維生素K對去卵巢大鼠肝氧化應(yīng)激及炎癥因子的影響

潘春芳，徐三榮

（1.江蘇大學(xué)臨床醫(yī)學(xué)院，江蘇鎮(zhèn)江212013；2.金壇市中醫(yī)醫(yī)院婦產(chǎn)科，江蘇金壇213200；3.江蘇大學(xué)附屬醫(yī)院普外科，江蘇鎮(zhèn)江212001）

維生素K對去卵巢大鼠肝氧化應(yīng)激及炎癥因子的影響

潘春芳1，2，徐三榮3

（1.江蘇大學(xué)臨床醫(yī)學(xué)院，江蘇鎮(zhèn)江212013；2.金壇市中醫(yī)醫(yī)院婦產(chǎn)科，江蘇金壇213200；3.江蘇大學(xué)附屬醫(yī)院普外科，江蘇鎮(zhèn)江212001）

目的：探討補(bǔ)充維生素K對去卵巢大鼠肝氧化應(yīng)激及炎癥的影響。方法：以去卵巢SD大鼠作為圍絕經(jīng)期模型，比較維生素K補(bǔ)充與不補(bǔ)充對肝組織丙二醛，超氧化物歧化酶（SOD），還原型谷胱甘肽（GSH）等氧化應(yīng)激指標(biāo)以及腫瘤壞死因子α（TNF-α）和白介素6（IL-6）的影響。將30只6月齡雌性SD大鼠隨機(jī)分為3組，每組均為10只，即假手術(shù)組，去卵巢組以及去卵巢后補(bǔ)充維生素K組（維生素K組）。術(shù)后1周開始分組給藥，維生素K組將維生素K混于丙三醇中每日灌胃，而假手術(shù)組和去卵巢組每日給予丙三醇灌胃。90 d后，取肝組織測定丙二醛，SOD，GSH；冰凍切片行蘇木素-伊紅（HE）與活性氧（ROS）熒光染色；免疫印跡檢測TNF-α和IL-6的表達(dá)。結(jié)果：維生素K組肝組織丙二醛水平較去卵巢組明顯降低，但明顯高于假手術(shù)組（P均＜0.05）。維生素K組肝組織SOD，GSH水平均較去卵巢組明顯降低（P＜0.05），與假手術(shù)組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。形態(tài)學(xué)檢測表明維生素K組肝細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)小空泡數(shù)目明顯少于去卵巢組，而假手術(shù)組則未見空泡；維生素K組肝細(xì)胞內(nèi)活性氧熒光強(qiáng)度明顯低于去卵巢組，與假手術(shù)組相近。免疫印跡結(jié)果表明維生素K組肝內(nèi)TNF-α與IL-6表達(dá)水平均介于去卵巢組和假手術(shù)組之間；去卵巢組兩種因子水平明顯高于假手術(shù)組。結(jié)論：去卵巢大鼠肝組織處于較高的氧化應(yīng)激狀態(tài)，并伴有促炎因子表達(dá)增高，這種改變能在一定程度上被維生素K緩解。

維生素K；去卵巢；肝；氧化應(yīng)激；白介素6；腫瘤壞死因子α

絕經(jīng)后卵巢功能下降常伴有肝內(nèi)氧化應(yīng)激水平增高和促炎因子的增加［1］。氧化應(yīng)激水平增高主要由脂質(zhì)過氧化物產(chǎn)生增加和（或）抗氧化物減少所致，嚴(yán)重時(shí)會(huì)引起肝細(xì)胞損傷。肝內(nèi)促炎因子的增高如腫瘤壞死因子α（TNF-α）和白介素6（IL-6）也可能會(huì)損傷肝細(xì)胞［2］。這些改變與絕經(jīng)后雌激素水平降低密切相關(guān)。故絕經(jīng)后補(bǔ)充雌激素能緩解絕經(jīng)帶來的肝氧化損傷，但雌激素替代療法易增加乳腺癌和其他婦科腫瘤的發(fā)病率［3］。維生素K的結(jié)構(gòu)與雌激素有相近之處。雖然其經(jīng)典效應(yīng)主要為參與凝血，但最近的研究表明維生素K不僅能改善絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松的癥狀，而且具有較強(qiáng)的抗氧化能力，能夠降低氧化應(yīng)激對細(xì)胞的損傷［4－5］。我們以6月齡大鼠去卵巢模型模擬絕經(jīng)，觀察肝內(nèi)氧化應(yīng)激水平與炎癥因子的表達(dá)，同時(shí)觀察維生素K補(bǔ)充對這些改變的干預(yù)效果。由于維生素K1有著較強(qiáng)的抗氧化能力，故本實(shí)驗(yàn)主要研究維生素K1的干預(yù)效果。

1 材料和方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

6月齡健康雌性SPF級SD大鼠30只，體質(zhì)量（350±20）g，由江蘇大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物給予分籠飼養(yǎng)，在（24±2）℃，12 h晝夜條件下，給予顆粒飼料喂養(yǎng)。

1.2 試劑及儀器

維生素K1和2-硫代巴比妥酸（TBA）購自Sigma公司（批號(hào)：V3501，T5500），超氧化物歧化酶（SOD，WST法）與還原型谷胱甘肽（GSH）測定試劑盒購自南京建成生物工程研究所?；钚匝跞旧噭┖匈徸陨虾＝苊阑蜥t(yī)藥科技有限公司。RIPA裂解液購自加拿大Fermentas公司。IL-6，TNF-α抗體購自武漢博士德生物工程有限公司，β-肌動(dòng)蛋白抗體及HRP耦聯(lián)二抗購自美國Santa Cruz公司，PVDF膜及化學(xué)發(fā)光劑購自德國Millipore公司。BCA蛋白測定試劑盒購自美國Thermo公司。μQuant酶標(biāo)儀購自美國BioTek公司，冰凍切片機(jī)及熒光顯微影像系統(tǒng)購自德國萊卡公司，電泳儀購自美國Bio-Rad公司，凝膠成像系統(tǒng)購自北京賽智創(chuàng)業(yè)科技有限公司。

1.3 動(dòng)物分組及造模

實(shí)驗(yàn)按照隨機(jī)區(qū)組設(shè)計(jì)。大鼠編號(hào)后以隨機(jī)數(shù)字表法分成3組，分別為假手術(shù)組，卵巢切除組（去卵巢組）及卵巢切除補(bǔ)充維生素K1組（維生素K組），每組各10只。去卵巢組和維生素K組大鼠按如下操作進(jìn)行手術(shù)。戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉，仰臥位固定，腹部備皮消毒；腹正中線作切口，切開肌肉，找到兩側(cè)輸卵管，依次切除末端卵巢；結(jié)扎出血處，縫合各層組織結(jié)構(gòu)，縫合腹腔。假手術(shù)組大鼠操作與此一致，只是僅僅切除卵巢周圍的一小塊脂肪組織后止血，縫合腹腔。術(shù)后3 d注射青霉素以預(yù)防感染。維生素K組術(shù)后1周開始補(bǔ)充維生素K1。具體方法是將維生素K1溶于甘油中，每日以20 mg／kg的劑量灌胃，每周末稱重調(diào)整下周維生素K1補(bǔ)給量。去卵巢組與假手術(shù)組則給予相近劑量的甘油灌胃。飼養(yǎng)90 d后，處死大鼠，以PBS從門靜脈灌洗肝臟后分離凍存于超低溫冰箱內(nèi)待用。

1.4 肝臟丙二醛，SOD及GSH的測定

以超聲法制備10%肝組織勻漿，以500×g轉(zhuǎn)速離心除沉淀，取上清進(jìn)行測定。丙二醛測定采用TBA法：將三氯乙酸沉淀蛋白后加入1%TBA，95℃水浴80 min，冷卻后應(yīng)用酶標(biāo)儀測定532 nm處的光密度值。SOD與GSH的測定按照試劑盒說明書進(jìn)行。采用BCA法測定蛋白濃度。丙二醛，SOD與GSH測定結(jié)果均以蛋白濃度進(jìn)行校正。

1.5 肝臟蘇木素-伊紅染色及活性氧熒光染色

取各組大鼠肝組織進(jìn)行冰凍切片（8μm）以備染色。分別以蘇木素和伊紅（HE）滴染切片，梯度濃度乙醇脫水，二甲苯透明后以中性樹膠封片。同時(shí)對冰凍切片進(jìn)行活性氧熒光染色，原理為2′，7′-二乙酰二氯熒光素（DCFH-DA）在胞內(nèi)能被分解為無熒光的DCFH，而DCFH能被活性氧氧化成發(fā)綠色熒光的DCF。具體操作步驟按試劑盒進(jìn)行。染色后的切片置于萊卡顯微鏡分別以普通光和熒光進(jìn)行攝影和記錄。

1.6 蛋白質(zhì)印跡法檢測肝組織IL-6和TNF-α的表達(dá)

RIPA裂解液制備10%的肝組織勻漿，加入上樣緩沖液，100℃加熱5 min使蛋白變性。制備10%的分離膠和5%的積層膠，電泳，轉(zhuǎn)膜，脫脂奶粉封閉1 h，以一抗孵育過夜，洗膜，HRP耦聯(lián)的二抗孵育1 h，洗膜，涂加發(fā)光劑，于凝膠成像系統(tǒng)上進(jìn)行曝光，記錄結(jié)果。每組取6只大鼠的肝臟進(jìn)行免疫印跡檢測，曝光結(jié)果使用成像系統(tǒng)自帶軟件進(jìn)行灰度分析以便統(tǒng)計(jì)。所用的一抗包括兔抗大鼠IL-6，TNF-α（稀釋比例均為1∶300），小鼠抗大鼠β-肌動(dòng)蛋白（1∶3000）。二抗為HRP耦聯(lián)的羊抗兔及羊抗小鼠抗體（1∶10 000）。

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

應(yīng)用SPSS 16.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，測定結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)誤表示。先進(jìn)行方差齊性檢驗(yàn)和單因素方差分析，然后以LSD-t法兩兩比較組間差異，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 補(bǔ)充維生素K對去卵巢大鼠肝臟丙二醛，SOD以及GSH的影響

與假手術(shù)組比較，去卵巢組大鼠肝內(nèi)丙二醛明顯升高（t＝4.768，P＜0.01），而SOD和GSH明顯降低（t＝2.739，P＜0.05；t＝2.523，P＜0.05）。假手術(shù)組與維生素K組相比，上述3項(xiàng)氧化應(yīng)激指標(biāo)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（丙二醛、SOD以及GSH的t值分別為1.341，0.484，0.155，P均大于0.05）。與去卵巢組比較，維生素K組大鼠肝組織丙二醛明顯降低（t＝3.427，P＜0.01），而SOD與GSH均明顯升高（t＝2.255，P＜0.05；t＝2.678，P＜0.05）。見圖1。

圖1 3組大鼠肝組織丙二醛，SOD及GSH水平比較

3.2 補(bǔ)充維生素K對卵巢切除大鼠肝組織形態(tài)及活性氧含量的影響

HE染色表明，與假手術(shù)組比較，去卵巢組肝細(xì)胞的胞質(zhì)內(nèi)存在較多5μm左右的空泡，而維生素K組空泡數(shù)明顯減少。各組肝細(xì)胞的形態(tài)和排列未見明顯差別。活性氧染色可見去卵巢組中熒光彌散地分布在肝細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)，細(xì)胞核呈黑色空洞狀，位于細(xì)胞中央。假手術(shù)組和維生素K組的熒光都極弱。因此，去卵巢組肝細(xì)胞內(nèi)熒光強(qiáng)度明顯高于其他兩組，而維生素K組和假手術(shù)組之間差異不明顯。見圖2。

圖2 各組肝組織病理形態(tài)的變化（HE染色與活性氧熒光染色）

3.3 維生素K對去卵巢大鼠肝組織IL-6和TNF-α表達(dá)的影響

蛋白質(zhì)印跡結(jié)果顯示，肝內(nèi)IL-6的表達(dá)水平從高到低依次為去卵巢組，維生素K組，假手術(shù)組。TNF-α表達(dá)水平的高低次序與此一致，只是各組間差異小于IL-6間的差異。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析表明，去卵巢組肝內(nèi)TNF-α和IL-6的表達(dá)明顯高于維生素K組和假手術(shù)組（與維生素K組比較，IL-6：t＝3.946，P＜0.01，TNF-α：t＝2.219，P＜0.05；與假手術(shù)組比較，IL-6：t＝4.500，P＜0.01，TNF-α：t＝3.159，P＜ 0.01）。而IL-6和TNF-α在維生素K組與假手術(shù)組之間的差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（IL-6：t＝0.554，TNF-α：t＝0.940，P均大于0.05）。見圖3。

圖3 各組大鼠肝組織中IL-6和TNF-α的表達(dá)水平

4 討論

研究證實(shí)卵巢切除會(huì)打破大鼠肝臟中抗氧化-氧化系統(tǒng)的平衡［6］，主要表現(xiàn)為肝勻漿中丙二醛升高，GSH降低。丙二醛是脂質(zhì)過氧化的終產(chǎn)物，可反映組織內(nèi)脂質(zhì)過氧化程度，因而成為衡量細(xì)胞自由基損傷程度的常用指標(biāo)［7］。GSH是非酶類抗氧化劑的代表性物質(zhì)，其他的還包括抗壞血酸，生育酚等。本研究結(jié)果也證實(shí)了卵巢切除后3個(gè)月，大鼠肝臟內(nèi)丙二醛升高，GSH降低。而關(guān)于肝內(nèi)酶類抗氧化系統(tǒng)特別是SOD在卵巢切除后的變化則存在不同的研究結(jié)果。Konyalioglu等［8］研究表明，卵巢切除5周后大鼠肝內(nèi)SOD水平上升。而另一些研究結(jié)果顯示，卵巢切除則會(huì)降低大鼠肝內(nèi)SOD水平［9－10］。我們的研究結(jié)果與后者一致，這可能是由于本實(shí)驗(yàn)在卵巢切除后第97天才分離檢測肝臟SOD水平。因?yàn)槁殉睬谐蟾蝺?nèi)氧化因子和抗氧化因子會(huì)出現(xiàn)波動(dòng)性變化，很可能早期出現(xiàn)一定程度的代償，而晚期才出現(xiàn)降低［6］。

維生素K與雌激素都屬脂類激素，主要參與凝血過程。近年來，維生素K在改善絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松等方面的潛力已成為一個(gè)研究熱點(diǎn)，這提示維生素K與雌激素的生理功能間可能存在交集。另一方面，維生素K能夠通過抑制12脂氧化酶的激活對抗少突膠質(zhì)細(xì)胞中由花生四烯酸引起的氧化損傷［11］。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)還證實(shí)，補(bǔ)充維生素K能夠降低老齡雌性大鼠的認(rèn)知缺陷［12］。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，維生素K同樣能夠降低卵巢切除大鼠肝內(nèi)氧化應(yīng)激水平，具體表現(xiàn)在大鼠肝內(nèi)丙二醛降低，而SOD和GSH均升高。維生素K的這種肝內(nèi)抗氧化效應(yīng)可能也與12脂氧化酶有關(guān)，詳細(xì)的機(jī)制尚需進(jìn)一步的研究。

活性氧是指細(xì)胞在代謝過程中由氧化還原反應(yīng)產(chǎn)生的、并在分子組成上含氧的一類化學(xué)性質(zhì)極其活潑的物質(zhì)總稱，氧自由基是其中最重要的一類。氧自由基包括超氧陰離子、羥自由基、單線態(tài)氧等能使無熒光的染料氧化成有熒光的物質(zhì)［13］。本實(shí)驗(yàn)表明，卵巢切除后肝內(nèi)活性氧水平異常升高，彌散分布在胞質(zhì)內(nèi)，而維生素K則能使之降低到正常水平?；钚匝跻着c膜內(nèi)各種脂質(zhì)發(fā)生過氧化反應(yīng)形成以丙二醛為代表的脂質(zhì)過氧化物，進(jìn)一步驗(yàn)證了卵巢切除后肝內(nèi)氧化應(yīng)激水平的升高及維生素K的保護(hù)作用。

肝內(nèi)氧化應(yīng)激與活性氧的升高常伴有TNF-α等炎癥因子的增多，從而進(jìn)一步加重肝細(xì)胞損傷［14］。24月齡大鼠卵巢切除后，肝內(nèi)TNF-α，IL-6，iNOS，HO-1等多種炎癥因子顯著升高［15］。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明6月齡雌性大鼠卵巢切除后，肝內(nèi)炎癥因子同樣也顯著升高，而這種升高能被補(bǔ)充維生素K部分性地抑制。故維生素K具有抑制炎癥反應(yīng)的效應(yīng)，這與之前的報(bào)道一致。維生素K能夠抑制脂多糖誘導(dǎo)的肝內(nèi)炎癥反應(yīng)，此效應(yīng)與TNF-α和IL-6這兩種因子的抑制密切相關(guān)［16］。維生素K還能通過抑制核因子κB來抑制脂多糖誘導(dǎo)的炎癥反應(yīng)［17］。

卵巢切除大鼠肝內(nèi)氧化應(yīng)激、活性氧以及促炎因子水平的升高很可能與雌激素突降導(dǎo)致的非酒精性脂肪肝（NAFLD）有關(guān)［18］。雌激素水平突降使體內(nèi)性激素之間的平衡發(fā)生很大變化，導(dǎo)致總膽固醇、三酰甘油、低密度脂蛋白膽固醇明顯升高，高密度脂蛋白膽固醇急劇降低，造成血液及其他組織器官中脂質(zhì)及其代謝產(chǎn)物的異常而出現(xiàn)脂代謝紊亂，脂肪在體內(nèi)堆積而形成肥胖，增加了高血壓、心血管疾病、2型糖尿病和NAFLD等慢性疾病的風(fēng)險(xiǎn)［19］。肝HE染色顯示去卵巢組肝細(xì)胞內(nèi)存在較多的小空泡，類似于空泡狀變性，提示肝細(xì)胞能量代謝的紊亂。而補(bǔ)充維生素K后大鼠肝細(xì)胞內(nèi)的空泡明顯減少，但并未完全消失，說明維生素K的保護(hù)作用并不完全。此結(jié)果提示脂質(zhì)代謝紊亂可能是卵巢切除大鼠肝氧化應(yīng)激與促炎因子升高的根本原因。而維生素K或許能夠通過部分性地糾正脂質(zhì)代謝紊亂，改善肝臟的狀態(tài)［20］。

綜上，維生素K對抑制絕經(jīng)后肝氧化應(yīng)激具有一定的實(shí)用價(jià)值，但仍需大量基礎(chǔ)及臨床研究來進(jìn)一步確定其機(jī)制和適宜劑量，畢竟過多脂溶性維生素?cái)z入仍存在蓄積中毒的可能性。維生素K與雌激素聯(lián)用是否能夠獲得更高的安全性和更好的效果也需要進(jìn)一步研究。

［1］Sanchez-Rodriguez MA，Zacarias-Flores M，Arronte-Rosales A，et al.Menopause as risk factor for oxidative stress［J］.Menopause，2012，19（3）：361－367.

［2］吳娜，蔡光明，何群.氧化應(yīng)激與肝臟損傷［J］.世界華人消化雜志，2008，16（29）：3310－3315.

［3］Oztekin E，Tiftik AM，Baltaci AK，etal.Lipid peroxida

tion in liver tissue of ovariectomized and pinealectomized rats：effect of estradiol and progesterone supplementation［J］.Cell Biochem Funct，2007，25（4）：401－405.

［4］洪又佳，梁九根.維生素K與骨質(zhì)疏松癥［J］.中國骨質(zhì)疏松雜志，2010，16（7）：525－528.

［5］Li J，Lin JC，Wang H，etal.Novel role of vitamin k in preventing oxidative injury to developing oligodendrocytes and neurons［J］.J Neurosci，2003，23（13）：5816－5826.

［6］Kankofer M，Radzki RP，Bienko M，et al.Anti-oxidative／oxidative status of rat liver after ovariectomy［J］.J Vet Med A Physiol Pathol Clin Med，2007，54（5）：225－229.

［7］王愛梅，李弋，陳亞奇.葛根異黃酮對衰老大鼠卵巢形態(tài)和功能的影響［J］.中國婦幼保健，2011，26（36）：5786－5788.

［8］Konyalioglu S，Durmaz G，Yalcin A.The potential antioxidant effect of raloxifene treatment：a study on heart，liver and brain cortex of ovariectomized female rats［J］.Cell Biochem Funct，2007，25（3）：259－266.

［9］Al-Rejaie SS.Thymoquinone treatment alleviate ovariectomy-induced hepatic oxidative damage in rats［J］.Journal of Applied Pharmaceutical Science，2013，3（6）：126－131.

［10］Ha BJ.Oxidative stress in ovariectomy menopause and role of chondroitin sulfate［J］.Arch Pharm Res，2004，27（8）：867－872.

［11］Li J，Wang H，Rosenberg P A.Vitamin K prevents oxidative cell death by inhibiting activation of 12-lipoxygenase in developing oligodendrocytes［J］.J Neurosci Res，2009，87（9）：1997－2005.

［12］Carrie I，Belanger E，Portoukalian J，et al.Lifelong lowphylloquinone intake is associated with cognitive impairments in old rats［J］.J Nutr，2011，141（8）：1495－1501.

［13］Basaranoglu M，Basaranoglu G，Senturk H.From fatty liver to fibrosis：a tale of＂second hit＂［J］.World JGastroenterol，2013，19（8）：1158－1165.

［14］Kuwata K，Shibutani M，Hayashi H，et al.Concomitant apoptosis and regeneration of liver cells as amechanism of liver-tumor promotion byβ-naphthoflavone involving TNFα-signaling due to oxidative cellular stress in rats［J］.Toxicology，2011，283（1）：8－17.

［15］Kireev RA，Tresguerres AC，Garcia C，et al.Hormonal regulation of pro-inflammatory and lipid peroxidation processes in liver of old ovariectomized female rats［J］.Biogerontology，2010，11（2）：229－243.

［16］Ohsaki Y，Shirakawa H，Hiwatashi K，et al.Vitamin K suppresses lipopolysaccharide-induced inflammation in the rat［J］.Biosci Biotechnol Biochem，2006，70（4）：926－932.

［17］Ohsaki Y，Shirakawa H，Miura A，etal.Vitamin K suppresses the lipopolysaccharide-induced expression of inflammatory cytokines in culturedmacrophage-like cells via the inhibition of the activation of nuclear factor kappaB through the repression of IKKalpha／beta phosphorylation［J］.JNutr Biochem，2010，21（11）：1120－1126.

［18］Lavoie JM，Pighon A.NAFLD，Estrogens，and Physical Exercise：The Animal Model［J］.J Nutr Metab，2012（2011）：914938.

［19］王曉琳，章志建，陸炎，等.雌激素在肝臟糖脂代謝中的作用機(jī)制研究［C］.廣州：中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十一次全國內(nèi)分泌學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議，2012：217－218.

［20］Denisova NA，Booth SL.Vitamin K and sphingolipidmetabolism：evidence to date［J］.Nutr Rev，2005，63（4）：111－121.

Effects of phylloquinone on hepatic oxidative stress and inflammatory factors in ovariectom ized rats

PAN Chun-fang1，2，XU San-rong3

（1.School of ClinicalMedicine，Jiangsu University，Zhenjiang Jiangsu 212013；2.Departmentof Gynaecology and Obstetrics，Jintan Traditional Chinese Medical Hospital，Jintan Jiangsu 213200；3.Departmentof General Surgery，the Affiliated Hospital of Jiangsu University，Zhenjiang Jiangsu 212001，China）

Objective：To observe the effects of phylloquinone supplementation on hepatic oxidative stress and inflammation in ovariectomized rats and to propose a new way to prevent the hepatic impairment associated with menopause.M ethods：Thirty female SD rats of sixmonths agewere randomly divided into 3 groups，sham group（Sham，n＝10），ovariectomy group（OVX，n＝10），phylloquinone supplementation after ovariectomy group（OVX＋VK，n＝10）.One week after operation，phylloquinone or glycerol which served as delivery agent was administrated through gastric lavage to OVK＋VK group or Sham and OVX group respectively for 90 days.After that，the livers were harvested to determine malonaldehyde（MDA），superoxide dismutase（SOD）and glutathione（GSH）levels.Hematoxylin eosin（HE）and reactive oxygen species（ROS）fluorescent staining were performed on hepatic frozen sections.The expressions of IL-6 and TNF-αin the livers were evaluated by Western blotting.Results：The hepatic MDA levels in the OVX＋VK group were significantly lower than those in the OVX group and higher than those in the Sham group（both P＜0.05）.The hepatic SOD and GSH levels in the OVX＋VK group were significantly lower than those in the OVX group，but were not significantly different from those in the Sham group.HE stainingdemonstrated that the small vacuoles in the OVX＋VK group were obviously fewer than those in the OVX group while the livers in Sham group contained no vacuole.The ROS fluorescence in the hepatic sections in the OVX＋VK group wasweaker than that in the OVX group.The results ofWestern blotting demonstrated that the levels of IL-6 and TNF-αin the OVX＋VK group located between the other two groupswhile those in the OVX group were higher than those in the Sham group.Conclusion：The liver of ovariectomized rats was under higher oxidative stress concomitant with higher levels of inflammatory factors as compared with that of normal rats.These changes can be alleviated by phylloquinone supplementation to some extents.

phylloquinone；ovariectomy；liver；oxidative stress；IL-6；TNF-α

R339.22；R458.7

A

1671－7783（2014）01－0031－05

10.13312／j.issn.1671-7783.y130236

潘春芳（1979—），女，江蘇金壇人，主治醫(yī)師，碩士研究生；徐三榮（通訊作者），主任醫(yī)師，碩士生導(dǎo)師，E-mail：1695071511＠qq.com

2013－10－07 ［編輯］陳海林