微藻光密度與細胞密度及生物質(zhì)的關系

梁 芳，鴨 喬，杜偉春，溫曉斌，耿亞洪，李夜光,*

(1. 中國科學院武漢植物園植物種質(zhì)創(chuàng)新與特色農(nóng)業(yè)重點實驗室，武漢 430074；2. 中國科學院大學，北京 100049 3. 云南施普瑞生物工程有限公司，昆明 650106)

微藻光密度與細胞密度及生物質(zhì)的關系

梁 芳1,2，鴨 喬3，杜偉春3，溫曉斌1,2，耿亞洪1，李夜光1,*

(1. 中國科學院武漢植物園植物種質(zhì)創(chuàng)新與特色農(nóng)業(yè)重點實驗室，武漢 430074；2. 中國科學院大學，北京 100049 3. 云南施普瑞生物工程有限公司，昆明 650106)

以四種常見微藻，小球藻(Chlorellasp. XQ- 20044)、柵藻(Scenedesmussp. SS- 200716)、綠球藻(Chlorococcumsp.)和螺旋藻(Spirulinasp. CH- 164)為實驗材料，用梯度稀釋法測定對數(shù)生長期不同濃度藻液的光密度(OD)、細胞密度和生物質(zhì)干重(DW)，在光自養(yǎng)分批培養(yǎng)模式下對4種微藻進行OD-波長(350—800 nm)掃描，同時測定細胞密度和生物質(zhì)干重，分析藻液OD與細胞密度、生物質(zhì)干重的關系。結果表明：在任何波長下，對數(shù)生長期的4種微藻細胞密度與OD值、生物質(zhì)干重與OD值的變化都不成比例，波長不同其擬合曲線偏離直線的程度不同。但是，在435 nm處這種關系最接近直線，可以用直線方程近似描述(R2> 0.98)，其它波長處細胞密度-OD、干重-OD的關系都可以用二項式方程很好地描述(R2> 0.99)。因此，光密度法適用于連續(xù)和半連續(xù)培養(yǎng)，可以用435 nm處測得的OD值計算細胞密度與干重。但是在分批培養(yǎng)模式下，4種微藻DW/OD比值隨著培養(yǎng)時間均逐漸上升。小球藻DW/OD540為0.19—0.44 g/L，柵藻DW/OD540為0.36—0.53 g/L，綠球藻DW/OD540為0.48—0.75 g/L，螺旋藻DW/OD560為0.46—0.74 g/L，因此分批培養(yǎng)模式下采用測定藻液OD值反映細胞密度和生物質(zhì)的方法不適用，只有直接測定細胞密度和生物質(zhì)才是準確的。研究結果為正確使用分光光度法監(jiān)測微藻生長提供依據(jù)。

微藻;光密度;細胞密度;干重

微藻是一種遍布全球水體的低等浮游植物，是水體中原初生產(chǎn)力的主要組成部分，由于富含蛋白質(zhì)、人體必需氨基酸、高不飽和脂肪酸、色素及多種生物活性物質(zhì)，而成為現(xiàn)代社會食品、醫(yī)藥、飼料和燃料等的重要來源。目前，世界上商業(yè)化生產(chǎn)的微藻主要有螺旋藻(Spirulina)、小球藻(Chlorella)、紅球藻(Haematococcus)和杜氏藻(Dunaliella)等[1- 4]。螺旋藻具有增強人體免疫力、抗疲勞、改善消化系統(tǒng)功能等作用，因而作為保健食品和藥品被大規(guī)模生產(chǎn)[5]。小球藻含有高達50%的粗蛋白和人體必需氨基酸，既是一種優(yōu)良的保健品，也被用做珍貴動物的餌料添加劑[6]。成熟的紅球藻孢子中蝦青素(Astaxanthin)含量可高達1%—3%，蝦青素是一種類胡蘿卜素，具有超強的抗氧化活性，可作為保健品和高檔化妝品的有效成分，也是三文魚等珍貴水產(chǎn)品養(yǎng)殖必不可少的飼料添加劑[7]。杜氏藻含有大量的β-胡蘿卜素和甘油，前者是維生素A的前體物質(zhì)，也是一種天然抗氧化劑，后者是重要的有機化工原料[8]。

在微藻的培養(yǎng)過程中，無論是室內(nèi)的研究還是室外的大規(guī)模養(yǎng)殖，都需要不斷地檢測其生長狀況，掌握細胞密度和生物質(zhì)的變化。細胞密度可以通過細胞計數(shù)的方法測定[9]，生物質(zhì)可以通過稱重法測定[10- 11]。由于細胞計數(shù)法和稱重法操作都比較繁瑣、耗時耗力，目前無論在微藻研究的實驗室還是生產(chǎn)工廠，都普遍采用一種便捷、省時的方法—利用分光光度計測定藻液光密度(OD)來間接反映細胞密度和生物質(zhì)干重[12- 13]。光密度法也廣泛應用于微生物生長的測定[14- 15]。測定光密度采用的波長依微藻種類的不同而異，主要有500、540、560、680、730 nm和750 nm，甚至對于同一種微藻也使用幾種不同的測定波長。不少文獻描述微藻的干重或細胞密度與光密度成直線關系：Hsieh和Fan等報道了小球藻的干重與藻液OD值呈直線關系[16- 17]。沈萍萍研究了15種微藻，結果顯示在680 nm處細胞密度與藻液OD值呈直線關系[18]。黃美玲的報道顯示，在OD680<0.5時，小球藻的干重與藻液OD值呈直線關系，細胞密度與OD也呈直線關系[13]。Liu等報道了小球藻在500 nm處的OD與細胞密度呈直線關系[9]。但是，也有不同的報道：劉學銘等研究了分批異養(yǎng)培養(yǎng)過程中小球藻在540 nm處的光密度值與干重的關系，結果表明干重與OD的比值受培養(yǎng)條件和培養(yǎng)過程的影響很大，DW/OD先升后降，變化范圍0.53—0.28[19]。

研究發(fā)現(xiàn)，在多數(shù)微藻培養(yǎng)后期，藻液OD值達到基本穩(wěn)定時，生物質(zhì)(干重)持續(xù)增長，同時細胞密度卻在下降或基本不變。在此情況下，如果利用OD值的變化表示細胞密度或生物質(zhì)變化就會產(chǎn)生很大誤差。微藻培養(yǎng)過程中，藻液OD變化與細胞密度、生物質(zhì)變化是什么關系，這種關系是否受測定波長的影響？利用分光光度計測定藻液OD值變化間接反映細胞密度和生物質(zhì)干重變化的方法是否適用？其適用性是否受微藻種類和培養(yǎng)模式(分批培養(yǎng)、連續(xù)培養(yǎng)和半連續(xù)培養(yǎng))的影響？為了尋找以上問題的答案，本文選用大小、形態(tài)不同的4種微藻，通過梯度稀釋法測定不同濃度藻液的OD值與細胞密度及生物質(zhì)干重，在分批培養(yǎng)過程中測定4種微藻藻液的可見光吸收光譜，同時測定細胞密度和生物質(zhì)干重，研究光密度與細胞密度、生物質(zhì)的關系。研究結果為正確使用分光光度法監(jiān)測微藻生長提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 藻種

本實驗采用4種微藻：小球藻(Chlorellasp. XQ- 20044)、柵藻(Scenedesmussp. SS- 200716)、綠球藻(Chlorococcumsp.)和螺旋藻(Spirulinasp. CH- 164)，均由中國科學院武漢植物園經(jīng)濟微藻藻種庫提供，四種微藻的形態(tài)分類特征見表1。螺旋藻是多細胞絲狀藍藻，藻體最大；柵藻是多細胞綠藻(藻體通常由4個細胞組成)；綠球藻和小球藻都是單細胞綠藻，小球藻藻體最小。4種藻代表大小、形狀不同的多細胞和單細胞微藻。

表1 微藻的形態(tài)特征

1.2 培養(yǎng)方法

3種綠藻均采用改良的BG- 11培養(yǎng)基[20]，螺旋藻采用Zarrouk培養(yǎng)基，其中NaNO3濃度改為0.1 g/L。本實驗采用通氣培養(yǎng)裝置進行培養(yǎng)，該裝置主要由長方體水槽、300 mL玻璃培養(yǎng)管、側面平行排列的10只40W日光燈管、控溫系統(tǒng)、水循環(huán)系統(tǒng)、充氣系統(tǒng)和CO2供給系統(tǒng)等組成[21]。

取旺盛生長的微藻，3500 r/min離心8 min收集藻細胞，用新鮮培養(yǎng)基清洗后，再次離心收集藻細胞，接種于新鮮培養(yǎng)基中，進行通氣培養(yǎng)。每種微藻接種3個培養(yǎng)管，每管裝200 mL藻液。培養(yǎng)開始后的前24 h光照強度為100 μmol m-2s-1，之后光照強度提高為200 μmol m-2s-1。培養(yǎng)溫度保持為(30±0.5)℃，光暗周期為14/10 h。4種微藻均在培養(yǎng)的第0、2、4、6、7、8天取樣，每次取樣后在培養(yǎng)管外壁準確標出藻液液面位置，下次取樣之前先補加滅菌水至標記處，以補充培養(yǎng)過程中蒸發(fā)掉的水分。每隔24 h向藻液中充入CO2，將螺旋藻藻液的pH降至9.5左右，其它3種綠藻的pH值降至7.0左右。實驗重復兩次。

1.3 藻液OD值測定

取藻液3 mL，用紫外可見分光光度計(UV 5800，上海元析)1 cm光徑比色杯，進行OD-波長掃描。波長范圍350—800 nm，波長間隔為5 nm，獲得不同波長下的OD值。

1.4 藻液細胞密度的測定

細胞計數(shù)：向3種綠藻藻液(每個樣品2 mL)中分別加入Logul固定液0.05 mL，在顯微鏡下用血球細胞計數(shù)板對每個樣品重復計數(shù)3次，計算出細胞密度平均值。當藻液密度過大無法計數(shù)時，可將藻液精確稀釋后進行計數(shù)，乘以稀釋倍數(shù)即得到原藻液細胞密度。小球藻和綠球藻是單細胞微藻，直接計算個體數(shù)；柵藻雖然是多細胞個體，但是在通氣培養(yǎng)條件下分散成單細胞，細胞數(shù)目以單個細胞數(shù)計算。正在分裂的細胞若子細胞清晰可見則均需計數(shù)，螺旋藻不計數(shù)。

1.5 藻液生物質(zhì)干重的測定

準確量取藻液體積，用事先干燥并已稱重的孔徑為0.45 μm的玻璃纖維膜過濾收獲藻細胞，用蒸餾水洗兩次后，放入真空干燥器中干燥至恒重。根據(jù)干藻重量和藻液體積計算出1 L藻液中的生物質(zhì)干重(g/L)。為了減少實驗誤差，培養(yǎng)開始時至少取20 mL藻液，第2、4天取10 mL藻液，第6、7、8天取5 mL藻液。

1.6 對數(shù)生長期藻液OD值、細胞密度和干重的測定及其關系分析

分別取對數(shù)生長期的4種微藻，先用3500 r/min離心8 min濃縮獲得高濃度的藻液(OD680≈2.5)，測定生物質(zhì)干重及細胞數(shù)目。然后再準確地將濃縮藻液進行稀釋，使得到的藻液濃度分別為濃縮藻液濃度的1/2、1/4、1/6、1/8、1/10、1/20，對各個不同濃度的藻液進行OD-波長掃描。根據(jù)濃縮藻液的干重、細胞密度和稀釋倍數(shù)，計算稀釋藻液的干重和細胞密度，分析藻液OD值與細胞密度、干重的關系。

1.7 分批培養(yǎng)過程中藻液OD值、細胞密度和干重的測定及其關系分析

對4種微藻進行分批培養(yǎng)，于培養(yǎng)的第0、2、4、6、7、8天取樣，進行OD-波長掃描、細胞計數(shù)和測定干重，分析藻液OD值與細胞密度、干重的關系。

2 結果與分析

2.1 對數(shù)生長期的藻液光密度與生物質(zhì)干重、細胞密度的關系

以OD值為橫坐標，對應的生物質(zhì)干重為縱坐標作圖(圖1)。各種波長下，4種微藻的干重與OD值都不是直線關系。當波長在435 nm時，可以用直線方程近似描述(R2>0.98)，具有較高的線性擬合度。4種微藻在435 nm處生物質(zhì)干重(y，g/L)與OD值(x)的直線方程如下：

小球藻y=0.1656x(R2=0.9832)

柵藻y=0.1799x(R2=0.9848)

綠球藻y=0.3686x(R2=0.9989)

螺旋藻y=0.3239x(R2=0.9986)

除了435 nm，其它波長下OD值與干重的關系都遠遠偏離直線關系。但是，無論哪種波長下，這種關系都可以很好地用二項式方程描述(R2>0.99)。

三種綠藻細胞密度-OD值曲線圖與干重-OD值曲線圖相同(圖未顯示)。波長435 nm時，細胞密度與OD值的關系接近直線，可以用直線方程近似描述。3種綠藻細胞密度(y，107個/mL)與OD值(x)的直線方程如下：

小球藻y=1.747x(R2=0.9832)

柵藻y=0.8369x(R2=0.9848)

綠球藻y=1.5204x(R2=0.9989)

與干重-OD關系一樣，無論哪種波長下，細胞密度與OD值的關系都可以很好地用二項式方程描述(R2>0.99)。

圖1 不同波長下干重與OD值的關系Fig.1 The relationships between biomass dry weight and optical density at different wavelength

2.2 分批培養(yǎng)過程中藻液OD值、細胞密度及干重的變化

2.2.1 4種微藻藻液吸收光譜

4種微藻分批培養(yǎng)過程中不同培養(yǎng)時間的藻液吸收光譜如圖2所示。觀察對數(shù)生長期(培養(yǎng)第2—4天)藻液的吸收光譜，發(fā)現(xiàn)4種微藻光密度的兩個最大吸收峰都在435—440 nm和670—680 nm處，是微藻細胞內(nèi)所含色素(主要是葉綠素)的兩處最大吸收波長。這兩處的光密度值在培養(yǎng)末期相對降低，不再是最大值，這與生長后期細胞內(nèi)的色素變化有關。在培養(yǎng)后期小球藻的OD值稍有上升，柵藻和螺旋藻基本保持不變或略有下降，綠球藻OD明顯下降。

圖2 4種微藻不同培養(yǎng)時間藻液的吸收光譜(曲線左端數(shù)字表示培養(yǎng)時間(d))Fig.2 Optical spectrum of the four microalgae at different culture time (The numbers on the left of curves indicate culture time (d))

2.2.2 4種藻液OD值、細胞密度及干重的變化

利用OD-波長掃描獲得的數(shù)據(jù)及對應的細胞密度和干重，對4種微藻分批培養(yǎng)過程中不同波長下OD值與干重、細胞密度的關系進行作圖分析(圖未顯示)。結果表明分批培養(yǎng)模式下無論哪種波長，OD值與細胞密度、干重都不呈直線關系，也不存在其它有規(guī)律的數(shù)量關系。因此，僅以慣用波長(綠藻為540 nm，螺旋藻560 nm)為例，對4種微藻光自養(yǎng)分批培養(yǎng)過程中藻液OD值、細胞密度和生物質(zhì)干重的變化進行分析(表2)。

小球藻的OD值隨著培養(yǎng)時間不斷增大，第6天進入穩(wěn)定期，第8天達到最大為2.067。柵藻的OD值在培養(yǎng)的前7d不斷增大，第7天達到最大為1.481，第8天基本保持不變。綠球藻和螺旋藻第7天OD值達到最大，分別為1.944和1.995，第8天稍有下降。

小球藻在接種48h后細胞密度約增加了4.4倍，之后增加較緩慢。到培養(yǎng)結束時，增加到接種時的5.6倍。柵藻在接種48h后細胞密度增加了1.8倍，第6天達到最大值，為接種時的3.3倍，第8天細胞密度下降14%。綠球藻在接種后第4天細胞密度進入穩(wěn)定期，比接種時增加了1.4倍，之后增加緩慢，第8天細胞密度下降6%。

小球藻在前4d干重急劇增加，接種48h后干重增加了2.5倍，從第6天開始增加較緩慢，到培養(yǎng)結束時生物量增加了8.7倍。柵藻在培養(yǎng)的第2天干重增加1.8倍，之后持續(xù)增加到接種時的4.6倍。綠球藻在前6d生物質(zhì)增加較快，之后減慢，到第8天生物量增加了5倍。螺旋藻在接種2d后生物質(zhì)增加3.5倍，從第6天開始基本不再增加，到培養(yǎng)結束時生物量增加了5.6倍。

2.2.3 藻液OD值與干重、細胞密度的關系

以第0、2、4、6、7、8天測得的OD值為橫坐標，作OD與細胞密度、干重的關系曲線(圖3)。在分批培養(yǎng)的前期和中期，3種綠藻的OD值、細胞密度和干重以及螺旋藻的OD值與干重都呈現(xiàn)一種增長的趨勢，但是在培養(yǎng)后期，OD值、細胞密度和干重的變化趨勢不一致。干重都保持增長，而柵藻和綠球藻的細胞密度均有不同程度的下降，OD值則有各種變化：維持不變，稍有增長或稍有下降。3種綠藻在培養(yǎng)過程中DW/OD比值均逐漸上升，小球藻DW/OD比值范圍為0.19—0.44 g/L，柵藻為0.36—0.53 g/L，綠球藻為0.48—0.75 g/L?？梢?，對于同一種微藻，隨著培養(yǎng)時間DW/OD不斷增大；對于不同種微藻，細胞越大，DW/OD比值越大。螺旋藻在分批培養(yǎng)過程中，DW/OD為0.46—0.74 g/L。

表2 分批培養(yǎng)過程中OD值、細胞密度和干重的變化

圖3 4種微藻干重、細胞密度與光密度的關系Fig.3 The relationships between biomass dry weight, cell density and optical density of microalgaOD540：在波長為540 nm下藻液的光密度值；OD560：在波長為560 nm下藻液的光密度值

3 討論

分光光度計的工作原理是朗伯-比爾定律，即物質(zhì)在一定波長處的光密度與物質(zhì)的濃度和光程呈正比。微藻藻液是由培養(yǎng)基和懸浮于其中的藻細胞組成，是一種懸濁液，不僅對入射光有吸收，還有反射、折射和散射[22]，不符合朗伯-比爾定律成立的條件。因此，利用分光光度計測定藻液的光密度，無論哪種波長，藻液OD值與細胞密度，OD值與生物質(zhì)干重都不是嚴格地按比例變化。

光密度法用于細胞濃度的測定最初應用于細菌的生長中，在一定濃度范圍內(nèi)，細菌濃度與光密度成正比，此時可以用光密度來表征生長量。早在1949年Monod就提出用光密度法測定細菌的生物量，該法較其它方法簡便易行且有效[23]。后來，此方法除了用于細菌及單細胞微生物外，在微藻的培養(yǎng)中也得到廣泛應用。但是，細胞懸濁液對光的吸收除了直接與生物量或細胞密度有關，還與細胞的大小、形狀及折射率有關。當細胞形態(tài)及組成發(fā)生改變時，對光的吸收特性也會隨之改變。由于在最大吸收峰處的信號最靈敏，因而此處的波長被廣泛用來測定光密度。但是對于含有細胞色素的微藻而言，色素本身還具有吸光性，當細胞內(nèi)色素含量發(fā)生變化時，就會干擾結果的測定，使測量值與實際值產(chǎn)生較大誤差[24- 25]。在分批培養(yǎng)條件下，微藻細胞色素含量占細胞干重的比例變化范圍為0.5%—5.5%，利用標準曲線得到的生物量干重與實際測得值在680 nm處誤差為9%—18%，在750 nm處為5%—13%。因此Griffiths指出，當細胞內(nèi)色素含量發(fā)生改變時光密度法是不準確的[24]。

圖1顯示，梯度稀釋實驗中在波長435 nm處干重與OD值的關系最接近直線(OD值范圍0.1—2.7)。對于其它波長，只有在藻液濃度很小的范圍內(nèi)，干重與OD值才接近直線關系。這與已有的一些報道相似，如郝聚敏報道蛋白核小球藻在680 nm處OD在0.07—0.12時，細胞濃度與OD呈直線關系，OD在0.04—0.4時，單位干重與OD呈直線關系；鈍頂螺旋藻在560 nm處OD在0.1—0.3時，干重與OD呈直線關系[26]。王英娟報道蛋白核小球藻在517 nm處OD在0.05—0.54之間，干重與OD呈直線關系[12]。這些報道中藻液的OD值都很低，其適用性受到很大的限制。

梯度稀釋實驗使用的是對數(shù)生長期的藻液，其特征是細胞處于旺盛的分裂生長狀態(tài)，細胞狀態(tài)和形態(tài)基本一致。只有在這種情況下，干重、細胞密度與在435 nm處測得的OD的關系可以用直線方程描述。連續(xù)或半連續(xù)模式下培養(yǎng)微藻，藻細胞快速分裂增殖，細胞的狀態(tài)和形態(tài)也基本一致，可以在435 nm處測定光密度，利用比例關系簡便、快捷地反映細胞密度和生物質(zhì)變化。如果使用其它測定波長，就必須先建立干重-OD值和細胞密度-OD值的回歸方程(非直線方程)。需要指出，對于非直線回歸方程，當藻液經(jīng)過稀釋后，必須先根據(jù)稀釋后測得的OD值計算稀釋藻液的細胞密度或干重，然后乘以稀釋倍數(shù)計算原藻液的細胞密度或干重，而不能根據(jù)稀釋后藻液的OD值和稀釋倍數(shù)計算原藻液的OD值，然后再利用回歸方程計算原藻液的細胞密度或干重。

分批培養(yǎng)過程中，細胞經(jīng)歷了旺盛增殖期和衰老期，細胞形態(tài)、大小處于不斷變化中。無論哪種測定波長，4種微藻DW/OD的比值均隨著培養(yǎng)時間不斷變化(表2)。藻液OD值與細胞密度、生物質(zhì)干重之間不存在有規(guī)律的數(shù)量關系，不能用回歸方程描述。所以，在分批培養(yǎng)模式下，測定藻液OD值反映細胞密度和生物質(zhì)的方法不適用，只有直接測定的細胞密度和生物質(zhì)才是準確的。用OD值繪制生長曲線，在穩(wěn)定期以前，可以反映細胞密度或生物質(zhì)變化的趨勢，進入穩(wěn)定期后，生長曲線不能反映細胞密度或生物質(zhì)的變化。劉學銘等研究了分批異養(yǎng)培養(yǎng)過程中小球藻光密度與干重的關系，結果表明DW/OD的比值先升后降，變化范圍0.53—0.28[19]?？梢?，測定藻液OD值反映細胞密度和生物質(zhì)的方法不僅不適用于光合自養(yǎng)分批培養(yǎng)，也不適用于異養(yǎng)分批培養(yǎng)。

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The relationships between optical density, cell number, and biomass of four microalgae

LIANG Fang1,2, YA Qiao3, DU Weichun3, WEN Xiaobin1,2, GENG Yahong1, LI Yeguang1,*

1KeyLaboratoryofPlantGermplasmEnhancementandSpecialityAgriculture,WuhanBotanicalGarden,ChineseAcademyofSciences,Wuhan430074,China2UniversityofChineseAcademyofSciences,Beijing100049,China3YunnanSpirinBiotechnologyCO.Ltd,Kunming650106,China

To establish spectrophotometry as a method for estimating cell number and biomass of microalgal cultures, the relationships between optical density (OD), cell number, and dry weight (DW) were investigated for four familiar algae,Chlorellasp. XQ- 20044,Scenedesmussp. SS- 200716,Chlorococcumsp. andSpirulinasp. CH- 164. Algal suspensions with different cell concentrations were obtained by serial dilution of cultures in exponential growth, and their ODs determined by scanning at wavelengths from 350 nm to 800 nm. The cell numbers were determined by cell counting, and biomass (as DW) was determined by weighing. Further, the ODs of the autotrophic batch cultures were scanned during the growth process, and correlated with cell numbers and DWs of the same samples. The results were as follows: for the four microalgae, cell numbers and biomass-dry weight did not change linearly with the changes in OD at all the wavelengths examined. However, the relationships could be approximately described by a linear regression equation (R2> 0.98) at 435 nm, and were well described by binomial regression equations (R2> 0.99) at other wavelengths. In continuous and semi-continuous cultures, the OD at 435 nm was suitable for estimating cell number and biomass; however, in autotrophic batch cultures an increase of the DW to OD ratio was observed during culture growth for all four algae. The ratio (DW/OD) was 0.19 to 0.44 g/L forChlorella, 0.36 to 0.53 g/L forScenedesmus, 0.48 to 0.75 g/L forChlorococcumand 0.46 to 0.74 g/L forSpirulina. Thus, spectrophotometry was not suitable for estimating biomass-DW in batch culture. This study should help guide the proper application of spectrophotometry in microalgae culture.

microalgae; optical density; cell number; biomass dry weight

國家“863”項目(2013AA065805); 國家自然科學基金(31272680); 國家科技部科技基礎性工作專項(2012FY112900)

2013- 01- 31; 網(wǎng)絡出版日期:2014- 03- 13

10.5846/stxb201301310207

*通訊作者Corresponding author.E-mail: yeguang@wbgcas.cn

梁芳，鴨喬，杜偉春，溫曉斌，耿亞洪，李夜光.微藻光密度與細胞密度及生物質(zhì)的關系.生態(tài)學報,2014,34(21):6156- 6163.

Liang F, Ya Q, Du W C, Wen X B, Geng Y H, Li Y G.The relationships between optical density, cell number, and biomass of four microalgae.Acta Ecologica Sinica,2014,34(21):6156- 6163.