HPV L1殼蛋白和MMP-2在宮頸病變表達及臨床意義

周利娟

宮頸上皮內(nèi)瘤變(CIN)反映了子宮頸癌發(fā)生發(fā)展中的連續(xù)過程, 通過篩查發(fā)現(xiàn)CIN, 及時治療高級別病變, 是預(yù)防子宮頸癌行之有效的措施［1］。研究已表明, 生殖道感染人乳頭瘤病毒(HPV)是婦女宮頸癌和癌前病變的主要危險因素,HPV L1殼蛋白是HPV 感染復(fù)制早期所必須的結(jié)構(gòu)蛋白, 故可通過檢測HPV L1殼蛋白來研究HPV感染狀態(tài)。細胞外基質(zhì)( extracellular matrix, ECM) 降解對于腫瘤的浸潤轉(zhuǎn)移和血管生成至關(guān)重要?；|(zhì)金屬蛋白酶( MMPs) 是降解ECM 的重要酶類, MMP-2可能在宮頸癌細胞增殖、血管生成、浸潤轉(zhuǎn)移等過程中發(fā)揮重要作用。本研究通過免疫組化檢測HPV L1蛋白及MMP-2在不同宮頸病變過程的表達情況, 探討其在宮頸上皮內(nèi)瘤變及宮頸癌發(fā)展中的相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1 一般資料 入選2010年9月～2013年9月許昌市中心醫(yī)院手術(shù)治療的宮頸疾病患者121例, 術(shù)前HPV-DNA均為陽性, 其中宮頸鱗狀細胞癌(SCC)30例、CIN 58例(其中CIN I、CINⅠ、CINⅢ分別為18例、19例、21例), 正常宮頸33例(因子宮良性病變而行子宮全切除標本, 術(shù)前宮頸外觀正常, 術(shù)后病理診斷為宮頸炎標本)。所有患者均無宮頸錐切、子宮切除、放化療史。

1.2 方法 MMP-2及HPV L1檢測法應(yīng)用鏈霉素親生物素-過氧化物酶法(SP法)進行檢測。

1.3 試劑 HPV L1鼠抗人單克隆抗體購自賽泰公司, SP試劑盒及DAB酶底物顯色劑等均購自福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司。兔抗人MMP-2抗體購自北京博奧森科技實業(yè)有限公司。

1.4 判斷和評估標準 MMP-2結(jié)果按照以下評判標準［2］進行半定量判斷：兩位病理醫(yī)師專家各自獨立觀察隨機每例切片隨機選取10個高倍視野進行結(jié)果判定。按染色強度及陽性細胞數(shù)所占百分比綜合計分。即：0分為陽性細胞數(shù)<5%, 1分為5%～25%, 2分為 26%～50%, 3分為51%～75%, 4分為>75% 。按著色強度記分：1分為染色呈淡黃色, 2分為染色呈黃色, 3分為染色呈棕黃色。兩種記分的乘積即為陽性強度：0分為陰性(-), 1～4分為弱陽性(+), 5～8分為中度陽性(++), 9～12分為強陽性(+++)。有一個被染色的細胞核呈紅色即認為HPV L1 殼蛋白表達呈陽性。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法 采用 SPSS18.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計處理。計數(shù)資料采用χ2檢驗和Fishers 確切概率法, 相關(guān)分析使用單因素直線相關(guān)分析,P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 HPV L1殼蛋白和MMP-2在不同宮頸病變組織中的表達 HPV L1殼蛋白在正常宮頸組、CINⅠ組、CINⅡ組、CINⅢ組、SCC組陽性表達分別為69.69%(23/33)、83.33% (15/18)、36.84%(7/19)、4.70%(1/21)、0(0/30)。CIN 中 為 37.93%(23/58)。除了CINⅢ與SCC比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)外, 其他不同宮頸病變間比較, 差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；MMP-2在正常宮頸組、CINⅠ組、CINⅡ組、CINⅢ組、SCC組的陽性表達分別為 6.06%(2/33)、33.33%(6/18)、57.89%(11/19)、66.66%(14/21)、76.66%(23/30), CIN 中 53.44%(31/58)。正常組織中MMP-2 的陽性率明顯低于CIN組及SCC組。MMP-2 在正常宮頸組、CIN組、SCC組比較, 三組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表 1。

2.2 HPV L1 殼蛋白和MMP-2的相關(guān)性 CIN I組中HPV L1蛋白陽性表達率最高, 隨著病變程度的增加, 其陽性表達率明顯下降。SCC組中MMP-2陽性表達率最高, 隨著病變程度的增加, 其陽性表達率明顯增加經(jīng)相關(guān)性結(jié)果分析顯示宮頸病變中HPV L1殼蛋白與MMP-2表達呈負相關(guān)(P<0.05),見表2。

表1 HPV L1 殼蛋白和MMP-2在正常宮頸組、CIN組、SCC 組的表達情況(n, %)

表2 HPV L1殼蛋白和MMP-2的相關(guān)性

3 討論

宮頸癌是婦科常見腫瘤之一, 有年輕化的趨勢, 主要源于對婦女進行有效的宮頸篩查和癌前病變的早期診斷, 宮頸癌的5 年生存率在90%以上, 因此有效地預(yù)測宮頸癌的早期病變即可通過早期干預(yù)降低宮頸癌的死亡率［3］。

目前已證實高危型HPV感染是宮頸癌發(fā)生的重要原因。近年感染HPV的有效評估指標為L1蛋白, 宮頸惡變程度的增高, HPV L1蛋白陽性表達率降低。Lee H等［4］則提出宿主病毒相互干擾學(xué)說, 即隨著CIN分度的升高甚則惡變, 可缺失L1殼蛋白。HPV L1殼蛋白陰性提示感染HPV具有進展性, 出現(xiàn)宮頸癌或CIN的高發(fā)病率。作者的研究表明隨著宮頸病變級別的增高, HPV L1殼蛋白在慢性宮頸炎、CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ、宮頸鱗癌陽性表達逐漸減少, 差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05), 同相關(guān)研究一致。

基質(zhì)金屬蛋白酶(MMPs)是降解ECM 的重要酶類。MMP-2為MMPs家族成員, 推測 MMP-2的陽性表達提示, 腫瘤細胞擁有侵襲、轉(zhuǎn)移的能力, 細胞就具有惡性侵略的特性［5］。滕燕伊等［6］采用免疫組化研究顯示：MMP-2在宮頸癌中的表達高于CIN及正常宮頸組織, 并認為 MMP-2是早期腫瘤的標志。作者的研究表明MMP-2 在正常宮頸組、CIN組、SCC組的陽性表達分別為6.06%(2/33)、53.44%(31/58)、76.66%(23/30), 正常組織中MMP-2的陽性率明顯低于CIN 組及SCC組。MMP-2在正常宮頸組、CIN組、SCC組比較, 三組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05), 同相關(guān)研究一致；作者同時檢測HPV L1殼蛋白和MMP-2的表達顯示兩者在宮頸病變的發(fā)生發(fā)展過程中具有負相關(guān), 提示兩者聯(lián)合能用于宮頸癌的早期診斷、預(yù)后判斷及術(shù)后早期復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的隨訪監(jiān)測, 但仍需多中心研究結(jié)論。

綜上所述, 通過對不同宮頸組織中HPV L1蛋白與MMP-2的免疫組化測定表明：HPV Ll蛋白表達隨著宮頸病變程度的加重而下降；MMP-2隨著宮頸病變程度的加重而增加。因此, 作者推測HPV L1蛋白與MMP-2在宮頸病變的發(fā)生發(fā)展中具有一定意義, 可以幫助了解宮頸的病變程度,預(yù)測宮頸病變的發(fā)展趨勢。

［1］謝幸.婦產(chǎn)科學(xué).第8版.北京:人民衛(wèi)生出版社, 2013:301-302.

［2］朱華, 施錚錚, 楊孝軍, 等.Survivin、Bcl-2、HPV 16 /18在宮頸上皮內(nèi)瘤變及宮頸癌中的表達及臨床意義.實用婦產(chǎn)科雜志, 2010, 26 (1):57.

［3］陳恒禧, 甘曉玲, 傅璟.HPV L1 檢測預(yù)測宮頸鱗狀上皮內(nèi)病變預(yù)后的意義.現(xiàn)代婦產(chǎn)科進展, 2009, 18(11):865.

［4］Lee H, Lee KJ, Jung CK, et al.Expression of HPVL1 capsid protein in cervical specimens with HPV infection.Diagn Cytopathol, 2008,36(12):864.

［5］Banerji A, Chakrabarti J, Mitra A, et al.Cell menbrane-associated MT1-MMP-dependent activation of pro-MMP-2 in A375 melanoma cells.J Env Path Tox Oncol, 2005, 24(1):3-17.

［6］滕燕伊 , 劉曉云 , 鄭洪 , 等 .Ki-67、MMP-7、MMP-2 在宮頸 CIN 和宮頸癌中的表達及意義.重慶醫(yī)科大學(xué)學(xué)報, 2010,35(7):989-991.