3種殺菌劑對葡萄霜霉病菌的毒力測定和田間藥效試驗

李寶燕　王英姿　劉學卿　任愛梅　趙玖華

摘要：為了給田間防治葡萄霜霉病提供安全、高效的殺菌劑，采用室內(nèi)毒力測定和田間試驗相結合的方法，研究了3種殺菌劑對葡萄霜霉病菌的毒力和藥效，結果表明，88%代森錳鋅、97.4%烯酰嗎啉、98%嘧菌酯的抑菌中濃度（EC50）分別為61.9、560、1.35 mg/L，其中，98%嘧菌酯對葡萄霜霉病菌的毒力最強；50%烯酰嗎啉可濕性粉劑2 500倍液及25%嘧菌酯懸浮劑1 000倍液對葡萄霜霉病的防效較好。

關鍵詞：葡萄；霜霉??；毒力測定；田間防效；烯酰嗎啉；嘧菌酯；代森錳鋅

中圖分類號： S436.631.1+9文獻標志碼： A文章編號：1002-1302（2014）01-0098-02

收稿日期：2013-05-22

基金項目：國家公益性行業(yè)（農(nóng)業(yè)）科研專項（編號：201203035）。

作者簡介：李寶燕（1983—），女，山東濟南人，博士，農(nóng)藝師，主要從事植物病蟲害防治技術研究。E-mail：byli1314@163.com。葡萄在我國種植廣泛，是山東煙臺的主要經(jīng)濟作物之一。葡萄霜霉?。╣rape downy mildew）由病原真菌葡萄生單軸霉[Plasmopara viticola （Berk. et Curtis）Berl. et de Toni]引起，是葡萄主要病害之一[1]，該病嚴重流行時，葉片焦枯早落，枝梢扭曲畸形，幼果布滿白色霉層、皺縮脫落，嚴重影響葡萄生長及果實產(chǎn)量和品質(zhì)，給葡萄產(chǎn)業(yè)造成重大的經(jīng)濟損失。在葡萄霜霉病的綜合防治中，藥劑防治仍是一項不可缺少的重要防治措施[2]。2012年，筆者對煙臺生產(chǎn)上防治霜霉病的主要藥劑代森錳鋅、烯酰嗎啉和嘧菌酯進行了防治葡萄霜霉病的室內(nèi)抑菌活性測定和田間藥效試驗，以期為葡萄霜霉病田間防治提供安全、高效、經(jīng)濟的殺菌劑。

1材料與方法

1.1供試藥劑

88%代森錳鋅原藥、97.4%烯酰嗎啉原藥和98%嘧菌酯原藥均由山東省農(nóng)業(yè)科學院提供。80%代森錳鋅可濕性粉劑（大生-M45）為陶氏益農(nóng)農(nóng)業(yè)科技（中國）有限公司產(chǎn)品；50%烯酰嗎啉可濕性粉劑（安克）為德國巴斯夫貿(mào)易股份有限公司產(chǎn)品；25%嘧菌酯懸浮劑（阿米西達）為瑞士先正達作物保護有限公司產(chǎn)品。

1.2室內(nèi)抑菌活性測定

1.2.1孢子懸浮液的配制取田間自然發(fā)病的新鮮葡萄病葉，用自來水沖洗凈表面的孢子后，將病葉置于25 ℃條件下保濕24 h來培養(yǎng)新鮮的孢子；用干凈的毛筆將新鮮孢子刷于無菌蒸餾水中，配成孢子懸浮液；在顯微鏡下調(diào)整孢子懸浮液濃度至5×105 個/mL用于試驗測定。

1.2.2接種方法將88%代森錳鋅原藥依次稀釋為800、400、100、50、25 mg/L；97.4%烯酰嗎啉原藥依次稀釋為80、40、20、10、5 mg/L；98%嘧菌酯原藥依次稀釋為12.5、6.25、3125、1.563、0.781 mg/L。試驗采取葉盤法[3]，將葡萄新枝條上健康無病的4～5位葉片噴灑相應的藥液后自然晾干，用打孔器打取直徑1 cm的葉盤，葉背面朝上置于鋪有無菌濕潤濾紙的培養(yǎng)皿中，每皿放置15個葉盤；在葉盤中央滴20 μL孢子懸浮液，置于生物培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為溫度25 ℃、濕度保持在80%左右、光照12 h/d。對照葉片噴施等量清水，晾干，打取葉盤后滴加等量的菌液。每處理重復4皿，5～7 d后調(diào)查發(fā)病情況。

1.2.3統(tǒng)計方法病情調(diào)查采用6級記載法[4]，根據(jù)病斑面積占葉盤面積的百分率劃分病級：0級，無病斑；1級，病斑面積占整個葉面積的5%以下；3級，病斑面積占整個葉面積的6%～25%；5級，病斑面積占整個葉面積的26%～50%；7級，病斑面積占整個葉面積的51%～75%；9級，病斑面積占整個葉面積的75%以上。

計算病情指數(shù)和各濃度藥劑對葡萄霜霉病菌的抑制率，并用統(tǒng)計軟件計算出毒力回歸方程及抑菌中濃度（EC50）。病情指數(shù)和抑菌率計算公式為：病情指數(shù)=[∑（各級發(fā)病葉盤數(shù)×相對級數(shù)值）/（總?cè)~盤數(shù)×9）]×100%；抑菌率=[（對照病情指數(shù)-處理病情指數(shù)）/ 對照病情指數(shù)]×100%。

1.3田間藥效試驗

1.3.1試驗地點及概況試驗于2012年7—9月在煙臺市蓬萊潮水試驗場進行，該園為葡萄霜霉病常年發(fā)病區(qū)，沙壤土質(zhì)，肥水良好，管理水平較高。試驗葡萄品種為5年生蛇龍珠，株行距1.0 m×1.5 m。

1.3.2試驗設計及調(diào)查方法試驗設4個處理：80%代森錳鋅可濕性粉劑800倍液；50%烯酰嗎啉可濕性粉劑2 500倍液；25%嘧菌酯懸浮劑1 000倍液；以清水作對照。每1處理1個小區(qū)，小區(qū)面積為12 m2（1.5 m×8 m），每小區(qū)種植8棵葡萄樹，4次重復，共16個小區(qū)，隨機區(qū)組排列。于霜霉病發(fā)病初期（正值果實膨大期），以工農(nóng)16型背負式噴霧器進行噴霧，間隔7～10 d，連續(xù)用藥3次。第2次藥后7 d和第3次藥后10 d進行田間調(diào)查，每小區(qū)隨機選取10個新枝條，調(diào)查每個枝條上全部葉片和病葉數(shù)，并按病斑占整個葉面積的百分比，采用6級記載法[4]對病葉進行分級，計算病情指數(shù)，求出防效，并對各小區(qū)的防效反正弦轉(zhuǎn)換后進行方差分析，用LSR法進行多重比較。

病情指數(shù)和防治效果計算公式為：病情指數(shù)=[∑（發(fā)病葉片數(shù)×相應發(fā)病級數(shù)）/（調(diào)查總?cè)~片數(shù)×9）]×100%；防治效果=[1-（噴藥前空白區(qū)病情指數(shù)×噴藥后處理區(qū)病情指數(shù)）/（噴藥后空白區(qū)病情指數(shù)×噴藥前處理區(qū)病情指數(shù)）]×100%。

2結果與分析

2.1室內(nèi)抑菌活性測定結果

由表1可見，98%嘧菌酯對葡萄霜霉病菌的抑制作用最強，其EC50為1.35 mg/L，EC90為6.85 mg/L；其次為97.4%烯酰嗎啉，EC50為5.60 mg/L，EC90為59.78 mg/L；88%代森錳鋅抑菌作用相對較差，EC50高達61.9 mg/L，EC90高達 1 152.38 mg/L。

2.2田間藥效試驗結果

由表2可見，50%烯酰嗎啉可濕性粉劑2 500倍液、25%嘧菌酯懸浮劑1 000倍液對葡萄霜霉病表現(xiàn)出良好的防治效果，兩者之間沒有顯著性差異。50%烯酰嗎啉可濕性粉劑 2 500 倍液、25%嘧菌酯懸浮劑1 000倍液，第2次藥后7 d時田間防治葡萄霜霉病的效果分別為89.2%和887%，第3次藥后10 d的防效分別為93.8%和91.4%，顯著優(yōu)于80%代森錳鋅800倍液的防效。田間觀察，用藥3次后，各處理均未出現(xiàn)藥害。表13種殺菌劑對葡萄霜霉病菌的室內(nèi)抑菌活性測定結果

藥劑1抑菌活性回歸方程1EC50

（mg/L）1EC90

（mg/L）1相關系數(shù)88%代森錳鋅1y=3.210 0+1.009 1x161.9011 152.3810.959 797.4%烯酰嗎啉1y=4.067 0+1.246 5x15.60159.7810.989 998%嘧菌酯1y=4.795 2+1.819 7x11.3516.8510.961 3

表23種殺菌劑對葡萄霜霉病的田間防治效果

藥劑1濃度

（倍液）1藥前病情指數(shù)

（%）1第2次藥后7 d1第3次藥后10 d病情指數(shù)（%）1防效（%）1病情指數(shù)（%）1防效（%）80%代森錳鋅180011.3717.87173.5b111.25180.2b50%烯酰嗎啉12 50011.9312.28189.2a12.49193.8a25%嘧菌酯11 00011.6512.78188.7a14.05191.4a空白對照1等量清水10.90136.621169.941注：表中同列數(shù)據(jù)后不同字母表示經(jīng)DMRT檢驗差異顯著（P<0.05）。

3小結與討論

葡萄霜霉病在我國普遍發(fā)生，尤以山東沿海發(fā)生為重[5]，其在田間菌量大，繁殖快，易對殺菌劑產(chǎn)生抗性。種植者為了防治葡萄病害，從葡萄萌芽到果實成熟后需要進行10多次的殺菌劑噴霧，需要用近10種殺菌劑[6]。本研究選取了生產(chǎn)上常用的3種殺菌劑，通過室內(nèi)毒力測定和田間藥效試驗，檢測其對葡萄霜霉病的防治效果。室內(nèi)毒力測定結果表明，98%嘧菌酯、97.4%烯酰嗎啉對葡萄霜霉病菌抑制作用較強，田間藥效結果與室內(nèi)測定結果較為一致。在煙臺地區(qū)烯酰嗎啉和嘧菌酯仍然是防治葡萄霜霉病的有效藥劑，兩者在2次藥后7 d及3次藥后10 d的防效均在90%左右，因此可作為田間防治葡萄霜霉病的主要殺菌劑。代森錳鋅是一種優(yōu)良的保護性殺菌劑，屬低毒農(nóng)藥，雖然其防治葡萄霜霉病效果差于烯酰嗎啉和嘧菌酯，但其3次藥后 10 d 的防效在80%以上，且由于其殺菌范圍廣，在生產(chǎn)上廣泛使用，為減少葡萄霜霉病抗藥性的產(chǎn)生，代森錳鋅可以作為煙臺地區(qū)防治葡萄霜霉病的輪換用藥。

隨著烯酰嗎啉和嘧菌酯的大量應用，抗藥性風險不能忽視。國外已有甲氧基丙烯酸酯類殺菌劑（嘧菌酯）抗藥菌株的報道[7-8]，這類殺菌劑的固有抗性風險是高水平的[7]。為減緩防治葡萄霜霉病農(nóng)藥抗藥性的產(chǎn)生，建議生產(chǎn)上輪換使用其他類型藥劑。另外，為了保證取得良好的防效，施藥時間應在葡萄霜霉病的發(fā)病初期，并間隔7～10 d輪換用藥。

參考文獻：

[1]Duso C，Pozzebon A，Capuzzo C，et al. Grape downy mildew spread and mite seasonal abundance in vineyards：evidence for the predatory mites Amblyseius andersoni and Typhlodromus pyri[J]. Biological Control，2003，27（3）：229-241.

[2]廉俊平，張引平. 淺談葡萄霜霉病的發(fā)生與防治[J]. 農(nóng)業(yè)技術與裝備，2011（4）：34-35.

[3]湯細. 葡萄霜霉病離體接種方法的研究[J]. 微生物學通報，1994，21（6）：373-374.

[4]農(nóng)藥田間藥效實驗準則（二）[M]. 北京：中國標準出版社，2004：409-413.

[5]楊傳光，張治平. 葡萄霜霉病的發(fā)生與防治[J]. 煙臺果樹，2009（2）：50-51.

[6]夏志萍. 葡萄病蟲害無公害綜合防治技術[J]. 上海農(nóng)業(yè)科技，2007（5）：118-119.

[7]Ishii H，F(xiàn)raaije B A，Sugiyama T，et al. Occurrence and molecular characterization of strobilurin resistance in cucumber powdery mildew and downy mildew[J]. Phytopathology，2001，91（12）：1166-1171.

[8]Sierotzki H，Parisi S，Steinfeld U，et al. Mode of resistance to respiration inhibitors at the cytochrome bc1 enzyme of Mycosphaerella fijensis field isolates[J]. Pest Management Science，2000，56（10）：833-841.楊德亮，徐鳳，劉秀，等. 地黃耐百草枯的有效成分分析[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)科學，2014，42（1）：100-102.

2.2田間藥效試驗結果

由表2可見，50%烯酰嗎啉可濕性粉劑2 500倍液、25%嘧菌酯懸浮劑1 000倍液對葡萄霜霉病表現(xiàn)出良好的防治效果，兩者之間沒有顯著性差異。50%烯酰嗎啉可濕性粉劑 2 500 倍液、25%嘧菌酯懸浮劑1 000倍液，第2次藥后7 d時田間防治葡萄霜霉病的效果分別為89.2%和887%，第3次藥后10 d的防效分別為93.8%和91.4%，顯著優(yōu)于80%代森錳鋅800倍液的防效。田間觀察，用藥3次后，各處理均未出現(xiàn)藥害。表13種殺菌劑對葡萄霜霉病菌的室內(nèi)抑菌活性測定結果

藥劑1抑菌活性回歸方程1EC50

（mg/L）1EC90

（mg/L）1相關系數(shù)88%代森錳鋅1y=3.210 0+1.009 1x161.9011 152.3810.959 797.4%烯酰嗎啉1y=4.067 0+1.246 5x15.60159.7810.989 998%嘧菌酯1y=4.795 2+1.819 7x11.3516.8510.961 3

表23種殺菌劑對葡萄霜霉病的田間防治效果

藥劑1濃度

（倍液）1藥前病情指數(shù)

（%）1第2次藥后7 d1第3次藥后10 d病情指數(shù)（%）1防效（%）1病情指數(shù)（%）1防效（%）80%代森錳鋅180011.3717.87173.5b111.25180.2b50%烯酰嗎啉12 50011.9312.28189.2a12.49193.8a25%嘧菌酯11 00011.6512.78188.7a14.05191.4a空白對照1等量清水10.90136.621169.941注：表中同列數(shù)據(jù)后不同字母表示經(jīng)DMRT檢驗差異顯著（P<0.05）。

3小結與討論

葡萄霜霉病在我國普遍發(fā)生，尤以山東沿海發(fā)生為重[5]，其在田間菌量大，繁殖快，易對殺菌劑產(chǎn)生抗性。種植者為了防治葡萄病害，從葡萄萌芽到果實成熟后需要進行10多次的殺菌劑噴霧，需要用近10種殺菌劑[6]。本研究選取了生產(chǎn)上常用的3種殺菌劑，通過室內(nèi)毒力測定和田間藥效試驗，檢測其對葡萄霜霉病的防治效果。室內(nèi)毒力測定結果表明，98%嘧菌酯、97.4%烯酰嗎啉對葡萄霜霉病菌抑制作用較強，田間藥效結果與室內(nèi)測定結果較為一致。在煙臺地區(qū)烯酰嗎啉和嘧菌酯仍然是防治葡萄霜霉病的有效藥劑，兩者在2次藥后7 d及3次藥后10 d的防效均在90%左右，因此可作為田間防治葡萄霜霉病的主要殺菌劑。代森錳鋅是一種優(yōu)良的保護性殺菌劑，屬低毒農(nóng)藥，雖然其防治葡萄霜霉病效果差于烯酰嗎啉和嘧菌酯，但其3次藥后 10 d 的防效在80%以上，且由于其殺菌范圍廣，在生產(chǎn)上廣泛使用，為減少葡萄霜霉病抗藥性的產(chǎn)生，代森錳鋅可以作為煙臺地區(qū)防治葡萄霜霉病的輪換用藥。

隨著烯酰嗎啉和嘧菌酯的大量應用，抗藥性風險不能忽視。國外已有甲氧基丙烯酸酯類殺菌劑（嘧菌酯）抗藥菌株的報道[7-8]，這類殺菌劑的固有抗性風險是高水平的[7]。為減緩防治葡萄霜霉病農(nóng)藥抗藥性的產(chǎn)生，建議生產(chǎn)上輪換使用其他類型藥劑。另外，為了保證取得良好的防效，施藥時間應在葡萄霜霉病的發(fā)病初期，并間隔7～10 d輪換用藥。

參考文獻：

[1]Duso C，Pozzebon A，Capuzzo C，et al. Grape downy mildew spread and mite seasonal abundance in vineyards：evidence for the predatory mites Amblyseius andersoni and Typhlodromus pyri[J]. Biological Control，2003，27（3）：229-241.

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[4]農(nóng)藥田間藥效實驗準則（二）[M]. 北京：中國標準出版社，2004：409-413.

[5]楊傳光，張治平. 葡萄霜霉病的發(fā)生與防治[J]. 煙臺果樹，2009（2）：50-51.

[6]夏志萍. 葡萄病蟲害無公害綜合防治技術[J]. 上海農(nóng)業(yè)科技，2007（5）：118-119.

[7]Ishii H，F(xiàn)raaije B A，Sugiyama T，et al. Occurrence and molecular characterization of strobilurin resistance in cucumber powdery mildew and downy mildew[J]. Phytopathology，2001，91（12）：1166-1171.

[8]Sierotzki H，Parisi S，Steinfeld U，et al. Mode of resistance to respiration inhibitors at the cytochrome bc1 enzyme of Mycosphaerella fijensis field isolates[J]. Pest Management Science，2000，56（10）：833-841.楊德亮，徐鳳，劉秀，等. 地黃耐百草枯的有效成分分析[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)科學，2014，42（1）：100-102.

2.2田間藥效試驗結果

由表2可見，50%烯酰嗎啉可濕性粉劑2 500倍液、25%嘧菌酯懸浮劑1 000倍液對葡萄霜霉病表現(xiàn)出良好的防治效果，兩者之間沒有顯著性差異。50%烯酰嗎啉可濕性粉劑 2 500 倍液、25%嘧菌酯懸浮劑1 000倍液，第2次藥后7 d時田間防治葡萄霜霉病的效果分別為89.2%和887%，第3次藥后10 d的防效分別為93.8%和91.4%，顯著優(yōu)于80%代森錳鋅800倍液的防效。田間觀察，用藥3次后，各處理均未出現(xiàn)藥害。表13種殺菌劑對葡萄霜霉病菌的室內(nèi)抑菌活性測定結果

藥劑1抑菌活性回歸方程1EC50

（mg/L）1EC90

（mg/L）1相關系數(shù)88%代森錳鋅1y=3.210 0+1.009 1x161.9011 152.3810.959 797.4%烯酰嗎啉1y=4.067 0+1.246 5x15.60159.7810.989 998%嘧菌酯1y=4.795 2+1.819 7x11.3516.8510.961 3

表23種殺菌劑對葡萄霜霉病的田間防治效果

藥劑1濃度

（倍液）1藥前病情指數(shù)

（%）1第2次藥后7 d1第3次藥后10 d病情指數(shù)（%）1防效（%）1病情指數(shù)（%）1防效（%）80%代森錳鋅180011.3717.87173.5b111.25180.2b50%烯酰嗎啉12 50011.9312.28189.2a12.49193.8a25%嘧菌酯11 00011.6512.78188.7a14.05191.4a空白對照1等量清水10.90136.621169.941注：表中同列數(shù)據(jù)后不同字母表示經(jīng)DMRT檢驗差異顯著（P<0.05）。

3小結與討論

葡萄霜霉病在我國普遍發(fā)生，尤以山東沿海發(fā)生為重[5]，其在田間菌量大，繁殖快，易對殺菌劑產(chǎn)生抗性。種植者為了防治葡萄病害，從葡萄萌芽到果實成熟后需要進行10多次的殺菌劑噴霧，需要用近10種殺菌劑[6]。本研究選取了生產(chǎn)上常用的3種殺菌劑，通過室內(nèi)毒力測定和田間藥效試驗，檢測其對葡萄霜霉病的防治效果。室內(nèi)毒力測定結果表明，98%嘧菌酯、97.4%烯酰嗎啉對葡萄霜霉病菌抑制作用較強，田間藥效結果與室內(nèi)測定結果較為一致。在煙臺地區(qū)烯酰嗎啉和嘧菌酯仍然是防治葡萄霜霉病的有效藥劑，兩者在2次藥后7 d及3次藥后10 d的防效均在90%左右，因此可作為田間防治葡萄霜霉病的主要殺菌劑。代森錳鋅是一種優(yōu)良的保護性殺菌劑，屬低毒農(nóng)藥，雖然其防治葡萄霜霉病效果差于烯酰嗎啉和嘧菌酯，但其3次藥后 10 d 的防效在80%以上，且由于其殺菌范圍廣，在生產(chǎn)上廣泛使用，為減少葡萄霜霉病抗藥性的產(chǎn)生，代森錳鋅可以作為煙臺地區(qū)防治葡萄霜霉病的輪換用藥。

隨著烯酰嗎啉和嘧菌酯的大量應用，抗藥性風險不能忽視。國外已有甲氧基丙烯酸酯類殺菌劑（嘧菌酯）抗藥菌株的報道[7-8]，這類殺菌劑的固有抗性風險是高水平的[7]。為減緩防治葡萄霜霉病農(nóng)藥抗藥性的產(chǎn)生，建議生產(chǎn)上輪換使用其他類型藥劑。另外，為了保證取得良好的防效，施藥時間應在葡萄霜霉病的發(fā)病初期，并間隔7～10 d輪換用藥。

參考文獻：

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