槲皮素對(duì)慢性腎衰大鼠腎臟細(xì)胞的保護(hù)作用研究

王藍(lán)天，王天然

槲皮素對(duì)慢性腎衰大鼠腎臟細(xì)胞的保護(hù)作用研究

王藍(lán)天，王天然

目的 研究中藥成分槲皮素對(duì)慢性腎衰(CRF)大鼠腎臟細(xì)胞損壞的保護(hù)作用。方法 實(shí)驗(yàn)大鼠隨機(jī)分為3組。CRF組和槲皮素治療(QT)組以含腺嘌呤飼料喂飼8 w造成CRF；從第15 d開始分別經(jīng)口給予生理鹽水或槲皮素[100 mg/(kg·d)]，共6 w；正常(NC)組未作干預(yù)。實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，取存活大鼠腎制作病理切片，顯微鏡下觀察計(jì)數(shù)損壞細(xì)胞和浸潤(rùn)細(xì)胞，進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。結(jié)果 NC組腎間質(zhì)僅偶見浸潤(rùn)淋巴細(xì)胞(Lc)和多形核白細(xì)胞(PMN)；CRF組浸潤(rùn)的Lc和PMN數(shù)大量增多；QT組浸潤(rùn)Lc和PMN數(shù)顯著少于CRF組(P﹤0.01)。NC組腎小球和腎間質(zhì)都未見空泡細(xì)胞，偶見破損細(xì)胞；CRF組腎小球及腎間質(zhì)中空泡細(xì)胞和破損細(xì)胞顯著高于NC組(P<0.01)；QT組腎小球及腎間質(zhì)中空泡細(xì)胞和破損細(xì)胞顯著低于CRF組(P<0.01)。結(jié)論 槲皮素對(duì)CRF大鼠腎間質(zhì)炎性細(xì)胞浸潤(rùn)具有顯著抑制作用，同時(shí)可以顯著減少腎小球和腎間質(zhì)實(shí)質(zhì)細(xì)胞損壞。

槲皮素；慢性腎衰；炎性細(xì)胞；腎小球；腎間質(zhì)

槲皮素(quercetin)是一種天然黃酮類化合物，存在于許多藥用植物中，是很重要的中藥有效成分之一。槲皮素具有保護(hù)心臟和血管、止咳祛痰平喘、抵抗血小板聚集、防潰瘍、防癌抗癌、抑制變態(tài)反應(yīng)、抗病毒、防止過(guò)氧化物聚積及抗炎等多方面藥理作用[1-8]。實(shí)驗(yàn)研究觀察到，槲皮素對(duì)大鼠糖尿病腎病具有防治效果[9-10]。筆者研究了槲皮素對(duì)慢性腎衰(CRF)的防治作用[12-14]，現(xiàn)報(bào)告實(shí)驗(yàn)大鼠腎臟病理切片中損壞細(xì)胞和浸潤(rùn)細(xì)胞變化情況。

1 材料與方法

1.1 試劑 槲皮素：系斯威公司產(chǎn)原料藥，為黃色針狀結(jié)晶，純度>99%。給大鼠灌服前用生理鹽水配成均勻混懸液。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物、分組與環(huán)境 雄性SD大鼠購(gòu)自四川抗菌素工業(yè)研究所，清潔級(jí)(合格證號(hào)：2001-23)。實(shí)驗(yàn)開始時(shí)體重130～160 g。隨機(jī)分為正常組、CRF組和槲皮素治療(QT)組；預(yù)實(shí)驗(yàn)中CRF組病死率高達(dá)80%[12]，故該組安排了更多動(dòng)物。實(shí)驗(yàn)環(huán)境：成都利爾藥業(yè)公司動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室(環(huán)境設(shè)施合格證書號(hào)：川實(shí)動(dòng)字第2001-20號(hào))。

1.3 方法[11-12]NC組大鼠8只，正常飼養(yǎng)；CRF組40只，在飼料中加入0.75%腺嘌呤，從第3 w開始灌服生理鹽水0.5 ml，1次/d；QT組10只，與CRF組同樣喂腺嘌呤，從第3 w開始次灌服槲皮素懸液約0.5 ml，劑量100 mg/(kg·d)，1次/d。CRF和QT組其余飼養(yǎng)與NC組相同。實(shí)驗(yàn)期限共8 w。

1.4 觀測(cè)指標(biāo)與方法 第8 w末處死仍存活的實(shí)驗(yàn)鼠，取腎臟稱重，計(jì)算腎臟指數(shù)(單腎重量mg/體重g)；然后取一腎縱向剖開并切取約0.2 mm薄片，以烘干法測(cè)定水分含量(重量百分率)；再切取約1 mm厚片，4%甲醛固定，石蠟包埋切片，HE染色，在高倍鏡下從病理切片中部開始向右側(cè)分別觀察10個(gè)腎小球和10個(gè)高倍視野(HPF)腎間質(zhì)，計(jì)數(shù)浸潤(rùn)細(xì)胞數(shù)和空泡細(xì)胞(僅見細(xì)胞膜或不完整胞膜，無(wú)內(nèi)容物)、破損細(xì)胞(有細(xì)胞核，胞膜不完整，內(nèi)容物稀少)及傷害細(xì)胞(細(xì)胞完整，細(xì)胞核固縮或核質(zhì)疏松，內(nèi)容物基本正常)，并計(jì)算其占腎組織細(xì)胞的百分率。

2 結(jié)果

2.1 實(shí)驗(yàn)鼠大體外觀 (1)NC組外觀活動(dòng)、飲食飲水正常，體重逐漸增大到(243±22)g，全部存活。CRF組從第2 w開始明顯多尿、食量下降、毛色發(fā)黃、弓背；第3 w表現(xiàn)加重，消瘦，眼球顏色變淡；第4 w以上表現(xiàn)更趨加重，反射性排尿逐漸減少；第5 w上述表現(xiàn)進(jìn)一步加重，少尿，開始有死亡；死亡鼠很消瘦，腎腫大且布滿米黃粉狀物，其他內(nèi)臟未見明顯外觀改變；此后，該組癥狀逐步加重，死亡數(shù)增加，腎臟病變更加嚴(yán)重；至第8 w末，40只中僅存9只，病死率77.5%；存活鼠體重(117±14)g。QT組第1～3 w外觀變化與CRF組相似；第4 w(開始治療后2 w)時(shí)，皮毛光潔度、眼球色澤、飲食量比CRF組明顯改善，反射性排尿量顯著增多；第5 w本組死亡2只，死鼠腎腫大，幾乎為米黃色；存活鼠癥狀改變明顯好轉(zhuǎn)；此后本組存活8只外觀、活動(dòng)逐漸好轉(zhuǎn)，至8 w末時(shí)與NC組相近；本組病死率20%，存活鼠體重(234±21)g。3組間比較，NC組與QT組的病死率沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)，但非常顯著地低于CRF組(P<0.01)。

2.2 腎臟重量和水分含量 存活鼠測(cè)定結(jié)果表明，CRF組腎臟重量、腎臟指數(shù)和水分含量都顯著增加，顯示腎臟顯著腫大并出現(xiàn)水腫；QT組腎臟也顯著腫大，但腎臟指數(shù)比腎衰組顯著減小，水腫程度亦明顯減輕(表1)。經(jīng)F檢驗(yàn)，組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

表1 各組大鼠體重、腎臟重量、腎組織水分含量

注：與CRF組比較，①P<0.01；與NC組比較，②P<0.05，③P<0.01

2.3 腎間質(zhì)浸潤(rùn)細(xì)胞數(shù) 存活鼠檢測(cè)結(jié)果表明，NC組腎間質(zhì)僅偶見淋巴細(xì)胞(Lc)和多形核白細(xì)胞(PMN)；CRF組腎間質(zhì)出現(xiàn)大量Lc和PMN浸潤(rùn)；QT組腎間質(zhì)也有Lc和PMN浸潤(rùn)，但數(shù)量顯著少于CRF組(表2)。經(jīng)F檢驗(yàn)，組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。

表2 各組大鼠腎間質(zhì)浸潤(rùn)細(xì)胞數(shù)(個(gè)/HPF)

注：與CRF組比較，①P<0.01；與NC組比較，②P<0.01

2.4 腎臟細(xì)胞破損率 存活鼠檢測(cè)結(jié)果表明：NC組腎小球和腎間質(zhì)都沒(méi)有空泡細(xì)胞和傷害細(xì)胞；個(gè)別破損細(xì)胞當(dāng)為制片過(guò)程造成。CRF組空泡細(xì)胞、破損細(xì)胞及傷害細(xì)胞等不同程度的細(xì)胞破損都十分顯著。QT組空泡細(xì)胞和破損細(xì)胞等嚴(yán)重破損者比CRF組顯著地減少；程度較輕的傷害細(xì)胞與CRF組無(wú)明顯差異(表3)。表明QT組腎組織細(xì)胞受到損害的程度比CRF組顯著較輕。經(jīng)F檢驗(yàn)，組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。

表3 各組大鼠腎臟細(xì)胞破損率(%)

注：與CRF組比較，①P<0.01；與NC組比較，②P<0.01

3 討論

國(guó)內(nèi)有實(shí)驗(yàn)研究觀察到，槲皮素有防治糖尿病性腎病的效果[9-10]，但槲皮素防治慢性腎衰作用的相關(guān)研究報(bào)道尚少見。本研究觀察到，槲皮素治療組(QT)大鼠外觀表現(xiàn)、存活數(shù)、腎臟腫大與水腫都比腎衰對(duì)照組(CRF)顯著改善；與本研究小組以往研究報(bào)告一致[12]。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，腺嘌呤引起的實(shí)驗(yàn)性慢性腎衰大鼠(CRF組)腎臟出現(xiàn)大量Lc和PMN浸潤(rùn)，隨之產(chǎn)生很多腎臟細(xì)胞破壞死亡?？赡芤?yàn)榇罅肯汆堰式Y(jié)晶沉積[13]，引起異物性炎癥，從而出現(xiàn)大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)；浸潤(rùn)的炎性細(xì)胞及其產(chǎn)生的炎性介質(zhì)[11-14]作用于腎組織，造成大量細(xì)胞破損、死亡，由此造成腎功能受損、衰竭。這些實(shí)驗(yàn)結(jié)果和這種推測(cè)尚未見其他直接的、定量的研究報(bào)告。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：QT組大鼠腎臟浸潤(rùn)的Lc和PMN較CRF組顯著減少，證明槲皮素對(duì)腺嘌呤引起的腎臟炎癥具有防治效果。而QT組腎間質(zhì)和腎小球破損、死亡細(xì)胞數(shù)量較CRF組顯著減少，證明槲皮素可防治腺嘌呤引起的腎臟實(shí)質(zhì)細(xì)胞損壞，保護(hù)腎臟細(xì)胞及其功能。此結(jié)果尚未見其他研究報(bào)道。

本實(shí)驗(yàn)組以前曾報(bào)告槲皮素對(duì)實(shí)驗(yàn)性慢性腎衰大鼠腎臟超氧化物歧化酶(SOD)和一氧化氮(NO)降低具有防治作用[14]。由此認(rèn)為，槲皮素作用于CRF大鼠，可顯著抵抗其腎臟炎癥，減少炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，減少過(guò)氧化物和炎癥介質(zhì)產(chǎn)生和集聚，從而減輕對(duì)腎臟細(xì)胞的損害，保護(hù)腎臟細(xì)胞。這可能就是槲皮素能防治CRF的重要機(jī)理。

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Study on protective effects of quercetin on renal cells of rats with chronic renal failure

Wang Lantian1,Wang Tianran2

1.Department of Clinical Pharmacy;2.Department of Laboratory,General Hospital of Chengdu Military Command,Chengdu,Sichuan,610083,China

Objective To study the protective effects of quercetin on renal cells of rats with chronic renal failure(CRF).Methods The selected rats were randomly divided into three groups.Feeds containing adenine were used in CRF and quercetin treatment(QT)groups in order to cause CRF.Since the 15th d,the two groups

the oral administration with saline or quercetin [100 mg/(kg·d)] for 6 weeks.The normal group(NC)did not receive the intervention.At the end of the experiment,the kidneys of all the survival rats were collected and made into pathological sections.The defective and infiltrated cells were calculated and observed under the microscope and statistically analyzed.Results Few infiltrated lymphocytes(Lc)and polymorphonulear leukocyte(PMN)could be observed in the renal interstitium of NC group.The numbers of the infiltrated Lc and PMN in CRF group increased to a large amount(14.65±2.36 and 10.34±2.23 meanly in each field of high-powered optics).The number of Lc and PMN(8.68±2.24 and 6.25±1.58)in QT group was significantly lower than that in CRF group(P<0.01).Physaliferous cells were not observed in the renal glomerulus and interstitium of NC group,and few defective cells could be seen.The percentages of physaliferous and defective cells in CRF group reached to 10.4±2.2 and 22.6±4.5,and the percentage of renal interstitium reached to 8.6±2.2 and 23.4±6.4,which were all significantly higher than those in NC group(P<0.01).The percentages of physaliferous and defective cells in QT group were 1.4±0.6 and 8.8±2.6,respectively,and the percentage of renal interstitium was 1.2±0.4 and 9.2±3.1,which were all significantly lower than those in CRF group(P<0.01).Conclusion Quercetin has obvious inhibitive effect on the infiltration of the inflammation cells in rats' renal interstitium and can also significantly reduce the damage to the parenchyma cells of renal glomerulus and interstitium.

quercetin;chronic renal failure;inflammation cell;renal glomerulus;renal interstitium

610083 成都，成都軍區(qū)總醫(yī)院臨床藥學(xué)科(王藍(lán)天)，檢驗(yàn)科(王天然)

R 692.5

A

1004-0188(2014)02-0144-03

10.3969/j.issn.1004-0188.2014.02.010

2013-08-07)