麻櫟葉總黃酮提取工藝研究

羅 俠，賈小麗，劉文娟，劉克忠

麻櫟（QuercusacutissimaCarr.）為落葉喬木，屬殼斗科櫟屬植物。麻櫟是滁州市天然適生植物之一，資源豐富，據(jù)統(tǒng)計(jì)，滁州現(xiàn)有麻櫟53.2萬畝［1］，研究表明，麻櫟富含黃酮類、單寧類、三萜類、烷基糖苷類、酚類等多種生物活性物質(zhì)［2－6］。

黃酮類化合物（flavonoids）是植物重要的次生代謝產(chǎn)物，在植物的葉、花、果中廣泛存在。研究表明，黃酮類化合物具有抗氧化、抗自由基、抑菌、抗病毒等生物活性作用，應(yīng)用前景十分廣闊［7，8］。目前，對黃酮的研究多集中在櫟炭資源開發(fā)及造林等方面，而對麻櫟葉黃酮提取的研究報(bào)道較少。本文運(yùn)用正交試驗(yàn)優(yōu)化麻櫟葉黃酮的提取工藝，采用微波提取方法，以麻櫟葉總黃酮含量為指標(biāo)，考察影響黃酮類化合物提取的因素，為麻櫟的綜合開發(fā)和利用提供一定的理論基礎(chǔ)和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

實(shí)驗(yàn)用麻櫟葉于當(dāng)年秋季采摘自安徽省滁州市瑯琊山國家森林公園周圍，經(jīng)汪美英鑒定，保存于滁州學(xué)院標(biāo)本室。烘干，粉碎，過60目篩，保存干燥處備用。

1.2 儀器與設(shè)備

723C型可見分光光度計(jì)購自上海欣茂儀器有限公司。

1.3 方法

1.3.1 蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制及標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

參照文獻(xiàn)方法操作［9］。稱取一定量的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品溶于70%乙醇溶液，定容，制作蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液。準(zhǔn)確量取蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液分別為0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 和 6.0mL，依 次 加 入 1mL5%NaNO2溶液，搖勻，放置6min，加入1mL10%Al（NO3）3溶液，搖勻，反應(yīng)6min，再加入10mL 4%NaOH溶液，蒸餾水定容至25ml，放置15min。于510nm處測定吸光值（A），繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，吸光度Y和濃度 X的關(guān)系為：Y＝0.0098X－0.0153，R2＝0.9971，X的單位為μg／mL。

1.3.2 微波提取工藝的優(yōu)化試驗(yàn)

以乙醇濃度、固液比、提取時(shí)間等因素為考察對象，探索其對麻櫟葉黃酮類化合物提取率的影響，每個(gè)因素設(shè)4水平，采用正交實(shí)驗(yàn)，每個(gè)實(shí)驗(yàn)設(shè)3個(gè)重復(fù)，以獲得最佳提取條件。

1.3.3 黃酮含量的測定

取麻櫟葉樣品5.00g，按一定固液比加入一定濃度的乙醇提取一定時(shí)間。在不同微波功率下提取一定時(shí)間，取出，待冷卻至室溫，進(jìn)行微波輔助提取。反復(fù)真空抽濾，直至提取液近無色，濾液加石油醚萃取3次左右。減壓濃縮并定容至50ml，得提取液。量取5ml提取液按1.3.1測定的方法，在510nm波長下測定吸光值，根據(jù)蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程，計(jì)算提取液中黃酮類化合物質(zhì)量濃度。

按照公式計(jì)算總黃酮類化合物含量：總黃酮含量（mg／g）＝（Y×V）／WY為提取液中總黃酮質(zhì)量濃度mg／ml；V為提取液的體積ml；W 為樣品的干重g。

1.3.4 數(shù)據(jù)處理

采用DPS數(shù)據(jù)處理軟件進(jìn)行分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 正交試驗(yàn)

為確定麻櫟葉黃酮最佳提取工藝，采用正交實(shí)驗(yàn)法進(jìn)行。設(shè)計(jì)了乙醇濃度，提取時(shí)間，固液比3個(gè)因素對麻櫟葉黃酮提取率的影響，按照L9（34）進(jìn)行正交試驗(yàn)（表1），各實(shí)驗(yàn)設(shè)3個(gè)重復(fù)。

表1 L9（34）正交試驗(yàn)表

2.2 正交試驗(yàn)結(jié)果

實(shí)驗(yàn)以麻櫟葉總黃酮的含量為考察指標(biāo)，由表2極差分析結(jié)果表明，各因素對實(shí)驗(yàn)結(jié)果影響的大小順序?yàn)椋篈＞B＞C，即乙醇濃度影響最大，提取時(shí)間次之，固液比對實(shí)驗(yàn)結(jié)果影響最小。由表3可以得出，A和B兩個(gè)因素的影響達(dá)顯著水平（0.01＜P＜0.05），而C因素的影響不顯著。說明乙醇濃度和提取時(shí)間對麻櫟葉黃酮提取率的影響顯著，而固液比對提取率的影響不大。其最佳提取工藝組合為A2B2C2，即乙醇濃度60%，提取時(shí)間為每次60min；固液比為1：20，此時(shí)麻櫟葉黃酮提取率最高。

表2 正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果

表3 正交實(shí)驗(yàn)方差分析結(jié)果

2.2 驗(yàn)證試驗(yàn)

為考察上述優(yōu)選提取工藝的穩(wěn)定性，稱取5g麻櫟葉粉，根據(jù)正交試驗(yàn)的結(jié)果，加入60%的乙醇，提取時(shí)間取60min，固液比為1：20，進(jìn)行重復(fù)性試驗(yàn)（n＝3），分別測定麻櫟葉總黃酮提取量，計(jì)算其平均提取量的結(jié)果為2.40mg／g，說明該工藝穩(wěn)定可行。

3 結(jié)論

采用微波提取麻櫟葉總黃酮，正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，乙醇濃度和提取時(shí)間對麻櫟葉總黃酮提取率有顯著的影響（（0.01＜P＜0.05）），而固液比影響不明顯。各因素對麻櫟葉總黃酮提取率影響的大小順序?yàn)椋篈＞B＞C，即乙醇濃度影響最大，提取時(shí)間次之，固液比對實(shí)驗(yàn)結(jié)果影響最小。麻櫟葉黃酮類化合物最佳提取工藝組合為A2B2C2，即乙醇濃度60%，提取時(shí)間為每次60min，固液比為1：20。實(shí)驗(yàn)結(jié)果為麻櫟葉黃酮類化合物的深入研究奠定理論基礎(chǔ)，為麻櫟作為保健品、藥品等資源開發(fā)提供技術(shù)保障。

［1］http：／／www.ahczly.gov.cn／main／model／newinfo／newinfo.do？infoId＝4607.生物質(zhì)能源樹種麻櫟綜合開發(fā)與營造林招商項(xiàng)目.2010.1.26.

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