HPLC法測(cè)定西伯利亞接骨木中槲皮素、蘆丁的含量

李 莉， 王婷媛， 熱娜·卡斯木

(新疆醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院， 烏魯木齊 830011)

西伯利亞接骨木(SambucussibiricaNakai)為忍冬科接骨木屬植物。其藥用歷史悠久，為哈薩克民族常用藥。西伯利亞接骨木始載于《哈薩克藥志》[1]，春季采皮，夏季采嫩枝，切成小段，曬干備用。性味辛、溫，入骨節(jié)。主要治療骨折、跌打損傷、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、腎炎等。是新疆獨(dú)一無(wú)二的特殊稀貴資源，具有很高的藥用價(jià)值。其主要含有三萜苷元類(lèi)化合物、甾醇類(lèi)化合物、酚酸類(lèi)化合物[2-3]、芹菜素、山奈酚、槲皮素、木犀草素、蘆丁、花青素等多種黃酮類(lèi)成分及氰苷[4-6]、木脂素類(lèi)等[7]。蘆丁具有抗炎、鎮(zhèn)痛、抗氧化、抗病毒、抗腫瘤等作用[8-9]。槲皮素具有抗炎、鎮(zhèn)痛、抗病毒、抗腫瘤、降血脂等作用[10]。本實(shí)驗(yàn)首次采用HPLC方法建立西伯利亞接骨木中蘆丁、槲皮素含量的測(cè)定方法，對(duì)新疆不同產(chǎn)地西伯利亞接骨木進(jìn)行質(zhì)量對(duì)比研究，為西伯利亞接骨木藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)建立及合理開(kāi)發(fā)利用提供理論依據(jù)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

島津LC系列高效液相色譜儀， LC-20AB高壓泵，SPD-20A檢測(cè)器，CTO-10ASVP柱溫箱，AB135-S型電子天平(梅特勒-托利多儀器有限公司)，高功率數(shù)控超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)。

1.2 試藥

西伯利亞接骨木(產(chǎn)于小東溝、富蘊(yùn)、北屯、福海)，藥材經(jīng)新疆醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院帕麗達(dá)·阿布力孜教授鑒定為西伯利亞接骨木(SambucussibiricaNakai)。槲皮素(中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)：100080-200406)，蘆丁(中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)：100080-200707)。色譜甲醇(美國(guó)sigma，批號(hào)wxbb1914v)，超純水，其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：Agilent C18(4.6 mm×250 mm, 5 μm)；流動(dòng)相：甲醇-0.1%磷酸水溶液(49∶51)[11-13]；流速：1 mL/min；柱溫：25℃；檢測(cè)波長(zhǎng)：254 nm；進(jìn)樣量：10 μL。在此色譜條件下，樣品中蘆丁、槲皮素出峰時(shí)間(tR)分別為6.063、16.462 min，并與其他峰均能達(dá)到基線分離，色譜圖見(jiàn)圖1、2。

2.2 對(duì)照品溶液制備

精密稱(chēng)取蘆丁對(duì)照品25 mg，置于25 mL的容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度,搖勻, 得1 mg/mL的儲(chǔ)備液。分別吸取1 mg/mL蘆丁對(duì)照品儲(chǔ)備液1、2、3、4 mL,置于5 mL的容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度,搖勻,得到0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mg/mL蘆丁系列溶液。精密稱(chēng)取槲皮素對(duì)照品10 mg，置于50 mL的容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度,搖勻, 得到0.2 mg/mL槲皮素溶液，吸取1 mL槲皮素溶液置于10 mL容量瓶中得到20 μg/mL儲(chǔ)備液。分別吸取槲皮素儲(chǔ)備液0.4、1、2、3、4 mL，置于10 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度,搖勻,得到0.8、2、4、6、8 μg/mL的槲皮素系列溶液。

2.3 供試品溶液制備

精密稱(chēng)取西伯利亞接骨木粉末(過(guò)60目篩) 0.5 g，加15 mL 60%乙醇，稱(chēng)重，超聲提取30 min，補(bǔ)足失重，取上清液，以0.22 μm濾膜過(guò)濾，得供試品溶液。

2.4 線性關(guān)系考察

將蘆丁、槲皮素對(duì)照品儲(chǔ)備液采用甲醇溶液稀釋成0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mg/mL的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液和0.8、2、4、6、8 μg/mL的槲皮素標(biāo)準(zhǔn)溶液。分別吸取10 μL進(jìn)樣。以濃度(X)為橫坐標(biāo)，峰面積(Y)為縱坐標(biāo)，進(jìn)行回歸分析。結(jié)果蘆丁回歸方程為Y=2.1×107X-498 656(r=0.999 9);槲皮素回歸方程為Y=23 681X+436.5(r=0.999 7)。表明蘆丁在0.2～1.0 mg/mL濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，槲皮素在0.8～8 μg/mL濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.5 精密度試驗(yàn)

取蘆丁對(duì)照品溶液、槲皮素對(duì)照品溶液連續(xù)進(jìn)樣6次，每次進(jìn)樣10 μL，測(cè)定峰面積，計(jì)算RSD，結(jié)果蘆丁、槲皮素RSD分別為0.62%、0.79%,表明測(cè)定的精密度良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取同一份西伯利亞接骨木樣品溶液，分別于0、4、8、12、24、48 h測(cè)定峰面積，計(jì)算含量，結(jié)果蘆丁RSD=1.94%，槲皮素RSD=2.37%，表明樣品在48 h內(nèi)保持穩(wěn)定。

2.7 重復(fù)性試驗(yàn)

精密稱(chēng)取同一批西伯利亞接骨木樣品(富蘊(yùn))6份，每份約0.5 g,按“2.3”項(xiàng)下制備樣品溶液，分別進(jìn)樣10 μL，測(cè)定峰面積，計(jì)算含量，結(jié)果蘆丁RSD=2.58%，槲皮素RSD=2.82%,表明本方法重復(fù)性好。

2.8 加樣回收率試驗(yàn)

精密稱(chēng)取已知含量的藥材粉末(蘆丁13.3 mg/g，槲皮素0.198 5 mg/g)，分別精密加入一定量的蘆丁和槲皮素對(duì)照品，按“2.3”項(xiàng)下方法制備樣品溶液，進(jìn)樣10 μL，結(jié)果蘆丁平均回收率為100.38%，RSD=2.04%(n=9)；槲皮素平均回收率99.23%，RSD=0.96%(n=9)，見(jiàn)表1、2。

表1 蘆丁回收率測(cè)定結(jié)果

表2 槲皮素回收率測(cè)定結(jié)果

2.9 樣品測(cè)定結(jié)果

按“2.3”項(xiàng)下方法制備樣品溶液，每批平行3份，進(jìn)樣10 μL，測(cè)定蘆丁和槲皮素含量，蘆丁含量為7.785～13.300 mg/g,槲皮素含量為0.097 1～0.198 5 mg/g,見(jiàn)表3。

表3 不同產(chǎn)地西伯利亞接骨木中蘆丁，槲皮素含量測(cè)定結(jié)果(n=3)

3 結(jié)論

通過(guò)4個(gè)產(chǎn)地間蘆丁、槲皮素含量比較，發(fā)現(xiàn)富蘊(yùn)地區(qū)樣品蘆丁和槲皮素均高于其他產(chǎn)區(qū)。小東溝樣品槲皮素含量最低，北屯樣品蘆丁含量最低。各產(chǎn)地間西伯利亞接骨木中蘆丁、槲皮素含量存在差異，除了存在地域影響外，還與樣品生長(zhǎng)時(shí)間及采集時(shí)間有一定關(guān)系，所采樣品并沒(méi)有統(tǒng)一采集，所以樣品中有當(dāng)年枝及前一年枝，這對(duì)含量測(cè)定結(jié)果也存在影響。

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