膠原神經(jīng)再生室復(fù)合CNTF修復(fù)周?chē)窠?jīng)損傷的作用

王宇博，丁新玲，張春光

（赤峰學(xué)院 醫(yī)學(xué)院，內(nèi)蒙古 赤峰 024000）

膠原神經(jīng)再生室復(fù)合CNTF修復(fù)周?chē)窠?jīng)損傷的作用

王宇博，丁新玲，張春光

（赤峰學(xué)院 醫(yī)學(xué)院，內(nèi)蒙古 赤峰 024000）

目的：討論應(yīng)用膠原蛋白制備神經(jīng)再生室復(fù)合CNTF（睫狀神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子）修復(fù)外周神經(jīng)缺損的效果.方法：選取30只SD大鼠，隨機(jī)分為三組，A組膠原神經(jīng)再生室復(fù)合CNTF組、B組單純膠原神經(jīng)再生室組、C組原位神經(jīng)移植組.術(shù)后不同時(shí)期進(jìn)行大體觀察,并于術(shù)后16周進(jìn)行電生理、組織學(xué)、電鏡觀察及圖像分析方法評(píng)價(jià)神經(jīng)再生效果.結(jié)果：術(shù)后16周A和C組的神經(jīng)傳導(dǎo)速度比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，均優(yōu)于B組，且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；再生神經(jīng)纖維數(shù)目、直徑及髓鞘厚度的比較，A和C組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，均優(yōu)于B組，且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）.結(jié)論：應(yīng)用膠原神經(jīng)再生室復(fù)合CNTF是一種有效的修復(fù)周?chē)窠?jīng)缺損的方法.

膠原；再生室；CNTF；周?chē)窠?jīng)損傷

目前認(rèn)為應(yīng)用神經(jīng)再生室修復(fù)是周?chē)窠?jīng)損傷是一種較好方法，而用于制作神經(jīng)再生室材料的選擇中，復(fù)合型材料的研究日漸增多.膠原蛋白是細(xì)胞外基質(zhì)的重要組成部分，被證實(shí)是制備神經(jīng)再生室較為合適的天然材料[1]，本實(shí)驗(yàn)利用膠原神經(jīng)再生室復(fù)合CNTF橋接損傷神經(jīng)兩斷端，并觀察其對(duì)神經(jīng)再生的作用.

1 材料與方法

1.1 神經(jīng)再生室的制備：

利用10gI型膠原蛋白（美國(guó)sigma公司）制備成長(zhǎng)約12mm長(zhǎng)度的膠原神經(jīng)再生室，將制備好的膠原神經(jīng)再生室放入-80℃冰箱冷凍過(guò)夜,取出后真空冷凍干燥24小時(shí)，取出放入2%京平尼溶液中，置于37℃溫箱中交聯(lián)，自然干燥后放置于-4℃環(huán)境下保存，以上操作在無(wú)菌條件下進(jìn)行.

1.2 動(dòng)物分組和模型制備

選取30只SD大鼠，隨機(jī)分為A、B、C三組，每組10只.使用10%水合氯醛（0.3ml/100g）行腹腔麻醉，無(wú)菌條件下暴露坐骨神經(jīng)，三組均造成約10mm的神經(jīng)缺損，A組用膠原神經(jīng)再生室橋接神經(jīng)缺損兩斷端各1mm,并向再生室內(nèi)注入含50μg/ mlCNTF，B組用膠原神經(jīng)再生室橋接神經(jīng)缺損兩斷端各1mm后在再生室內(nèi)注入生理鹽水，C組自體神經(jīng)原位移植，手術(shù)完畢縫合切口.

1.3 實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目

（1）實(shí)驗(yàn)動(dòng)物觀察：術(shù)后常規(guī)觀察實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的切口愈合、足部皮膚改變及患肢情況.術(shù)后16周,觀察神經(jīng)再生室降解以及坐骨神經(jīng)再生情況.（2）電生理監(jiān)測(cè)：手術(shù)后16周，原位暴露坐骨神經(jīng)，將記錄電極刺入小腿三頭肌,刺激電極依次置于再生神經(jīng)兩端,刺激神經(jīng)，對(duì)三組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的神經(jīng)傳導(dǎo)速度進(jìn)行測(cè)定.（3）光鏡觀察：將再生神經(jīng)由4%多聚甲醛固定、石蠟包埋后行H-E染色，鏡下觀察再生神經(jīng)的結(jié)構(gòu)及形態(tài).（4）電鏡觀察:從再生神經(jīng)遠(yuǎn)段取材,20g/L戊二醛固定,Epon812定向包埋,連續(xù)橫切片,鈾-鉛雙染,透射電鏡觀察神經(jīng)再生情況.（5）采用圖像分析系統(tǒng)：計(jì)算三組遠(yuǎn)端再生神經(jīng)纖維數(shù)目、再生神經(jīng)纖維直徑及髓鞘厚度進(jìn)行比較.

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2 結(jié)果

2.1 大體觀察

術(shù)后三組大鼠術(shù)后切口均愈合良好，患肢拖行，無(wú)疼痛反應(yīng).術(shù)后第2周開(kāi)始三組大鼠均出現(xiàn)不同程度的足部腫脹，第3周三組陸續(xù)出現(xiàn)足部皮膚潰瘍，以B組最重，第8周三組大鼠，足部潰瘍基本愈合，B組足部潰瘍愈合略晚；第16周按原切口，暴露坐骨神經(jīng)，A、B組再生室降解變薄，A組再生神經(jīng)較B組略粗，與兩端神經(jīng)連接良好，無(wú)明顯的結(jié)締組織增生，與周?chē)M織沒(méi)有明顯粘連，C組自體神經(jīng)移植處兩端膨大隆起，可見(jiàn)結(jié)締組織增生.

2.2 神經(jīng)電生理測(cè)定結(jié)果

術(shù)后16周，各組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的神經(jīng)傳導(dǎo)速度均有所恢復(fù)，A與C組神經(jīng)傳導(dǎo)速度比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），均優(yōu)于B組，且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），結(jié)果見(jiàn)表1.

表1 術(shù)后16周神經(jīng)傳導(dǎo)速度比較（±s）

表1 術(shù)后16周神經(jīng)傳導(dǎo)速度比較（±s）

分組 n 運(yùn)動(dòng)神經(jīng)傳導(dǎo)速度（m/s）A組B組C組10 10 10 18.57±3.56 15.36±4.09 22.18±3.35

2.3 光鏡觀察

術(shù)后16周行HE染色后光鏡下觀察可見(jiàn)，三組再生神經(jīng)均長(zhǎng)入遠(yuǎn)端，A組及B組有髓神經(jīng)纖維數(shù)目多，排列規(guī)整而密集，軸突和髓鞘成熟度較好，束間結(jié)締組織較少，均優(yōu)于C組.

2.4 電鏡觀察

A組和C組再生神經(jīng)數(shù)目較多，神經(jīng)纖維直徑較為規(guī)整，髓鞘厚度較均勻一致，B組再生神經(jīng)數(shù)目較其他兩組少，神經(jīng)纖維直徑粗細(xì)不等，髓鞘厚度不均勻.

2.5 圖像分析

對(duì)三組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的遠(yuǎn)段處進(jìn)行圖像分析顯示，單位面積再生神經(jīng)纖維數(shù)、再生神經(jīng)纖維直徑及髓鞘厚度，A和C組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），均優(yōu)于B組，且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見(jiàn)表2.

表2 術(shù)后16周三組再生神經(jīng)纖維數(shù)目、再生神經(jīng)纖維直徑及髓鞘厚度比較（±s）

表2 術(shù)后16周三組再生神經(jīng)纖維數(shù)目、再生神經(jīng)纖維直徑及髓鞘厚度比較（±s）

組別 n 神經(jīng)纖維數(shù)目（根）神經(jīng)纖維直徑（μm）髓鞘厚度（μm）A組B組C組10 10 10 3589.36±319.26 3315.69±353.52 3675.82±506.31 4.05±0.36 3.53±0.23 4.17±0.31 0.45±0.02 0.36±0.05 0.49±0.07

3 討論

隨著顯微外科技術(shù)的發(fā)展，對(duì)于周?chē)窠?jīng)損傷的研究得到了很大的進(jìn)展.復(fù)合神經(jīng)材料制備再生室橋接神經(jīng)缺損是目前研究的熱點(diǎn)，多種材料復(fù)合制備再生室可以整合每種材料的優(yōu)點(diǎn)，從而對(duì)周?chē)窠?jīng)損傷達(dá)到更好的修復(fù)效果.

膠原蛋白是細(xì)胞外基質(zhì)的重要組成部分，組織相容性好，無(wú)免疫原性，能有效的促進(jìn)軸突的再生以及雪旺細(xì)胞向損傷處遷移，是制備神經(jīng)再生室較為理想的材料[2-3]，但是膠原蛋白在體內(nèi)環(huán)境下降解速度較快，不利于神經(jīng)軸突的通過(guò)，所以本實(shí)驗(yàn)選用京平尼對(duì)膠原蛋白進(jìn)行交聯(lián)，京平尼是中藥中杜仲所含物質(zhì)，對(duì)人體無(wú)毒副作用，交聯(lián)后能降低膠原蛋白的降解速度，有益于神經(jīng)在再生室內(nèi)生長(zhǎng)[4].CNTF對(duì)于神經(jīng)和肌肉的作用被人們所重視，CNTF可以促進(jìn)軸突通過(guò)再生室，增加軸突數(shù)目以及髓鞘的形成[5]，同時(shí)有研究表明CNTF能通過(guò)促進(jìn)運(yùn)動(dòng)神經(jīng)軸突的再生，能夠使支配區(qū)域的肌肉功能有較好的恢復(fù)作用[6-7].

應(yīng)用膠原蛋白制備神經(jīng)再生室，可以為神經(jīng)軸突的再生提供良好“微環(huán)境”，而神經(jīng)損傷時(shí)遠(yuǎn)端神經(jīng)的雪旺細(xì)胞內(nèi)CNTF減少，本實(shí)驗(yàn)在膠原神經(jīng)再生室內(nèi)添加外源性CNTF，與膠原蛋白共同促進(jìn)神經(jīng)軸突再生，增加軸突數(shù)目及成熟度，術(shù)后16周觀察可見(jiàn)膠原神經(jīng)再生室已經(jīng)基本降解，再生神經(jīng)由近端長(zhǎng)入遠(yuǎn)端，在神經(jīng)電生理檢測(cè)，形態(tài)學(xué)觀察以及圖像分析的結(jié)果中顯示膠原神經(jīng)再生室復(fù)合CNTF要優(yōu)于單純膠原神經(jīng)再生室，與自體神經(jīng)移植無(wú)明顯差異，說(shuō)明膠原蛋白復(fù)合CNTF制備再生室能夠較好的橋接外周神經(jīng)缺損，在今后研究中應(yīng)該繼續(xù)的尋求適宜的再生室厚度、彈性及通透性，促使CNTF吸附在再生室壁內(nèi)，通過(guò)再生室逐步降解達(dá)到緩釋CNTF的效果.

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1673-260X（2014）03-0038-02