乙型肝炎病毒DNA定量與乙型肝炎五項(xiàng)結(jié)果的對(duì)比分析

鄭金菊+劉珊+王榮

[摘要] 目的 探討乙型肝炎病毒DNA定量與乙型肝炎五項(xiàng)的相關(guān)性。 方法 分別用微粒子化學(xué)發(fā)光法和熒光定量PCR法檢測(cè)645例患者的乙型肝炎五項(xiàng)和乙型肝炎病毒DNA含量，并分析兩者的關(guān)系。 結(jié)果 HBsAg、HBeAg、HBcAb陽(yáng)性組的乙型肝炎病毒DNA陽(yáng)性率和DNA定量均顯著高于其他組（P＜0.05）。HBeAg陽(yáng)性組乙型肝炎病毒DNA陽(yáng)性率為93.4%，HBeAg陰性組乙型肝炎病毒DNA陽(yáng)性率為42.8%；HBsAg陽(yáng)性組乙型肝炎病毒DNA陽(yáng)性率為65.3%，HBsAg陰性組乙型肝炎病毒DNA陽(yáng)性率為7.4%。 結(jié)論 乙型肝炎病毒DNA與HBeAg呈正相關(guān)，部分HBsAg陰性患者也能檢出乙型肝炎病毒DNA，乙型肝炎病毒DNA與乙型肝炎五項(xiàng)聯(lián)合檢測(cè)能更好地監(jiān)測(cè)乙型肝炎病毒的復(fù)制情況，對(duì)監(jiān)測(cè)療效和判斷預(yù)后有重要價(jià)值。

[關(guān)鍵詞] 乙型肝炎病毒DNA；乙型肝炎五項(xiàng)；分析

[中圖分類號(hào)] R512.6[文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A[文章編號(hào)] 1674-4721（2014）03（c）-0096-03

Comparision analysis of HBV-DNA and five items in patient with hepatitis B

ZHENG Jin-ju1 LIU Shan1 WANG Rong2

1.Department of Laboratory,Central Hospital of Qingdao City,Qingdao266042,China;2.Tumor Hospital of Qingdao City,Qingdao266042,China

[Abstract] Objective To investigate the correlation between HBV-DNA and HBV five makers.Methods Chemiluminescent microparticles immunoassay analysis method and fluorogenic quantitative PCR method was used to detect the HBV serological markers and HBV-DNA in 645 patients with hepatitis B respectively,and then correlation between HBV-DNA and HBV five makers was analyzed.Results HBV-DNA positive rate and HBV-DNA content in HBsAg,HBeAg and HBcAb positive group was high than that in other groups respectively(P＜0.05).HBV-DNA positive rate in HBeAg positive group was 93.4%,HBV-DNA positive rate in HBeAg negative group was 42.8%.HBV-DNA positive rate in HBsAg positive group was 93.4%,HBV-DNA positive rate in HBsAg negative group was 42.8%.Conclusion HBV-DNA is positively correlated with HBeAg.HBV-DNA can be detected in part of HBsAg negative patients.Combined detection of HBV-DNA and HBV five makers can effectively monitor HBV replication,it has important value in monitoring curative effect and judging prognosis.

[Key words] HBV-DNA;HBV five makers;Analysis

乙型病毒性肝炎是由乙型肝炎病毒感染引起的一種疾病，已成為嚴(yán)重威脅人類健康的世界性疾病。目前乙型肝炎的病原學(xué)診斷指標(biāo)主要有乙型肝炎五項(xiàng)（俗稱兩對(duì)半）和乙型肝炎病毒DNA定量，乙型肝炎五項(xiàng)能反映機(jī)體對(duì)乙型肝炎病毒免疫應(yīng)答的情況，但不能反映血清中病毒復(fù)制活躍與否，不能監(jiān)測(cè)病毒載量的變化。乙型肝炎病毒DNA定量能準(zhǔn)確反映血清中病毒復(fù)制的活動(dòng)性，是乙型肝炎病毒存在、活動(dòng)性復(fù)制及具有傳染性的可靠指標(biāo)[1-3]。本文對(duì)本院收治的645例乙型肝炎病毒感染者進(jìn)行乙型肝炎五項(xiàng)檢測(cè)和乙型肝炎病毒DNA定量檢測(cè)，并分析其相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1 一般資料

2013年1～11月到本院就診的645例乙型肝炎病毒感染者，男382例，其中門診152例，住院230例，女263例，其中門診120例，住院143例；年齡13～85歲，平均（46.6±14.7）歲。

1.2 方法

檢測(cè)者抽取靜脈血后分別送至免疫室和PCR室，3000 r/min，離心10 min，分離血清，分別進(jìn)行乙型肝炎五項(xiàng)檢測(cè)和乙型肝炎病毒DNA定量檢測(cè)。乙型肝炎五項(xiàng)采用微粒子化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)，乙型肝炎病毒DNA采用熒光定量PCR法進(jìn)行檢測(cè)，以copies/ml格式報(bào)告，當(dāng)結(jié)果＜5×102 copies/ml時(shí)直接報(bào)告為＜最低檢出限，嚴(yán)格按照標(biāo)準(zhǔn)操作程序進(jìn)行。

1.3 試劑與儀器

乙型肝炎五項(xiàng)試劑：美國(guó)雅培公司；儀器：雅培i2000全自動(dòng)微粒子化學(xué)發(fā)光免疫分析儀，美國(guó)雅培公司。乙型肝炎病毒DNA定量試劑：乙型肝炎病毒核酸定量檢測(cè)試劑盒（PCR-熒光探針法），中山大學(xué)達(dá)安基因股份有限公司；儀器：Mx 3000P熒光定量PCR儀，美國(guó)安捷倫科技有限公司。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析和處理，計(jì)量資料以x±s表示，采用方差分析，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 不同乙型肝炎五項(xiàng)模式乙型肝炎病毒DNA陽(yáng)性率和乙型肝炎病毒DNA定量的比較

HBsAg、HBeAg、HBcAb陽(yáng)性組的乙型肝炎病毒DNA陽(yáng)性率和乙型肝炎病毒DNA定量均顯著高于其他組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）（表1）。

表1不同乙型肝炎五項(xiàng)模式乙型肝炎病毒DNA陽(yáng)性率

和乙型肝炎病毒DNA定量的比較

2.2 HBsAg和HBeAg的乙型肝炎病毒DNA陽(yáng)性情況

HBsAg陽(yáng)性組乙型肝炎病毒DNA陽(yáng)性率為65.3%（359/550），HBeAg陽(yáng)性組乙型肝炎病毒DNA陽(yáng)性率為93.4%（197/211），兩組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。

3 討論

乙型肝炎病毒是與人類關(guān)系密切的嗜肝DNA病毒，是病毒性肝炎的主要病原體之一[4-5]。目前乙型肝炎病毒的病原學(xué)檢測(cè)指標(biāo)主要有乙型肝炎免疫學(xué)標(biāo)志物和乙型肝炎病毒DNA定量。乙型肝炎五項(xiàng)是反映乙型肝炎病毒感染后機(jī)體免疫應(yīng)答情況的指標(biāo)，主要包括HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb[6]。本研究顯示，HBsAg、HBeAg、HBcAb陽(yáng)性患者乙型肝炎病毒DNA陽(yáng)性率高達(dá)93.4%，顯著高于其他組，DNA含量也高于其他組，表明大三陽(yáng)患者體內(nèi)乙型肝炎病毒復(fù)制活躍，病毒載量高，傳染性強(qiáng)，大三陽(yáng)組有6.6%的患者乙型肝炎病毒DNA陰性，可能是病毒基因S區(qū)發(fā)生有意義的點(diǎn)突變或插入、缺失突變[7]，導(dǎo)致現(xiàn)用的熒光定量PCR試劑無(wú)法檢測(cè)出乙型肝炎病毒DNA；HBsAg、HBeAb、HBcAb陽(yáng)性患者乙型肝炎病毒DNA陽(yáng)性率為55.4%，低于大三陽(yáng)組，但乙型肝炎病毒DNA含量仍然較高，表明小三陽(yáng)患者體內(nèi)HBeAg雖然轉(zhuǎn)陰，但并不表示病毒復(fù)制停止，仍具有傳染性，與相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道一致[8]。

endprint

乙型肝炎病毒感染后HBsAg是第一個(gè)出現(xiàn)的血清學(xué)標(biāo)志物[9]，HBsAg陽(yáng)性可見于急性肝炎、慢性肝炎或無(wú)癥狀攜帶者。本研究顯示，HBsAg陽(yáng)性組乙型肝炎病毒DNA陽(yáng)性率為65.3%，顯著低于HBeAg陽(yáng)性組，表明HBsAg并不能作為乙型肝炎病毒復(fù)制的標(biāo)志；陰性組乙型肝炎病毒DNA陽(yáng)性率為7.4%，表明HBsAg陰性患者仍可能存在乙型肝炎病毒復(fù)制；HBeAg陽(yáng)性組乙型肝炎病毒DNA陽(yáng)性率高達(dá)93.4%，表明乙型肝炎病毒復(fù)制與HBeAg呈顯著正相關(guān)，主要因?yàn)镠BeAg是乙型肝炎病毒基因前C或C區(qū)的mRNA表達(dá)[10]，與乙型肝炎病毒的活動(dòng)性關(guān)系密切，但陰性并不能排除乙型肝炎病毒復(fù)制，HBeAg陰性組乙型肝炎病毒DNA陽(yáng)性率為42.8%，可能與乙型肝炎病毒基因突變有關(guān)，突變后HBeAg表達(dá)減弱，甚至消失，但病毒仍在復(fù)制。

對(duì)于乙型肝炎病毒感染者如果只檢測(cè)乙型肝炎五項(xiàng)容易造成漏診及延誤治療，要準(zhǔn)確了解乙型肝炎患者病毒復(fù)制情況有必要同時(shí)檢測(cè)乙型肝炎病毒DNA定量，乙型肝炎病毒DNA是診斷乙型肝炎病毒感染最直接的指標(biāo)，檢測(cè)乙型肝炎病毒DNA對(duì)于了解乙型肝炎患者的傳染性大小、正確判斷抗病毒的療效及預(yù)后意義重大[4，11]。本研究所用的熒光定量PCR法通過PCR反應(yīng)，使極微量的DNA在體外呈百萬(wàn)倍擴(kuò)增，極大地提高了檢測(cè)敏感性。乙型肝炎五項(xiàng)與乙型肝炎病毒DNA定量同時(shí)檢測(cè)才能正確判斷病情及預(yù)后，更好地監(jiān)測(cè)乙型肝炎病毒的復(fù)制情況、觀察病情的變化、判斷病毒載量的大小及監(jiān)測(cè)抗病毒的療效，為臨床診斷及抗病毒治療提供重要依據(jù)。

[參考文獻(xiàn)]

[1]馮伯友.乙型肝炎病毒前S1抗原與乙肝DNA定量聯(lián)合檢測(cè)的臨床應(yīng)用[J].中國(guó)誤診學(xué)雜志，2012，12（10）：4562.

[2]李銳成，王敏娟，馬燕粉，等.HBV-DNA定量檢測(cè)應(yīng)用中的幾個(gè)理解誤區(qū)[J].現(xiàn)代檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2011，26（5）：32.

[3]朱子犁，古麗巴哈爾，劉建軍，等.乙型肝炎HBV DNA熒光定量檢測(cè)與血清標(biāo)志物結(jié)果相關(guān)性分析[J].中國(guó)熱帶醫(yī)學(xué)，2006，6（7）：1138-1139.

[4]郭永成，周開真.748例乙肝DNA檢測(cè)結(jié)果分析[J].中國(guó)社區(qū)醫(yī)師，2008，10（198）：172.

[5]李志方，吳曉蔓.乙型肝炎血清標(biāo)志物與HBV DNA的相關(guān)性分析[J].中國(guó)熱帶醫(yī)學(xué)，2006，6（6）：1027-1028.

[6]呂世琪，張金良，閆奇.乙肝五項(xiàng)指標(biāo)與熒光定量PCR檢測(cè)血清HBV-DNA含量聯(lián)合運(yùn)用[J].實(shí)驗(yàn)與檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)，2011，29（6）：641-642.

[7]何印蕾.乙型肝炎患者血清前S1抗原檢測(cè)及其臨床價(jià)值[J].右江醫(yī)學(xué)，2005，33（2）：154-155.

[8]張代春.乙型肝炎病毒血清學(xué)標(biāo)志物與乙肝DNA相關(guān)性探討[J].臨床和實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2008，7（11）：82-83.

[9]劉文利.乙型肝炎“兩對(duì)半”檢測(cè)與乙肝DNA濃度的相關(guān)性探討[J].中國(guó)社區(qū)醫(yī)師，2007，9（165）：102.

[10]陳俊，余斐斐，傅愛清，等.HBeAg定量陽(yáng)性檢測(cè)結(jié)果的臨床意義[J].現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志，2007，16（21）：3068-3069.

[11]石伍華，王海清，許艾明，等.熒光定量PCR檢測(cè)HBV-DNA與ELISA方法測(cè)定乙肝五項(xiàng)指標(biāo)相關(guān)性分析[J].臨床和實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2009，8（1）：87-88.

（收稿日期：2014-02-13本文編輯：李亞聰）

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乙型肝炎病毒感染后HBsAg是第一個(gè)出現(xiàn)的血清學(xué)標(biāo)志物[9]，HBsAg陽(yáng)性可見于急性肝炎、慢性肝炎或無(wú)癥狀攜帶者。本研究顯示，HBsAg陽(yáng)性組乙型肝炎病毒DNA陽(yáng)性率為65.3%，顯著低于HBeAg陽(yáng)性組，表明HBsAg并不能作為乙型肝炎病毒復(fù)制的標(biāo)志；陰性組乙型肝炎病毒DNA陽(yáng)性率為7.4%，表明HBsAg陰性患者仍可能存在乙型肝炎病毒復(fù)制；HBeAg陽(yáng)性組乙型肝炎病毒DNA陽(yáng)性率高達(dá)93.4%，表明乙型肝炎病毒復(fù)制與HBeAg呈顯著正相關(guān)，主要因?yàn)镠BeAg是乙型肝炎病毒基因前C或C區(qū)的mRNA表達(dá)[10]，與乙型肝炎病毒的活動(dòng)性關(guān)系密切，但陰性并不能排除乙型肝炎病毒復(fù)制，HBeAg陰性組乙型肝炎病毒DNA陽(yáng)性率為42.8%，可能與乙型肝炎病毒基因突變有關(guān)，突變后HBeAg表達(dá)減弱，甚至消失，但病毒仍在復(fù)制。

對(duì)于乙型肝炎病毒感染者如果只檢測(cè)乙型肝炎五項(xiàng)容易造成漏診及延誤治療，要準(zhǔn)確了解乙型肝炎患者病毒復(fù)制情況有必要同時(shí)檢測(cè)乙型肝炎病毒DNA定量，乙型肝炎病毒DNA是診斷乙型肝炎病毒感染最直接的指標(biāo)，檢測(cè)乙型肝炎病毒DNA對(duì)于了解乙型肝炎患者的傳染性大小、正確判斷抗病毒的療效及預(yù)后意義重大[4，11]。本研究所用的熒光定量PCR法通過PCR反應(yīng)，使極微量的DNA在體外呈百萬(wàn)倍擴(kuò)增，極大地提高了檢測(cè)敏感性。乙型肝炎五項(xiàng)與乙型肝炎病毒DNA定量同時(shí)檢測(cè)才能正確判斷病情及預(yù)后，更好地監(jiān)測(cè)乙型肝炎病毒的復(fù)制情況、觀察病情的變化、判斷病毒載量的大小及監(jiān)測(cè)抗病毒的療效，為臨床診斷及抗病毒治療提供重要依據(jù)。

[參考文獻(xiàn)]

[1]馮伯友.乙型肝炎病毒前S1抗原與乙肝DNA定量聯(lián)合檢測(cè)的臨床應(yīng)用[J].中國(guó)誤診學(xué)雜志，2012，12（10）：4562.

[2]李銳成，王敏娟，馬燕粉，等.HBV-DNA定量檢測(cè)應(yīng)用中的幾個(gè)理解誤區(qū)[J].現(xiàn)代檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2011，26（5）：32.

[3]朱子犁，古麗巴哈爾，劉建軍，等.乙型肝炎HBV DNA熒光定量檢測(cè)與血清標(biāo)志物結(jié)果相關(guān)性分析[J].中國(guó)熱帶醫(yī)學(xué)，2006，6（7）：1138-1139.

[4]郭永成，周開真.748例乙肝DNA檢測(cè)結(jié)果分析[J].中國(guó)社區(qū)醫(yī)師，2008，10（198）：172.

[5]李志方，吳曉蔓.乙型肝炎血清標(biāo)志物與HBV DNA的相關(guān)性分析[J].中國(guó)熱帶醫(yī)學(xué)，2006，6（6）：1027-1028.

[6]呂世琪，張金良，閆奇.乙肝五項(xiàng)指標(biāo)與熒光定量PCR檢測(cè)血清HBV-DNA含量聯(lián)合運(yùn)用[J].實(shí)驗(yàn)與檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)，2011，29（6）：641-642.

[7]何印蕾.乙型肝炎患者血清前S1抗原檢測(cè)及其臨床價(jià)值[J].右江醫(yī)學(xué)，2005，33（2）：154-155.

[8]張代春.乙型肝炎病毒血清學(xué)標(biāo)志物與乙肝DNA相關(guān)性探討[J].臨床和實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2008，7（11）：82-83.

[9]劉文利.乙型肝炎“兩對(duì)半”檢測(cè)與乙肝DNA濃度的相關(guān)性探討[J].中國(guó)社區(qū)醫(yī)師，2007，9（165）：102.

[10]陳俊，余斐斐，傅愛清，等.HBeAg定量陽(yáng)性檢測(cè)結(jié)果的臨床意義[J].現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志，2007，16（21）：3068-3069.

[11]石伍華，王海清，許艾明，等.熒光定量PCR檢測(cè)HBV-DNA與ELISA方法測(cè)定乙肝五項(xiàng)指標(biāo)相關(guān)性分析[J].臨床和實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2009，8（1）：87-88.

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對(duì)于乙型肝炎病毒感染者如果只檢測(cè)乙型肝炎五項(xiàng)容易造成漏診及延誤治療，要準(zhǔn)確了解乙型肝炎患者病毒復(fù)制情況有必要同時(shí)檢測(cè)乙型肝炎病毒DNA定量，乙型肝炎病毒DNA是診斷乙型肝炎病毒感染最直接的指標(biāo)，檢測(cè)乙型肝炎病毒DNA對(duì)于了解乙型肝炎患者的傳染性大小、正確判斷抗病毒的療效及預(yù)后意義重大[4，11]。本研究所用的熒光定量PCR法通過PCR反應(yīng)，使極微量的DNA在體外呈百萬(wàn)倍擴(kuò)增，極大地提高了檢測(cè)敏感性。乙型肝炎五項(xiàng)與乙型肝炎病毒DNA定量同時(shí)檢測(cè)才能正確判斷病情及預(yù)后，更好地監(jiān)測(cè)乙型肝炎病毒的復(fù)制情況、觀察病情的變化、判斷病毒載量的大小及監(jiān)測(cè)抗病毒的療效，為臨床診斷及抗病毒治療提供重要依據(jù)。

[參考文獻(xiàn)]

[1]馮伯友.乙型肝炎病毒前S1抗原與乙肝DNA定量聯(lián)合檢測(cè)的臨床應(yīng)用[J].中國(guó)誤診學(xué)雜志，2012，12（10）：4562.

[2]李銳成，王敏娟，馬燕粉，等.HBV-DNA定量檢測(cè)應(yīng)用中的幾個(gè)理解誤區(qū)[J].現(xiàn)代檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2011，26（5）：32.

[3]朱子犁，古麗巴哈爾，劉建軍，等.乙型肝炎HBV DNA熒光定量檢測(cè)與血清標(biāo)志物結(jié)果相關(guān)性分析[J].中國(guó)熱帶醫(yī)學(xué)，2006，6（7）：1138-1139.

[4]郭永成，周開真.748例乙肝DNA檢測(cè)結(jié)果分析[J].中國(guó)社區(qū)醫(yī)師，2008，10（198）：172.

[5]李志方，吳曉蔓.乙型肝炎血清標(biāo)志物與HBV DNA的相關(guān)性分析[J].中國(guó)熱帶醫(yī)學(xué)，2006，6（6）：1027-1028.

[6]呂世琪，張金良，閆奇.乙肝五項(xiàng)指標(biāo)與熒光定量PCR檢測(cè)血清HBV-DNA含量聯(lián)合運(yùn)用[J].實(shí)驗(yàn)與檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)，2011，29（6）：641-642.

[7]何印蕾.乙型肝炎患者血清前S1抗原檢測(cè)及其臨床價(jià)值[J].右江醫(yī)學(xué)，2005，33（2）：154-155.

[8]張代春.乙型肝炎病毒血清學(xué)標(biāo)志物與乙肝DNA相關(guān)性探討[J].臨床和實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2008，7（11）：82-83.

[9]劉文利.乙型肝炎“兩對(duì)半”檢測(cè)與乙肝DNA濃度的相關(guān)性探討[J].中國(guó)社區(qū)醫(yī)師，2007，9（165）：102.

[10]陳俊，余斐斐，傅愛清，等.HBeAg定量陽(yáng)性檢測(cè)結(jié)果的臨床意義[J].現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志，2007，16（21）：3068-3069.

[11]石伍華，王海清，許艾明，等.熒光定量PCR檢測(cè)HBV-DNA與ELISA方法測(cè)定乙肝五項(xiàng)指標(biāo)相關(guān)性分析[J].臨床和實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2009，8（1）：87-88.

（收稿日期：2014-02-13本文編輯：李亞聰）

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