催乳湯對產(chǎn)后缺乳大鼠乳腺的影響

董世起，李歡歡，卞藝斐，范迎賽，Naw ras Hamdan，王婷婷，高宗勤，劉鐘杰

（中國農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)學(xué)院臨床獸醫(yī)學(xué)系中獸醫(yī)教研室，北京100193）

如果在母畜分娩后出現(xiàn)乳汁不足或無乳，仔畜因吃不到乳汁而表現(xiàn)饑餓、逐漸消瘦，如不及時采取治療措施，往往導(dǎo)致仔畜最終死亡（劉小艷，2013；萬鵬等，2013）。因此本病的防治可以提高仔畜的成活率，對本病開發(fā)新的治療藥物，具有巨大的應(yīng)用前景和經(jīng)濟(jì)效益（張明海，2012）。本研究嘗試根據(jù)傳統(tǒng)中醫(yī)理論，以調(diào)理氣血，通絡(luò)下乳為主要原則自主擬定方劑（毛成榮，2011），以SD大鼠產(chǎn)后缺乳模型為實(shí)驗(yàn)對象，研究催乳湯對產(chǎn)后缺乳SD大鼠乳腺的結(jié)構(gòu)和功能的影響，探索治療產(chǎn)后缺乳的新藥及其治療效果。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)藥品 甲磺酸溴隱亭片，由匈牙利吉瑞大藥廠生產(chǎn)，生產(chǎn)批號：T33129A；方劑所需中藥藥材均購自北京同仁堂大藥房馬連洼店；實(shí)驗(yàn)用SD大鼠由北京軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動物中心提供，合格證號：SCXK(軍)2012-0004，所有SD大鼠均為SPF級，體重范圍為215g-235g。

1.1.2 催乳湯制備 本研究自擬的催乳湯由黃芪、黨參、當(dāng)歸、王不留行、白術(shù)、甘草組成。用電子天平分別稱取所需中藥藥材放于陶瓷煎藥罐中，加入藥重量10倍體積的蒸餾水，浸泡30分鐘后大火煮沸再調(diào)至小火煎煮30分鐘，將藥液用8層脫脂細(xì)紗布過濾到大燒杯中后第二次加入8倍藥量體積的蒸餾水，直接大火煮沸后再調(diào)至小火煎煮20分鐘后，將藥液用8層脫脂細(xì)紗布過濾倒出，合并兩次過濾藥液，用24層脫脂細(xì)紗布過濾，過濾后用雙層分析濾紙加壓過濾，最后收集藥液的過濾液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀減壓濃縮至生藥濃度1g/ml，4℃保存待用。

1.1.3 溴隱亭溶液配制 取甲磺酸溴隱亭片（2.5mg）32片置于棕色試劑瓶中，量取100mL燒開后冷卻至室溫的蒸餾水，充分溶解即制得0.8mg/mL的溴隱亭藥液，4℃避光保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 實(shí)驗(yàn)動物分組及給藥 將未經(jīng)孕產(chǎn)SD大鼠母鼠和公鼠按照3:1比例自然配種，分娩后隨機(jī)將母鼠分成3組，每組母鼠10只，調(diào)整每只母鼠帶仔鼠12只。3組分別做為空白對照組、缺乳對照組和湯劑治療組。每天早晚對各組母鼠按以下藥量灌胃：空白對照組：2ml蒸餾水，分兩次1ml進(jìn)行灌胃；湯劑治療組：1m l溴隱亭溶液+1ml催乳湯；缺乳對照組：1ml溴隱亭溶液+1ml蒸餾水。

1.2.2 催乳湯對乳腺泌乳功能的影響 本試驗(yàn)采用稱量母鼠哺乳前后全窩仔鼠重量的方法，來代替計算母鼠的泌乳量，即在母鼠哺乳前后，對全窩仔鼠進(jìn)行稱重，哺乳后全窩仔鼠重量減去哺乳前全窩仔鼠重量，就是母鼠一次泌乳量。

1.2.2.1 母鼠每小時泌乳量比較 每天早晨灌胃給藥2小時后，將母鼠和仔鼠進(jìn)行分離，稱量每窩仔鼠的總重，記為W1；仔鼠和母鼠隔離4小時后，再次稱量每窩小鼠的總重，記為W2；哺乳1小時后第三次稱量每窩仔鼠的總重，記為W3。則：母鼠每天每小時泌乳量為：W3-W2+(W1-W2)/4

連續(xù)7天稱量母鼠的泌乳量，第七天稱量結(jié)束后泌乳量稱量實(shí)驗(yàn)結(jié)束。缺乳對照組在實(shí)驗(yàn)后期有母鼠出現(xiàn)仔鼠全窩死亡，記該母鼠泌乳量記為0。

1.2.2.2 仔鼠每窩凈增重比較 仔鼠每窩凈增重為：W3(Ⅶ)-W1(Ⅰ)，其中，W3(Ⅶ)是最后一天的仔鼠窩總重W 3，W1(Ⅰ)是第一天的仔鼠窩總重W1。

1.2.3 催乳湯對乳腺結(jié)構(gòu)的影響

1.2.3.1 乳腺濕重的比較 最后一天稱重結(jié)束后，將母鼠采用斷頭法處死，采集母鼠腹部兩側(cè)乳腺，稱量并記錄兩側(cè)乳腺的總重量。

1.2.3.2 乳腺結(jié)構(gòu)的比較 乳腺稱重后采取乳腺同一部位的組織，用4%中性多聚甲醛溶液固定，固定24小時后制作組織蠟塊，采用HE染色法比較觀察乳腺結(jié)構(gòu)變化。

1.3 結(jié)果處理 對獲得的各組數(shù)據(jù)，使用IBM SPSSStatistics20版軟件進(jìn)行單因素方差分析，多重比較時，如果方差齊則采用LSD法，如果方差不齊則采用Tamhane法，以P<0.05認(rèn)為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（黃波，2012）。實(shí)驗(yàn)結(jié)果用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示（小數(shù)點(diǎn)后保留兩位有效數(shù)字）。對組織切片用奧林帕斯顯微鏡及成像系統(tǒng)（OLYMPUSCX21）進(jìn)行觀察，并進(jìn)行拍照保存。

2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.1 催乳湯對乳腺功能的影響

2.1.1 母鼠每小時泌乳量比較 母鼠每小時泌乳量比較見表2-1。如表2-1所示，對于各組內(nèi)，缺乳對照組的每小時泌乳量自第三天起急劇下降，到第七天的時候每小時泌乳量極小，母鼠泌乳幾乎停止；湯劑治療組的母鼠每小時泌乳量在第三天后略有下降，從第五天呈上升趨勢。對于各組間的比較，湯劑治療組的每小時泌乳量比缺乳對照組高，但低于空白對照組。統(tǒng)計學(xué)分析顯示，缺乳對照組的每小時泌乳量與空白對照組相比在第三天的降低具有極顯著性（P<0.01），而湯劑治療組的每小時泌乳量在第三天的降低僅具有顯著性（P<0.05）；與缺乳對照組相比，湯劑治療組的每小時泌乳量在第五天出現(xiàn)了顯著性升高（P<0.05），自第六天起每小時泌乳量的升高具有極顯著性（P<0.01）。

表2-1 母鼠每小時泌乳量比較（n=10）

2.1.2 仔鼠每窩凈增重比較 仔鼠每窩凈增重比較見圖2-1。如圖2-1，經(jīng)過7天的治療，湯劑治療組的仔鼠每窩凈增重比缺乳對照組高，但低于空白對照組。統(tǒng)計學(xué)結(jié)果顯示，與缺乳對照組相比，湯劑治療組的仔鼠每窩凈增重具有顯著性增高（P<0.05）。

2.2 催乳湯對乳腺結(jié)構(gòu)的影響

2.2.1 母鼠乳腺（腹部）重量比較 母鼠乳腺（腹部）重量比較見圖2-2。如圖2-2，經(jīng)過7天的治療，湯劑治療組的母鼠乳腺（腹部）重量明顯高于缺乳對照組，但低于空白對照組。統(tǒng)計學(xué)結(jié)果顯示，與缺乳對照組相比，湯劑治療組的母鼠乳腺（腹部）重量具有顯著性增加（P<0.05）。

圖2-1 仔鼠每窩凈增重比較（n=10，單位：g）

圖2-2 母鼠乳腺（腹部）重量比較（n=10，單位：g）

圖2-3 母鼠乳腺（腹部）結(jié)構(gòu)比較

2.2.1 母鼠乳腺（腹部）結(jié)構(gòu)比較 母鼠乳腺（腹部）結(jié)構(gòu)比較見圖2-3。如圖2-3，相比正常對照組的泌乳期乳腺，缺乳對照組的乳腺組織嚴(yán)重萎縮，大量增生的結(jié)締組織、脂肪組織取代了正常乳腺組織的位置，乳腺小葉面積明顯減小，小葉內(nèi)腺泡腔明顯變小，小葉內(nèi)和邊緣可以明顯看到大量的取代脂肪細(xì)胞。相比缺乳對照組，湯劑治療組的乳腺內(nèi)乳腺組織具有恢復(fù)明顯，可以見到乳腺小葉面積明顯變大，小葉內(nèi)腺泡大量增生，腺泡腔明顯大于缺乳對照組，部分小葉內(nèi)腺泡腔恢復(fù)到正常水平，小葉內(nèi)較少見取代脂肪細(xì)胞，部分小葉邊緣可見取代脂肪細(xì)胞。

3 分析與討論

SD大鼠的母鼠泌乳是催乳素依存型調(diào)節(jié)，乳腺組織在催乳素的作用下分泌乳汁并排入乳腺管內(nèi)（唐立剛，2012）。溴隱亭可以直接激活多巴胺受體而抑制催乳素的分泌（馬愛團(tuán)等，2006），因此，本研究采用溴隱亭阻止和減少乳汁的分泌，通過母鼠每小時泌乳量和仔鼠每窩凈增重的數(shù)據(jù)分析，證明獲得了缺乳效果明顯的產(chǎn)后缺乳模型。

中醫(yī)認(rèn)為乳汁是由氣血津液化生，資于沖任，乳汁減少或不足是由于氣血虧虛、津液不足或因乳脈不行而致（劉小艷，2013）。本研究中催乳湯采用的是調(diào)理氣血，通絡(luò)下乳相結(jié)合的傳統(tǒng)產(chǎn)后缺乳治療方法。中藥的治療則側(cè)重于綜合調(diào)整機(jī)體的生理狀態(tài)，通過調(diào)整恢復(fù)組織器官的功能而產(chǎn)生治療作用，催乳湯要產(chǎn)生臨床明顯的泌乳量恢復(fù)效果，必須等到機(jī)體生理恢復(fù)而增加的泌乳能力大于溴隱亭的抑制力后。故而湯劑治療組母鼠的每小時泌乳量在第三天后略有下降，在第五天比缺乳對照組顯著性升高，此后呈極顯著性升高，說明本研究的催乳湯可以顯著提高產(chǎn)后缺乳母鼠的泌乳量。而湯劑治療組的仔鼠每窩凈增重顯著大于缺乳對照組，也充分說明了本研究的催乳湯可以顯著提高產(chǎn)后缺乳母鼠的泌乳量，增加仔鼠的體重。母鼠每小時泌乳量和仔鼠每窩凈增重兩項的統(tǒng)計分析結(jié)果高度一致，說明催乳湯能夠恢復(fù)產(chǎn)后缺乳母鼠乳腺的功能。

缺乳對照組的母鼠乳腺組織逐漸萎縮，停止分泌的腺組織由增生的結(jié)締組織、脂肪組織取代，乳腺重量極顯著降低，說明產(chǎn)后缺乳的母鼠乳腺已經(jīng)逐漸向靜止期乳腺結(jié)構(gòu)轉(zhuǎn)化。經(jīng)過催乳湯治療的湯劑治療組的母鼠乳腺組織明顯恢復(fù)，部分腺泡腔恢復(fù)正常，乳腺重量比產(chǎn)后缺乳組明顯增加，說明催乳湯具有恢復(fù)產(chǎn)后缺乳母鼠乳腺結(jié)構(gòu)的功能，和之前催乳湯能夠恢復(fù)產(chǎn)后缺乳母鼠的乳腺功能相一致。

由于催乳素的生理作用是促進(jìn)泌乳，維持泌乳期乳腺的結(jié)構(gòu)，因此，以上分析提醒催乳湯可以明顯提高產(chǎn)后缺乳母鼠的催乳素水平，這一推斷需要進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)來進(jìn)行驗(yàn)證。

4 結(jié)論

本研究中的催乳湯顯著提高了產(chǎn)后缺乳母鼠的泌乳量和仔鼠凈重量，明顯恢復(fù)了產(chǎn)后缺乳母鼠的萎縮乳腺結(jié)構(gòu)，能夠明顯恢復(fù)產(chǎn)后缺乳母鼠的乳腺功能和結(jié)構(gòu)，能夠用于產(chǎn)后缺乳證的治療。

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