。

1 材料與方法

1.1 材料 60只清潔級 Wistar大鼠，雌雄各半［體質(zhì)量（170±20）g，合格證編號：Scxk（冀）2009－0004］；番瀉葉（批號：0120420）；健脾化濕顆粒，由承德醫(yī)學院中藥研究所分析室制備；得舒特（批號：624065，法國蘇威制藥公司生產(chǎn)）；5－HT免疫組織化學試劑盒、DAB顯色試劑盒（購自德國博士德生物工程有限公司）。

1.2 方法

1.2.1 IBS－D模型鼠制備 適應性飼養(yǎng)1周，分為正常組（不作任何處理）、模型組、健脾化濕低、中、高劑量組和得舒特組，每組10只。IBS－D動物模型采用喬氏法造模［7］：除正常組，各組大鼠實驗前10h禁食，自由飲水，分別給予番瀉葉煎劑（0.6g／mL生藥）灌胃，每日1次。灌服完番瀉葉煎劑1h后即用粗制棉繩束縛大鼠的后兩肢，使之行動不便，煩躁不安，造成一定應激刺激，每天束縛2h，持續(xù)2周，正常組全程只予以生理鹽水灌胃，均按每只10mL／kg劑量灌胃。每日觀察大鼠大便、飲食、毛色等情況。正常組大鼠大便成型、便次少、進食穩(wěn)定、毛色光亮。而模型組大鼠皮毛松弛、便質(zhì)稀、便次多、進食量下降、飲水增多。上述模型鼠情況與文獻記載及臨床IBS－D患者癥狀一致，且上述癥狀持續(xù)存在，提示IBS－D動物模型成功。

1.2.2 治療方法 造模成功后，健脾化濕顆粒高、中、低劑量組給藥濃度分別為4.0、2.5、1.5g／mL（生藥），得舒特組給藥濃度3mg／mL，均以每只10mL／kg灌胃給藥。模型組和正常組給予等容量生理鹽水。每日1次，連續(xù)2周。

1.2.3 結(jié)腸中5－HT水平測定方法 實驗結(jié)束前1d，大鼠禁食不禁水，乙醚麻醉，大鼠處死后截取近端結(jié)腸（距回結(jié)腸連接處2cm）1cm，10%中性甲醛固定24h后石蠟包埋，切片，片厚5μm，常規(guī)脫蠟和水化，磷酸鹽緩沖液（PBS）沖洗，DAB顯色，中性樹膠封片等嚴格按劑盒說明完成。陽性表達為胞質(zhì)或胞膜呈棕褐色顆粒，使用醫(yī)學圖像定量分析軟件分析結(jié)腸黏膜中5－HT陽性指數(shù)，每組分析6個標本，每張切片分析3個視野。即在400倍高倍鏡視野下攝取切片圖像，選定攝取圖像的黏膜層、黏膜下層，全視場測量，得出免疫組織化學圖像中5－HT陽性面積和光密度（OD）值。陽性面積×OD值，即為5－HT免疫組織化學陽性指數(shù)。OD值代表組織染色強度，即OD值越大，染色越強。

1.3 統(tǒng)計學處理 采用SPSS11.5軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析。計量資料用表示，統(tǒng)計方法采用方差分析和q檢驗比較各組的差別，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié) 果

經(jīng)2周治療后，IBS－D模型大鼠結(jié)腸組織中5－HT的水平顯著高于正常組（P＜0.01）；除健脾化濕顆粒低劑量組外，各治療組大鼠結(jié)腸組織中5－HT的水平顯著低于模型組（P＜0.05）。其中，健脾化濕顆粒高劑量組效果明顯，與得舒特組差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），而健脾化濕顆粒低、中劑量組效果較差（P＜0.01），結(jié)果見表1、圖1。

表1 健脾化濕顆粒對IBS－D大鼠結(jié)腸黏膜5－HT水平的影響（）

表1 健脾化濕顆粒對IBS－D大鼠結(jié)腸黏膜5－HT水平的影響（）

a：P＜0.01，與模型組比較；b：P＜0.01，與正常組比較。

組別 n 5－HT 光密度正常組 10 0.1988±0.054a模型組 10 0.4973±0.071b得舒特組 10 0.3018±0.038健脾化濕顆粒低劑量組 10 0.4464±0.063健脾化濕顆粒中劑量組 10 0.3617±0.086b健脾化濕顆粒高劑量組 10 0.3223±0.056b

圖1 健脾化濕顆粒對IBS－D模型大鼠結(jié)腸組織中5－HT水平的影響（免疫組織化學×400）

3 討 論

IBS發(fā)病機制不明確，越來越多的研究表明胃腸激素在IBS發(fā)病中起重要作用［8］。胃腸激素是指分布在胃腸道管壁上和胰腺內(nèi)的嗜銀細胞分泌的一組小分子或肽類高效能生物活性物質(zhì)［9］。5－HT是重要的胃腸激素之一，廣泛存在于中樞神經(jīng)系統(tǒng)和胃腸道［10］，其對腸道運動、內(nèi)臟感覺、腸道吸收和分泌均有重要作用。研究發(fā)現(xiàn)結(jié)腸內(nèi)壓力升高，可促使嗜鉻細胞釋放5－HT，與5－HT受體結(jié)合，調(diào)節(jié)蠕動反射，引起對疼痛感覺的調(diào)節(jié)［11］。有學者在研究中發(fā)現(xiàn)IBS－D模型大鼠結(jié)腸黏膜肌層、黏膜下層5－HT陽性表達顯著增強［12］。提示5－HT可能是IBS－D發(fā)生的重要生物活性因子。詹麗杏等［13］的研究發(fā)現(xiàn)IBS患者血漿5－HT水平較正常者顯著升高，且活動期水平高于緩解期，提示5－HT的合成、分泌與IBS癥狀發(fā)作相關(guān)。還有學者報道大鼠血清5－HT含量增加能加快結(jié)腸推進速度，增加排便次數(shù)。

本實驗結(jié)果顯示，IBS－D模型大鼠結(jié)腸組織中5－HT的含量明顯增高，與正常組比較差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.01），經(jīng)2周治療后，健脾化濕顆粒高劑量組及得舒特組大鼠結(jié)腸組織中5－HT的含量顯著低于模型組（P＜0.01），提示結(jié)腸組織5－HT高表達在IBS－D發(fā)病中有一定作用。

IBS－D屬中醫(yī)“泄瀉”、“痛泄”、“久泄”等的范疇［14］?；静C為肝郁脾虛［15］、脾虛濕勝。健脾化濕顆粒在傳統(tǒng)經(jīng)驗方健脾化濕湯基礎(chǔ)上改變劑型，既保存該方原有療效，又適應現(xiàn)代社會的用藥理念。方中炙黃芪、益智仁，輔以炒白術(shù)、砂仁補氣健脾和芳香化濕；陳皮、茯苓行氣健脾，燥濕和胃；白芍養(yǎng)血柔肝；烏藥行氣止痛；防風辛能散肝，香能舒脾，風能勝濕止瀉，理脾引經(jīng)。全方緊緊抓住脾虛濕盛和肝氣郁結(jié)環(huán)節(jié)，健脾化濕，疏肝解郁，從而使肝氣條達，脾胃升降功能恢復正常而腹痛、便溏癥狀消除。經(jīng)本實驗研究發(fā)現(xiàn)，健脾化濕顆?？筛纳艻BS－D 5－HT的高表達，減弱神經(jīng)介導的胃腸道運動與分泌，提高內(nèi)臟痛閾，消除腸道過敏，從而有效改善IBS－D臨床癥狀。

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