ACL100全自動(dòng)凝血分析儀PT、APTT實(shí)驗(yàn)室參考區(qū)間的確立

薛 萍 ，江韻琴，方 麗

ACL100全自動(dòng)凝血分析儀PT、APTT實(shí)驗(yàn)室參考區(qū)間的確立

薛 萍 ，江韻琴，方 麗

目的 確立ACL100全自動(dòng)凝血分析儀凝血酶原時(shí)間(PT)和活化部分凝血活酶時(shí)間(APTT)本實(shí)驗(yàn)室的正常參考區(qū)間。方法 篩選50例年齡在18～60歲、經(jīng)問(wèn)卷調(diào)查無(wú)相關(guān)疾病的正常人，空腹采集抗凝血，采用美國(guó)實(shí)驗(yàn)儀器(IL)公司ACL100全自動(dòng)血凝儀進(jìn)行PT和APTT分析，確立本實(shí)驗(yàn)室的PT、APTT正常參考區(qū)間。結(jié)果 PT參考區(qū)間與廠家提供的參考區(qū)間有一定差異，APTT的參考區(qū)間與廠家提供的正常參考區(qū)間一致。結(jié)論 對(duì)于新引進(jìn)的檢測(cè)設(shè)備，各實(shí)驗(yàn)室應(yīng)確立自己的正常參考區(qū)間，不宜盲目采用廠家提供的正常參考區(qū)間。

ACL100全自動(dòng)血凝儀；凝血酶原時(shí)間；活化部分凝血活酶時(shí)間；正常參考值

檢測(cè)系統(tǒng)是指完成一個(gè)檢驗(yàn)項(xiàng)目所涉及的儀器、試劑、校準(zhǔn)品、標(biāo)準(zhǔn)操作程序、質(zhì)量控制程序、保養(yǎng)等的組合，是實(shí)現(xiàn)檢驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確性和可比性的重要手段。臨床實(shí)驗(yàn)室在建立了檢測(cè)系統(tǒng)的同時(shí)，需要驗(yàn)證廠家的參考區(qū)間是否適合本實(shí)驗(yàn)室患者的群體。ACL100全自動(dòng)血凝儀是美國(guó)實(shí)驗(yàn)儀器(IL)公司產(chǎn)品，試劑說(shuō)明書(shū)提供的參考區(qū)間是建立在美國(guó)人群基礎(chǔ)上。鑒于各地區(qū)人群、種族的生理差別及各實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制和規(guī)范管理的差異，本研究對(duì)該設(shè)備廠家建議PT和APTT參考值進(jìn)行了驗(yàn)證，并確立了在本實(shí)驗(yàn)室的正常參考區(qū)間。

1 材料

1.1 儀器與試劑 美國(guó)IL公司ACL100型全自動(dòng)凝血分析儀；美國(guó)IL公司配套試劑：PT超敏檢測(cè)試劑盒(PT-FIB HS PLUS，批號(hào)：N0415612，有效期2014-02)；部分凝血活酶時(shí)間試劑盒(APTT 測(cè)定試劑：批號(hào)：N0716816，有效期2014-04)；美國(guó)IL公司商業(yè)定值質(zhì)控：正常水平質(zhì)控物[Control(Normal)，批號(hào)：N0903582，有效期2014-03]，高水平異常質(zhì)控物[Control(High)，批號(hào)：N0415683，有效期2014-02]。

1.2 標(biāo)本來(lái)源 2013年11月12日，篩選合格的正常健康體檢者(年齡18～60歲，男性28人，女性22人，肝功能正常，無(wú)血液系統(tǒng)疾病及出凝血機(jī)能障礙)50人，早晨空腹靜坐0.5 h，使用109 mmol/L檸檬酸鈉1∶9抗凝的BD真空采血管規(guī)范采血3 ml，立即混勻，3000 r/min離心15 min，取上層乏血小板血漿進(jìn)行檢測(cè)。

2 實(shí)驗(yàn)方法及結(jié)果

按照《全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程(第3版)》對(duì)檢測(cè)系統(tǒng)性能的核實(shí)(驗(yàn)證)要求，對(duì)ACL100全自動(dòng)凝血分析儀進(jìn)行性能驗(yàn)證，包括不精密度和準(zhǔn)確度實(shí)驗(yàn)，合格后按照ACL100全自動(dòng)凝血分析儀操作規(guī)程進(jìn)行受檢血漿樣本分析。

2.1 不精密度分析 根據(jù)NCCLS EP15-A文件要求，取2個(gè)水平的商業(yè)定值質(zhì)控品，重復(fù)檢測(cè)至少20次，計(jì)算CV%和SD值。判斷標(biāo)準(zhǔn)：將美國(guó)國(guó)會(huì)1988年通過(guò)的臨床實(shí)驗(yàn)室修正案(CLIA'88)中規(guī)定的PT、APTT允許誤差(分別為靶值±15%、靶值±15%)的1/4作為臨床不精密度可接受標(biāo)準(zhǔn)，即2個(gè)水平的商業(yè)定值質(zhì)控品PT、APTT不精密度CV≤3.75%(1/4 CLIA'88)為臨床可接受標(biāo)準(zhǔn)。檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表1，不精密度符合判斷標(biāo)準(zhǔn)。

表1 不精密度檢測(cè)結(jié)果(n=20)

2.2 正確度驗(yàn)證 由于PT、APTT沒(méi)有國(guó)際參考方法或參考物質(zhì)，本實(shí)驗(yàn)通過(guò)參加四川省臨檢中心2013年第一次凝血實(shí)驗(yàn)室間質(zhì)量評(píng)比，如果實(shí)驗(yàn)室的檢驗(yàn)結(jié)果與其他實(shí)驗(yàn)室，特別是與權(quán)威實(shí)驗(yàn)室或參比實(shí)驗(yàn)室的結(jié)果具有可比性，那么檢驗(yàn)結(jié)果的可信度就可得到證實(shí)。結(jié)果本實(shí)驗(yàn)室PT、APTT檢測(cè)結(jié)果在省臨檢中心凝血室間質(zhì)量評(píng)比的可接受范圍，通過(guò)正確度驗(yàn)證。

2.3 樣本檢測(cè) 采用該設(shè)備及配套試劑檢測(cè)上述采集的50份血漿樣本，PT結(jié)果分布為10.4～14.6(12.6±1.2)s；APTT結(jié)果分布為25.26～35.06(30.16±2.45)s。各數(shù)據(jù)符合正態(tài)分布，求95%參考區(qū)間的上下限。

PT下限值：平均值-1.96=12.6-1.96×1.2=10.24；上限值：平均值+1.96=12.6+1.96×1.2=14.95≈15；確定本實(shí)驗(yàn)室PT正常參考區(qū)間為10.24～15.00 s。

APTT下限值：平均值-1.96 s=30.16-1.96×2.45=25.35,上限值：平均值+1.96 s=30.16+1.96×2.45=34.96≈35 s；確定本實(shí)驗(yàn)室APTT正常參考區(qū)間為25.35～35.00 s。

2.4 本實(shí)驗(yàn)室正常參考區(qū)間與廠家建議參考區(qū)間比較 從表2可見(jiàn)，本實(shí)驗(yàn)室 PT參考區(qū)間下限10.24 s比廠家提供的11.80 s低1.56 s，APTT參考區(qū)間上限35.0 s比廠家提供的38.4 s低3.4 s，其他與廠家提供的一致。確立本實(shí)驗(yàn)室正常參考區(qū)間為PT 10.24～15.00 s，APTT 25.35～35.00 s，并定期驗(yàn)證。

表2 本實(shí)驗(yàn)室正常參考區(qū)間與廠家建議參考區(qū)間比較

2.5 結(jié)果 通過(guò)本實(shí)驗(yàn)室對(duì)50例正常健康體檢人群血漿標(biāo)本的測(cè)試數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析，PT本實(shí)驗(yàn)室參考區(qū)間下限比廠家建議參考區(qū)間低1.56 s，上限基本一致，是否與人群、種族差異有關(guān)還待考證。由于PT縮短見(jiàn)于先天性因子Ⅴ增多癥、口服避孕藥、高凝狀態(tài)和血栓病等，建議本實(shí)驗(yàn)室使用新確立的PT正常參考區(qū)間10.24～15.00 s，并定期驗(yàn)證。

APTT實(shí)驗(yàn)室正常參考區(qū)間上限比廠家建議參考區(qū)間低3.4 s，下限基本一致。由于APTT待測(cè)者的測(cè)定值較正常對(duì)照值(30.16 s)延長(zhǎng)超過(guò)10 s(即40.16 s)以上才有臨床意義，廠家建議APTT上限為38.4 s，故可使用廠家建議正常參考區(qū)間25.4～38.4 s，并定期驗(yàn)證。

3 討論

在臨床檢驗(yàn)中，PT和APTT是指導(dǎo)臨床溶栓、抗凝治療及保證手術(shù)安全的必要檢查項(xiàng)目，對(duì)凝血機(jī)制相關(guān)疾病的診斷和治療有重要的臨床意義[1]。參考區(qū)間是臨床判別患者凝血功能是否正常的重要依據(jù)，《全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程(第3版)》以及美國(guó)臨床實(shí)驗(yàn)室修正案(CLIA'88)均明確：“實(shí)驗(yàn)室應(yīng)驗(yàn)證廠家的參考區(qū)間是否適合實(shí)驗(yàn)室患者的群體?！?/p>

通過(guò)本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，本實(shí)驗(yàn)室確立的正常參考區(qū)間與廠家建議參考區(qū)間略有差異，分析可能與受檢健康人群區(qū)域生理差別有關(guān)。同時(shí)，在查詢(xún)到的其他文獻(xiàn)中[2-5]，報(bào)道的PT、APTT參考區(qū)間均有差別，這源于不同地區(qū)受檢健康人群、不同的檢測(cè)系統(tǒng)。

由此可見(jiàn)，在引進(jìn)國(guó)外先進(jìn)的檢測(cè)系統(tǒng)同時(shí)，實(shí)驗(yàn)室確立當(dāng)?shù)厝巳旱膮⒖紖^(qū)間，并驗(yàn)證廠家的參考區(qū)間是否適合本實(shí)驗(yàn)室患者的群體是必要，而且是重要的質(zhì)量管理措施之一；是為臨床提供有診斷參考價(jià)值檢測(cè)報(bào)告的重要保證。

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610083 成都，成都軍區(qū)總醫(yī)院健康體檢中心檢驗(yàn)科(薛 萍)，胸外科(江韻琴)；成都軍區(qū)疾病預(yù)防控制中心(方 麗)

方 麗，電話(huà)：028-86598526

R 446.11

A

1004-0188(2014)04-0423-02

10.3969/j.issn.1004-0188.2014.04.030

2014-02-14)