高效液相色譜法測定石杏痰咳片中鹽酸麻黃堿含量

黃海婷，蒙慶東

（廣西壯族自治區(qū)北海食品藥品檢驗(yàn)所，廣西 北海 536000）

石杏痰咳片由麻黃、石膏、苦杏仁、百部、款冬花、浙貝母、桑白皮、魚腥草、功勞木、陳皮、甘草等藥組方，具有疏風(fēng)宣肺、止咳化痰的功效，適用于改善咳嗽、咳痰癥狀。麻黃為方中君藥，故以麻黃堿為指標(biāo)進(jìn)行含量測定，控制成品的質(zhì)量。2010年版《中國藥典（一部）》采用高效液相色譜(HPLC)法測定麻黃堿的含量[1]，該方法操作簡單、方法可靠、重復(fù)性好，故本試驗(yàn)參照該方法測定鹽酸麻黃堿的含量。

1 儀器與試藥

Agilent 1200型高效液相色譜儀（色譜系統(tǒng)由G1311A型四元泵、G1329A型標(biāo)準(zhǔn)型自動進(jìn)樣器、G1314B XL VWB型檢測器、色譜數(shù)據(jù)工作站、AT-330型色譜柱恒溫箱組成）。鹽酸麻黃堿對照品（中國藥品生物制品檢定所，供含量測定用，批號為171241-200303）；石杏痰咳片（廣西欽州金頁制藥有限公司，國藥準(zhǔn)字B20020463，批號為120901）；乙腈為色譜純，水為超純水，磷酸等其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2．1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

色譜柱：Agilent TC-C18柱（250 mm ×4．6 mm，5 μm）；柱溫：40 ℃ ；流動相：乙腈 -0．1% 磷酸溶液（4 ∶96）；檢測波長：207 nm；流速：1．0 mL ／min；進(jìn)樣量：10 μL。按上述色譜條件分別測定樣品溶液、對照品溶液、陰性對照品溶液，色譜圖見圖1。結(jié)果表明，鹽酸麻黃堿對照品與石杏痰咳片中鹽酸麻黃堿的保留時間基本一致，陰性對照品溶液在相應(yīng)位置無相應(yīng)峰出現(xiàn)，同時與其他組分分離完全，分離度大于1．5，理論板數(shù)以鹽酸麻黃堿峰計(jì)算不低于 3 000。

圖1 高效液相色譜圖

2．2 溶液制備

精密稱取鹽酸麻黃堿對照品20．16 mg，置20 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取1 mL置25 mL容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得每1 mL中含40．32 μg的鹽酸麻黃堿對照品溶液。取10片石杏痰咳片，稱定質(zhì)量，研碎，取0．5 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入70%甲醇25 mL，密塞，稱定質(zhì)量，超聲處理40 min，放冷，再稱定質(zhì)量，用70%甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過，即得供試品溶液。按成品制劑方法制得缺麻黃的陰性樣品制劑。取陰性樣品制劑10片，研細(xì)，取0．5 g，精密稱定，按供試品溶液制備方法制得陰性對照品溶液。

2．3 方法學(xué)考察

線性關(guān)系考察：精密稱取鹽酸麻黃堿對照品20．16 mg，置20 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取1 mL，置20 mL容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得每1 mL中含50．40 μg鹽酸麻黃堿的對照品溶液。吸取上述對照品溶液適量，以甲醇分別制成質(zhì)量濃度為 5．04，10．08，20．16，30．21，40．32，50．40，60．48，80．06，100．80 μg ／mL 的對照品溶液。分別吸取各質(zhì)量濃度對照品溶液10 μL注入高效液相色譜儀，按擬訂色譜條件測定峰面積。以鹽酸麻黃堿濃度（X，μg／mL）為橫坐標(biāo)。峰面積（Y）為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得線性回歸方程 Y＝25．236 X-23．617，r＝0．999 9。結(jié)果表明，鹽酸麻黃堿質(zhì)量濃度在 5．04 ～100．80 μg／mL范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系。

精密度試驗(yàn)：取質(zhì)量濃度為40．32 μg／mL的對照品溶液及同一供試品溶液，按擬訂色譜條件重復(fù)進(jìn)樣6次，測定鹽酸麻黃堿對應(yīng)的色譜峰高度并計(jì)算 RSD。結(jié)果對照品溶液的 RSD為0．27%，供試品溶液的 RSD為0．68%，表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn)：取同一供試品溶液，于 0，2，4，6，12，24 h 時分別測定峰面積。結(jié)果的 RSD為0．86%，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

重復(fù)性試驗(yàn)：取6份供試品溶液，平行操作，測定鹽酸麻黃堿的含量。結(jié)果的 RSD為1．87%，表明方法重復(fù)性良好。

加樣回收試驗(yàn)：稱取已知含量的樣品9份，每份0．25 g，精密稱定，置25 mL容量瓶中，每3份分別精密加入鹽酸麻黃堿對照品 0．126 0，0．252 0，0．504 0 mg，按供試品溶液制備方法處理樣品并測定峰面積，以外標(biāo)法計(jì)算鹽酸麻黃堿含量，并計(jì)算回收率。結(jié)果見表1。

表1 鹽酸麻黃堿加樣回收試驗(yàn)結(jié)果（n＝9）

2．4 樣品含量測定

取3份同一批（批號為20090301）樣品，依法制備供試品溶液，按擬訂色譜條件進(jìn)樣測定。分別精密吸取對照品溶液（質(zhì)量濃度為 40．32 μg ／mL）與供試品溶液各 10 μL 注入高效液相色譜儀，依法測定3份供試品溶液中鹽酸麻黃堿的含量。結(jié)果每片石杏痰咳片中鹽酸麻黃堿的平均含量分別為0．578 8 mg，RSD為1．76% （n＝3）。

3 討論

石杏痰咳片成分非常復(fù)雜，本試驗(yàn)選擇鹽酸麻黃堿作為測定指標(biāo)，測定其含量。在國家藥品監(jiān)督管理局標(biāo)準(zhǔn)（試行）[2]中采用了薄層掃描法測定石杏痰咳片中鹽酸麻黃堿的含量，該方法復(fù)雜、重復(fù)性不好、靈敏度不高。根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，鹽酸麻黃堿的含量測定方法有雙波長掃描法、差示分光光度法和HPLC法等[1-9]，其中HPLC法靈敏度高、重復(fù)性好，因而本試驗(yàn)采用HPLC法測定鹽酸麻黃堿的含量。

取鹽酸麻黃堿對照品適量，加甲醇溶解，于200～400 nm波長范圍內(nèi)掃描，結(jié)果鹽酸麻黃堿在207 nm波長處的吸收強(qiáng)度最大，直線平直，同時參考相關(guān)文獻(xiàn)選用207 nm作為測定波長。

本試驗(yàn)分別考察了以下幾種流動相系統(tǒng)[3-9]：乙腈-甲醇-0．1% 磷酸溶液（4．5 ∶9 ∶86．5）、乙腈 -0．1% 磷酸溶液（含 0．1% 三乙胺）（3 ∶97）、甲醇 -0．1% 磷酸溶液（5 ∶95）、乙腈 -0．02 mol／mL磷酸溶液（8 ∶92）、乙腈 -0．1% 磷酸溶液（4 ∶96），其中以乙腈 -0．1%磷酸溶液（4∶96）系統(tǒng)的色譜峰對稱性好，供試品溶液中所測組分分離度好，無雜質(zhì)干擾。原有文獻(xiàn)中測定的流動相系統(tǒng)對柱子的損害大，對柱效影響大，而本研究所用流動相系統(tǒng)比原有流動相系統(tǒng)效果好[10]。此外，還對柱溫 30，35，40，45℃進(jìn)行了試驗(yàn)，其中40℃效果好，故柱溫設(shè)定為40℃。

在供試品溶液的制備上，對供試品的提取方法、提取溶劑、提取時間進(jìn)行了考察，結(jié)果采用70%甲醇溶液作為提取溶劑，超聲40 min，供試品溶液中鹽酸麻黃堿含量高、雜質(zhì)少。提取效果優(yōu)于國家藥品監(jiān)督管理局標(biāo)準(zhǔn)（試行）中的酸性提取方法，也優(yōu)于文獻(xiàn)[10]的提取方法，便于操作，提高了效率。

本試驗(yàn)建立的測定石杏痰咳片中鹽酸麻黃堿含量的HPLC法，色譜分離和線性關(guān)系良好，重復(fù)性及回收率均符合要求，且準(zhǔn)確、靈敏、穩(wěn)定和快速，可作為本品的質(zhì)量控制方法。

[1]國家藥典委員會．中華人民共和國藥典（一部）[M]．北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010:301．

[2]WS-5442(B-0442)，國家藥品監(jiān)督管理局標(biāo)準(zhǔn)（試行）[S]．

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