三顆針有效成分鹽酸小檗堿精制工藝的優(yōu)化

朱蘭寸，李俊平，聶立勇，王林玲，何雪君，廖伊茜，馬廷升

（懷化醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校藥學(xué)系，湖南 懷化 418000）

三顆針為小檗科植物三棵針 Berberis pruinosa Fr．的干燥根莖，因其莖常生三叉狀針刺而得名，含小檗堿、小檗紅堿、小檗胺、藥根堿等化學(xué)成分，具有抗菌、降壓和抗癌等多種生理活性，其主要成分小檗堿具有清熱燥濕、瀉火解毒作用，用于治療細(xì)菌性痢疾、胃腸炎、副傷寒、支氣管肺炎等，療效確切[1]。在藥物生產(chǎn)中，原料藥鹽酸小檗堿的純度是關(guān)鍵，是藥物制劑的質(zhì)量保證。目前相關(guān)報(bào)道多為三棵針有效成分小檗堿提取、分離條件的優(yōu)化，得到小檗堿粗品[2-4]，但尚未見(jiàn)有關(guān)小檗堿粗品精制為鹽酸小檗堿工藝優(yōu)化的報(bào)道。筆者應(yīng)用 L9（34）正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)優(yōu)化三棵針提取的小檗堿粗品精制為鹽酸小檗堿的工藝條件，以提高產(chǎn)品的收率?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

PHS-25型數(shù)字酸度計(jì)（上海偉業(yè)儀器廠）；UV-754型分光光度計(jì)（上海分析儀器公司）；FA1004B型電子分析天平（上海平軒科學(xué)儀器有限公司）。三顆針（購(gòu)自湖南懷化大藥房，經(jīng)懷化醫(yī)學(xué)高等專科學(xué)校楊宏健教授鑒定為正品三顆針的干燥根）；粗制小檗堿（按酸水提取法自制，經(jīng)薄層色譜定性符合規(guī)定）；鹽酸小檗堿對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)713-9204）；其他所用試劑均為市售分析純。

2 方法與結(jié)果

2．1 制備工藝

將粗制小檗堿（勿需干燥）置燒杯中，加入約50倍純化水，水浴上回流煮沸30 min，迅速抽濾，不溶物可加純化水30～40 mL再煮1次，濾過(guò)，合并濾液，加濃鹽酸調(diào)pH為1～2，放冷，即可析出鹽酸小檗堿精制品，減壓過(guò)濾，并用少量70%乙醇洗滌結(jié)晶，于80℃以下干燥，稱重，計(jì)算提取率。

2．2 正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)

采用 L9（34）正交表進(jìn)行試驗(yàn)設(shè)計(jì)，以純化水用量（因素A）、回流時(shí)間（因素 B）、溶液 pH（因素 C）、乙醇體積分?jǐn)?shù)（因素 D）作為考察因素，分別設(shè)計(jì)3個(gè)水平，見(jiàn)表1；以鹽酸小檗堿提取率為評(píng)價(jià)指標(biāo)，以鹽酸小檗堿含量為參考，正交試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表2，方差分析結(jié)果見(jiàn)表3。由表2可知，影響三顆針鹽酸小檗堿精制提取率的因素順序?yàn)镃＞B＞D＞A，即主要因素為溶液pH，其次為回流時(shí)間、乙醇體積分?jǐn)?shù)、純化水用量。試驗(yàn)號(hào)A2B3C1D2為最佳工藝條件，即純化水用量為50倍樣品、回流時(shí)間為30 min、溶液pH為1～2、乙醇體積分?jǐn)?shù)為70%。由方差分析可知，以提取率為考察指標(biāo)，4個(gè)因素中溶液pH對(duì)其有顯著影響（P＜0．05），是關(guān)鍵因素。故方差分析與直觀分析結(jié)果一致。

表1 正交試驗(yàn)因素水平表

表2 正交設(shè)計(jì)表及結(jié)果

表3 提取率方差分析表

2．3 鹽酸小檗堿含量測(cè)定[5-6]

2．3．1 標(biāo)準(zhǔn)曲線制備

精密稱取鹽酸小檗對(duì)照品5 mg，置50 mL容量瓶中，加乙醇溶解并稀釋至刻度。精密量取對(duì)照品溶液 1．0，2．0，3．0，4．0，5．0 mL，分別置50 mL容量瓶中，加乙醇定容，搖勻，以乙醇為空白對(duì)照，在348 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度。以質(zhì)量濃度（C）對(duì)吸收度（A）進(jìn)行線性回歸，得回歸方程 A＝0．051 82 C ＋0．008 15，r＝0．999 6(n ＝5)。結(jié)果表明，鹽酸小檗堿質(zhì)量濃度在 2．0 ～10．0 μg／mL 范圍內(nèi)與吸收度呈良好線性關(guān)系。

2．3．2 樣品含量測(cè)定

精密稱取鹽酸小檗堿精制品50 mg，置100 mL容量瓶中，加乙醇定容，精密量取1．0 mL，置50 mL容量瓶中，加乙醇稀釋至刻度，搖勻。精密吸取1 mL，加入已處理好的中性氧化鋁柱上，照2010年版《中國(guó)藥典（二部）》中方法，用35 mL乙醇分次洗脫，至洗脫液無(wú)色，加乙醇稀釋至50 mL，搖勻。在348 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度。按回歸方程計(jì)算，含量測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表2。結(jié)果表明：按精制工藝所得到的鹽酸小檗堿含量相差不大，按試驗(yàn)號(hào)A2B3C1D2最佳工藝條件，鹽酸小檗堿含量為97．6%，符合中國(guó)藥典標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定（≥97．0% ）。

2．4 工藝驗(yàn)證試驗(yàn)

稱取一定量粗制小檗堿 5份，每份 2．0 g，按 L9（34）試驗(yàn)篩選的最佳工藝條件制備鹽酸小檗堿精制品，提取率平均值為75．7% ， RSD 為 2．65% （n＝5），鹽 酸 小 檗 堿 含 量 平 均 值 為97．5% ，RSD 為 1．72%（n＝5）。結(jié)果表明，正交試驗(yàn)篩選的制備工藝條件(A2B3D1D2)是可靠的。

3 討論

三棵針等原料中除主要含小檗堿外，尚含一定量的小檗胺、藥根堿等多種成分，除小檗堿、小檗胺含量多且有一定藥用價(jià)值外，其他成分含量均少，因此無(wú)分離必要。精制鹽酸小檗堿過(guò)程中，煮沸后的溶液應(yīng)趁熱迅速抽濾，以免溶液冷卻而析出鹽酸小檗堿結(jié)晶，造成提取率降低。

小檗堿為黃色針狀晶體，表現(xiàn)為季銨型、醇型、醛型3種互變異構(gòu)體，其中以季銨堿型最穩(wěn)定[2]，小檗堿能緩慢溶解于冷水或冷乙醇，在熱水或熱乙醇中溶解度比較大，難溶于丙醇、氯仿或苯。本試驗(yàn)中采取純化水為溶劑，回流溶解，達(dá)到綠色環(huán)保目的。

小檗堿可從三顆針、黃連、黃柏等植物中提取，由于黃連生長(zhǎng)緩慢、價(jià)格較高，黃柏來(lái)源也較少，現(xiàn)我國(guó)主要應(yīng)用三顆針作為提取原料。目前鹽酸小檗堿需求量日益增加，近年來(lái)對(duì)小檗堿提取工藝的研究較多。本試驗(yàn)主要從鹽酸小檗堿精制環(huán)節(jié)進(jìn)行工藝優(yōu)化，以提高產(chǎn)率、提高效益。

[1]江蘇新醫(yī)院．中藥大辭典(上冊(cè))[M]．上海：上海科學(xué)技術(shù)出版社，1977：66．

[2]程詠梅，陳仁華．小檗堿提取工藝的研究[J]．時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2007，18（6）：1 445-1 447．

[3]楊宏健，肖美風(fēng)，袁 麗．正交實(shí)驗(yàn)優(yōu)選三顆針中小檗堿的提取工藝[J]．中國(guó)藥師，2005，8（8）：673-675．

[4]廖志新，董建生．青海產(chǎn)三顆針中鹽酸小檗堿的最佳提取工藝研究[J]．天然產(chǎn)物研究與開發(fā)，1998，10（2）：62-65．

[5]汪海霞，李政偉，朱玉章．紫外分光光度法測(cè)定鹽酸小檗堿的含量[J]．河南中醫(yī)藥學(xué)刊，2002，17（5）：22-23．

[6]李 洪．兩種鹽酸小檗堿含量測(cè)定方法比較[J]．中國(guó)藥業(yè)，2005，14（11）：35．