布地奈德對鼻息肉中核因子κB和堿性成纖維細(xì)胞生長因子表達(dá)的影響

朱華斌，張建華，劉仲娟，徐穎，丁俊杰，蔣燕飛，鄭逸品

（江蘇大學(xué)附屬上海第八醫(yī)院耳鼻咽喉科，上海200235）

布地奈德對鼻息肉中核因子κB和堿性成纖維細(xì)胞生長因子表達(dá)的影響

朱華斌，張建華*，劉仲娟，徐穎，丁俊杰，蔣燕飛，鄭逸品

（江蘇大學(xué)附屬上海第八醫(yī)院耳鼻咽喉科，上海200235）

目的：觀察布地奈德鼻腔霧化治療對鼻息肉中核因子κB（NF-κB）和堿性成纖維細(xì)胞生長因子（bFGF）表達(dá)的影響。方法：對40例鼻息肉患者行布地奈德鼻腔霧化治療，并以10例正常中鼻甲組織作為對照，應(yīng)用免疫組化的方法檢測鼻息肉中NF-κB和b-FGF的表達(dá)。結(jié)果：經(jīng)布地奈德治療后鼻息肉中NF-κB和b-FGF的表達(dá)較治療前明顯降低（P＜0.05），且二者呈顯著的正相關(guān)性（r＝0.53，P＜0.01）。結(jié)論：布地奈德鼻腔霧化治療鼻息肉可下調(diào)NF-κB和b-FGF的表達(dá)。

鼻息肉；布地奈德；核因子κB；堿性成纖維細(xì)胞生長因子

目前認(rèn)為鼻息肉是多環(huán)節(jié)多途徑引起的炎癥性病變，其形成與炎癥反應(yīng)密切相關(guān)。核因子κB（nuclear factor kappa-B，NF-κB）是一種核轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子，對多種細(xì)胞因子和炎癥介質(zhì)具有調(diào)節(jié)功能，是炎癥反應(yīng)途徑中的重要介質(zhì)。堿性成纖維細(xì)胞生長因子（basic fibroblast growth factor，b-FGF）具有促進(jìn)細(xì)胞的增殖分化作用和促血管生成及參與細(xì)胞外基質(zhì)形成等作用，且作為較強(qiáng)的NF-κB激活劑，可促進(jìn)炎癥的發(fā)生發(fā)展。本研究通過布地奈德鼻腔霧化治療鼻息肉，觀察鼻息肉中NF-κB和b-FGF蛋白的表達(dá)變化，來探討鼻息肉局部治療的可行性。

1 對象與方法

1.1 對象

選取40例鼻息肉患者為治療組，年齡27～59歲，平均（39±12）歲，按慢性鼻竇炎、鼻息肉的分型、分期標(biāo)準(zhǔn)［1］，均為Ⅱ型1－3期。治療組予布地奈德（阿斯利康公司）混懸液1 mg，2次／d鼻腔霧化治療，共7 d。治療組40例患者在治療前及治療后各取鼻息肉組織做標(biāo)本，對照組10例正常中鼻甲標(biāo)本在鼻中隔手術(shù)同期取得。要求入選病例均無變應(yīng)性鼻炎、哮喘等變應(yīng)性疾病史，且前1個(gè)月內(nèi)未使用過糖皮質(zhì)激素和抗組胺藥及無上呼吸道感染病史。

1.2 方法

所有標(biāo)本用4%低聚甲醛固定，石蠟包埋、切片，并常規(guī)行HE染色。采用Envision二步法（丹麥Dako公司）行免疫組化染色，兔抗人NF-κB抗體和b-FGF抗體（武漢博士德生物工程有限公司）工作濃度為1∶100，DAB顯色。同時(shí)，PBS取代一抗作陰性對照，以排除非特異性的染色。

在光學(xué)顯微鏡下觀察，若細(xì)胞質(zhì)和（或）細(xì)胞核內(nèi)出現(xiàn)清晰的顆粒狀棕黃色物質(zhì)即為NF-κB、b-FGF蛋白陽性細(xì)胞。對每一張免疫組化切片的陽性染色區(qū)域隨機(jī)選取5個(gè)視野（10×40倍），采用高分辨率圖像分析儀自動(dòng)檢測陽性區(qū)域的光密度值，將5個(gè)值平均后，即為該片NF-κB、b-FGF的參考值。以上實(shí)驗(yàn)操作，在不知切片分組的情況下均請一位病理科主治醫(yī)師重新操作。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

所測實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，布地奈德治療前后的NF-κB和b-FGF表達(dá)強(qiáng)度差異采用配對t檢驗(yàn)，NF-κB和b-FGF的相關(guān)性用Pearson相關(guān)分析。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 鼻息肉中NF-κB和b-FGF蛋白的表達(dá)情況

治療組鼻息肉中NF-κB蛋白的免疫組化染色表達(dá)強(qiáng)度較對照組（1.09±1.07）明顯增強(qiáng)，b-FGF蛋白的表達(dá)也較對照組（0.51±0.43）明顯增強(qiáng)。且經(jīng)布地奈德治療后NF-κB、b-FGF的表達(dá)強(qiáng)度均較治療前明顯減少（P＜0.01）。見表1。

表1 治療組鼻息肉中NF-κB和b-FGF蛋白的表達(dá)

2.2 鼻息肉中NF-κB和b-FGF蛋白的免疫組化結(jié)果

在鼻息肉黏膜上皮細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞、腺上皮細(xì)胞及間質(zhì)中散在的炎癥細(xì)胞的胞質(zhì)和細(xì)胞核內(nèi)有NF-κB蛋白的陽性表達(dá)，其中以細(xì)胞質(zhì)內(nèi)的表達(dá)為顯著。經(jīng)布地奈德鼻腔霧化治療后NF-κB蛋白的表達(dá)減少。見圖1。

在鼻息肉黏膜上皮細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞、腺上皮細(xì)胞及間質(zhì)中散在的炎癥細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)有b-FGF蛋白的陽性表達(dá)。經(jīng)布地奈德霧化治療后b-FGF蛋白的表達(dá)減少。見圖2。

圖1 鼻息肉中NF-κB的表達(dá)（DAB染色10×20）

圖2 鼻息肉中b-FGF的表達(dá)（DAB染色10×20）

2.3 鼻息肉中NF-κB和b-FGF蛋白表達(dá)的相關(guān)性

經(jīng)Pearson相關(guān)分析，鼻息肉中NF-κB和b-FGF蛋白的表達(dá)呈顯著正相關(guān)（r＝0.53，P＜0.01）。

3 討論

近年研究表明，鼻息肉的發(fā)生發(fā)展過程與炎癥密切相關(guān)，有多種重要的細(xì)胞因子參與。而NF-κB是介導(dǎo)細(xì)胞內(nèi)信號傳遞的重要核轉(zhuǎn)錄因子，在炎癥和免疫反應(yīng)中起到中樞作用。NF-κB被激活時(shí)進(jìn)入核內(nèi)，與DNA上特異的啟動(dòng)位點(diǎn)結(jié)合促進(jìn)細(xì)胞因子轉(zhuǎn)錄，其活化可引起大量炎癥介質(zhì)分泌，參與和調(diào)節(jié)多種炎癥蛋白基因的表達(dá)［2］，形成炎癥級聯(lián)反應(yīng)，并持續(xù)增強(qiáng)。國內(nèi)外的研究表明，NF-κB在鼻息肉組織中呈陽性表達(dá)［3］，NF-κB通過調(diào)控IL-1、IL-2、IL-8、IL-10、TNF-α、NO等細(xì)胞因子的轉(zhuǎn)錄而作用于鼻息肉形成過程的級聯(lián)炎癥反應(yīng)，促進(jìn)鼻息肉的發(fā)生發(fā)展［4－5］。目前認(rèn)為糖皮質(zhì)激素是治療鼻息肉的有效藥物［6－7］，其抗炎能力主要是抑制NF-κB和促炎基因DNA的結(jié)合，或增加合成IκB，使NF-κB激活的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑被阻斷，最終減少鼻黏膜中多種炎性細(xì)胞的數(shù)量，并抑制炎癥細(xì)胞因子的表達(dá)。而布地奈德是一種新型的非鹵化糖皮質(zhì)激素，具有高受體結(jié)合力和較強(qiáng)的抗炎作用。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，鼻息肉組織中NF-κB蛋白有較強(qiáng)的表達(dá)，主要位于鼻息肉上皮細(xì)胞、腺上皮細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞和炎癥細(xì)胞的胞質(zhì)和胞核中，以胞質(zhì)中表達(dá)更強(qiáng)，明顯高于正常中鼻甲組織的表達(dá)，且經(jīng)布地奈德鼻腔霧化治療后可減輕其表達(dá)強(qiáng)度。這提示鼻息肉的炎癥反應(yīng)中，轉(zhuǎn)錄因子NF-κB的激活可能是一個(gè)中心環(huán)節(jié)，其激活可介導(dǎo)炎癥介質(zhì)的釋放和活化，形成炎癥級聯(lián)反應(yīng)，使得炎癥的損傷持續(xù)放大，導(dǎo)致鼻息肉的發(fā)生發(fā)展。但可通過布地奈德來抑制NF-κB蛋白的活性，以減少炎癥介質(zhì)的產(chǎn)生，達(dá)到治療鼻息肉的目的。

b-FGF是一種多效能的細(xì)胞生長因子，具有促進(jìn)細(xì)胞的增殖、分化、黏附作用和促血管生成及參與細(xì)胞外基質(zhì)形成等作用。Powers等［8］在鼻息肉組織中檢測到b-FGF mRNA，并且發(fā)現(xiàn)在鼻息肉上皮細(xì)胞層基底膜存在b-FGF強(qiáng)免疫染色，提示b-FGF在鼻息肉組織中促進(jìn)了內(nèi)皮細(xì)胞及上皮細(xì)胞的增殖分化。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，鼻息肉組織中的b-FGF蛋白較正常中鼻甲組織的表達(dá)明顯增強(qiáng)，且布地奈德鼻腔霧化治療可減輕其表達(dá)強(qiáng)度。實(shí)驗(yàn)結(jié)果同時(shí)發(fā)現(xiàn)，鼻息肉中b-FGF和NF-κB的表達(dá)具有明顯的正相關(guān)性（r＝0.53，P＜0.01）。這表明鼻息肉組織中的NF-κB對b-FGF活化具有一定的正作用。

本研究結(jié)果顯示，布地奈德鼻腔霧化治療鼻息肉，可抑制鼻息肉中NF-κB和b-FGF蛋白的表達(dá)，同時(shí)可起到清理鼻腔的作用，并可減輕糖皮質(zhì)激素全身使用所引起的不良反應(yīng)［9］，是一種可行的鼻息肉局部治療的措施。

［1］中華耳鼻咽喉科雜志編輯委員會(huì).慢性鼻竇炎、鼻息肉臨床分型、分期及內(nèi)窺鏡鼻竇手術(shù)療效評定標(biāo)準(zhǔn)［J］.中華耳鼻咽喉科雜志，1998，33（3）：134.

［2］Hayden MS，Ghosh S.Signaling to NF-κB［J］.Genes Dev，2004，18（18）：2195－2224.

［3］Valera FC，Queiroz R，Scrideli C，et al.Expression of transcription factors NF-κB and AP-1 in nasal polyposis［J］.Clin Exp Allergy，2008，38（4）：579－585.

［4］Takeno S，Hirakawa K，Ueda T，et al.Nuclear factor kappa B activation in the nasal polyp epithelium：relationship to local cytokine gene expression［J］.Laryngoscope，2002，112（1）：53－58.

［5］Fr?czek M，Rostkowska-Nadolska B，KapralM，etal.Microarray analysis of NF-κB-dependent genes in chronic rhinosinusitis with nasal polyps［J］.Adv Clin Exp Med，2013，22（2）：209－217.

［6］Mygind N，Andersson M.Topical glucocorticosteroids in rhinitis：clinical aspects［J］.Acta Otolaryngol，2006，126（10）：1022－1029.

［7］Valera F，Brassesco MS，Castro-Gamero AM，et al.In vitro effect of glucocorticoids on nasal polyps［J］.Braz J Otorhinolaryngol，2011，77（5）：605－610.

［8］Powers MR，Qu Z，LaGesse PC，et al.Expression of basic fibroblast growth factor in nasal polyps［J］.Ann Otol Rhinol Laryngol，1998，107（10 Pt1）：891－897.

［9］Bhalla RK，Payton K，Wright ED.Safety of budesonide in saline sinonasal irrigations in themanagementof chronic rhinosinusitis with polyposis：lack of significant adrenal suppression［J］.JOtolaryngol Head Neck Surg，2008，37（6）：821－825.

R765.25

B

1671－7783（2014）04－0366－03

10.13312／j.issn.1671-7783.y140069

*：通訊作者，E-mail：hndxzhjh＠sina.com

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2014－03－12 ［編輯］何承志