五皮飲治療仔豬水腫病模型的療效觀察

孫新堂，王傳春，王成森，郭洪梅

（山東畜牧獸醫(yī)職業(yè)學(xué)院，山東濰坊261061）

仔豬水腫病是仔豬斷奶前后發(fā)生的一種急性、散發(fā)性、致死性腸毒素血癥，其病因?yàn)橹虏⌒源竽c桿菌所產(chǎn)生的毒素。本病的臨床特征為頭面部、下頜部及前肢皮下等部位水腫[1]，并有神經(jīng)癥狀，發(fā)病率為30%～50%之間，死亡率可達(dá)到80%，對(duì)養(yǎng)豬業(yè)危害較大[3]。本試驗(yàn)以小鼠為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，采用大腸桿菌107/86菌株復(fù)制病理模型，按照中獸醫(yī)理論選藥組方，觀察療效，最終確定五皮飲可以有效治療本病。

1 材料與方法

1.1 菌株及注射劑量 用營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)大腸桿菌107/86菌株（O139︰K12︰H1），大腸桿菌原菌液的濃度為3×108CFU/ml，注射劑量為0.3ml[2]。

1.2 中藥及其制劑的制備 根據(jù)本病的病機(jī)，選則下列中藥：桑白皮、生姜皮、陳皮、大腹皮、茯苓皮、藿香、蒼術(shù)、黨參、甘草、焦麥芽、焦神曲、白術(shù)及桂枝，按照君、臣、佐、使的原則從不同的側(cè)重點(diǎn)組成如下方劑。中藥方（A）：藿香、蒼術(shù)、黨參、甘草；中藥方（B）：焦麥芽、焦神曲、白術(shù)、桂枝；中藥方五皮飲（C）：桑白皮、陳皮、生姜皮、茯苓皮、大腹皮。

干燥上述藥物并按組方中的比例準(zhǔn)確稱(chēng)重置于砂鍋中，加3～5倍體積的蒸餾水浸泡20min，武火煮沸后用文火熬制30min，共煎3次，合并藥液并用紗布過(guò)濾。為確定用量，將藥液蒸發(fā)濃縮

1.3 試驗(yàn)分組及給藥方案 選取昆明系清潔級(jí)小鼠100只，公母各半，體重為20～30g，隨機(jī)分為A～E 5組，每組20只。復(fù)制模型成功后分別開(kāi)始給藥，劑量均為0.2m l/10g體重，每日2次，治療3d，觀察10d。D組為空白對(duì)照組，不攻毒，不給藥，腹腔注射肉湯培養(yǎng)液，灌服同等劑量生理鹽水。E組為陽(yáng)性對(duì)照組，注射細(xì)菌但不給藥治療，攻毒后灌服同等劑量的生理鹽水。

1.4 療效判斷標(biāo)準(zhǔn) 本試驗(yàn)各藥物組的治療效果以死亡率和存活率來(lái)表示。

死亡率：凡死亡前出現(xiàn)眼瞼水腫、后肢麻痹等仔豬水腫病的典型癥狀，死亡后剖檢可見(jiàn)到胃壁、腸系膜水腫等示癥病變，確定為感染死亡，據(jù)死亡數(shù)算出各組的死亡率。

存活率：試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，各組存活動(dòng)物占該組試驗(yàn)動(dòng)物的百分?jǐn)?shù)。

2 結(jié)果

2.1 治療結(jié)果 接種107/86菌液后4～8小時(shí)，小鼠陸續(xù)出現(xiàn)發(fā)病，表現(xiàn)為萎靡不振、眼瞼高度水腫、飲食欲降低、被毛逆立、心跳加速、呼吸急迫等。該病的典型癥狀為神經(jīng)癥狀，如后肢麻痹、偏癱、水腫（眼瞼、前額等部位）。給藥后治療的第1、2d，各試驗(yàn)組發(fā)病小鼠癥狀無(wú)明顯改善；第3d，C組小鼠療效優(yōu)于其余中藥組方組，表現(xiàn)為C組小鼠死亡數(shù)少于A、B組，且C組小鼠健康狀態(tài)要好于A、B組；第4d開(kāi)始C組小鼠開(kāi)始飲食增加，無(wú)死亡現(xiàn)象，而其余中藥組則仍有死亡小鼠；E組小鼠由于不用藥治療，到第3d全部死亡。由表1可知，組方C（五皮飲組）的顯效率明顯高于其余各中藥組方。

表1 各試驗(yàn)組小鼠存活情況

2.2 剖檢病變 剖檢病變主要表現(xiàn)為胃壁增厚、水腫、并有散在出血點(diǎn)（圖1），腸系膜腫脹，腸內(nèi)充滿(mǎn)淡黃色黏稠液體，直腸有大量出血點(diǎn)，肝、脾、肺、腎等實(shí)質(zhì)臟器有散在性出血點(diǎn)，大腦腦膜充血。

2.3 顯微病變 取小鼠病變組織制作病理切片，光學(xué)顯微鏡下可觀察到小動(dòng)脈和微動(dòng)脈炎病變，小動(dòng)脈中膜核濃縮和核破裂，平滑肌崩解，壞死。病變的血管壁上由于有纖維素樣物質(zhì)沉積而變厚，管腔變窄，血管壁周?chē)錆M(mǎn)炎性細(xì)胞（圖2），甚至形成血管套。腦干部可見(jiàn)神經(jīng)細(xì)胞變性及神經(jīng)纖維排列疏松，膠質(zhì)細(xì)胞和巨噬細(xì)胞浸潤(rùn)，有時(shí)伴有微動(dòng)脈炎。掃描電鏡觀察，小腸絨毛壞死脫落（圖3），上皮細(xì)胞壞死；利用透射電鏡觀察亞顯微結(jié)構(gòu)病變，微血管內(nèi)皮細(xì)胞及其線(xiàn)粒體腫脹，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴(kuò)張、脫顆粒，細(xì)胞核膜廣泛性增殖，有偽足伸出，細(xì)胞核固縮，嚴(yán)重者，核崩解（圖4）。

3 討論

圖1 胃壁增厚、水腫、出血

圖2 胃壁固有層纖維變性H.E × 400 S

圖3 小腸絨毛壞死EM × 300

圖4 線(xiàn)粒體腫脹TEM × 12 000

近年來(lái)，仔豬水腫病以其高致死率和高飼料消耗率而引起眾多研究者的重視。研究表明，F(xiàn)18ab菌毛和志賀樣毒素Ⅱ型變異體（SLT-Ⅱe）為引起仔豬水腫病的致病因子[8,9]。本病的發(fā)病機(jī)理為菌毛黏附于小腸絨毛上皮細(xì)胞后菌體定居、增殖并產(chǎn)生SLT-Ⅱe，豬只吸收毒素后引起廣泛性血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷，導(dǎo)致血管的通透性增加，血液中的液體成分滲入到組織中，從而引起頭部、眼瞼、前肢等部位的皮下水腫和神經(jīng)癥狀[10]。剖檢可見(jiàn)患病動(dòng)物的胃壁和腸系膜膠凍樣水腫，胸腹腔大量積液；顯微鏡下觀察，胃水腫，黏膜下層充滿(mǎn)大量漿液和散在的炎性細(xì)胞，肌層與黏膜層分離；各組織器官的小動(dòng)脈和微動(dòng)脈充血，周?chē)醒仔约?xì)胞浸潤(rùn)[3]。

從治療效果看，方劑A、B、C治療后小鼠的存活率分別為40%、35%和70%，C組（五皮飲）的存活率顯著高于A、B兩組（P<0.05），證明五皮飲對(duì)人工感染引起的小鼠仔豬水腫病有顯著的療效。中獸醫(yī)認(rèn)為，仔豬水腫病主要由脾陽(yáng)虛衰引起的水濕內(nèi)停，泛濫皮膚所致，治宜健脾、行氣、滲濕利水。縱觀試驗(yàn)中所用的方劑，A方由藿香、蒼術(shù)、黨參、甘草組成，以益氣健脾為主，滲濕利水作用不足，故其治療效果較差；B方由焦麥芽、焦神曲、蒼術(shù)、澤瀉、白術(shù)、桂枝組成，以消積導(dǎo)滯、滲濕利水為主，但行氣作用不足，故其效果也遜于C組；C方為經(jīng)典名方五皮飲，藥物組成為茯苓皮、桑白皮、陳皮、大腹皮和生姜皮，其中茯苓皮可滲濕利水、健脾、寧心安神，陳皮理氣和中、止咳化痰，二藥合用行氣化濕醒脾共為主藥；桑白皮宣降肺氣，疏通水道為輔藥，主治面目浮腫；生姜皮可以辛散水濕，大腹皮乃檳榔的干燥果皮，下氣利水，具有很強(qiáng)的消腫和導(dǎo)水下行作用。諸藥相合，健脾、理氣、行水，共奏健脾化濕、利水消腫之功[9～11]。其功效正于本病的治療原則相符，故在本試驗(yàn)中取得了良好地治療效果。

[1]嚴(yán)振龍，陳雷等.F107（F18ab）菌毛單抗的制備、鑒定與初步應(yīng)用[J].中國(guó)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào)2002,(24):270-272.

[2]吳挹芳.現(xiàn)代微生物培養(yǎng)基和試劑手冊(cè)[M].福州:福建科學(xué)技術(shù)出版社,1994:41-42.

[3]陳懷濤，許樂(lè)仁.獸醫(yī)病理學(xué)[M].北京:中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社,2005:636-644.

[4]陳德坤等.用小鼠復(fù)制仔豬水腫病的模型試驗(yàn)[J].動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展,2003,24(4):79-80.

[5]ImberechtsH,HenrideGrere,Christine Schlickeret al.Charcterization of F107 FimbriaeofEscherichia coli 107/86,Which CasesEdema in Pigs,and Nucleotide Seunece of the F107Majer FimbrialSubunitGene,fed[J].Infect Immun,1992,60:1963-1971.

[6]成大榮,徐建生等.大腸埃希氏菌F18ab菌毛F亞單位基因的克隆與鑒定[J].中國(guó)獸醫(yī)科技2004,34(5):43-46.

[7] MacLeod D L,Gyles CL.Effectsofculture conditionson yield ofShiga-like toxin-IIv from Escherichia coli[J].Can JMicrobiol,1989,35(6):623-629.

[8]Gannon V P,Gyles CL,Wilcock BP.Effectsof Escherichia coliShiga-like toxins(verotoxins)in pigs[J].Can JVetRes,1989,53(3):306-312.

[9]Amorim CR,MatsuuraM S,Rosa JC,etal.Purification and characterization of the fimbrF18ac(2134P)isolated from enterotoxigenic Escherichiacoli(ETEC)[J].Vet Microbiol2000,76(1):41-49.

[10]朵紅.豬水腫病[J].畜禽業(yè)2004,6,52-53.

[11]Barbara E.Straw.豬病學(xué)[M]第八版.趙德明，張中秋，沈建忠，譯.北京:中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)出版社,1999.