豬流感的生物學(xué)特性及診斷方法

趙顯威 邵善英 鄒紅梅 胡翠清

豬流感病毒是正黏液病毒，可引起地方性豬群流行性感冒。世界衛(wèi)生組織將此前被稱為豬流感的新型致命病毒更名為H1N1甲型流感。豬流感是具有高度傳染性的豬只呼吸系統(tǒng)傳染病，其特點(diǎn)為發(fā)病急驟，突然發(fā)燒及傷風(fēng)，康復(fù)和發(fā)病一樣快。豬流感病毒與感染人類的流感病毒同屬，此病毒具人畜共同感染的特性，豬群發(fā)生豬流感通常與豬場引進(jìn)新豬群有關(guān)。

一、豬流感的生物學(xué)特性

1.抗原性 根據(jù)流感病毒的表面和內(nèi)部抗原特性，流感病毒可分為A、B 和C三個(gè)亞型。豬流感病毒屬于A 型流感病毒屬，A型流感病毒能夠引起豬急性呼吸道傳染病。A型和B型病毒的內(nèi)部抗原為核蛋白和基脂蛋白，性質(zhì)穩(wěn)定，可用血清學(xué)方法區(qū)分。豬流感病毒的抗原性較強(qiáng)，被感染的動(dòng)物一般都能產(chǎn)生較高水平的抗體。

2.血凝特性 其血凝譜相當(dāng)廣泛，在適當(dāng)條件下，豬流感病毒能凝集包括雞、兔、牛等動(dòng)物和人的紅細(xì)胞。豬流感病毒的血凝活性并不一致，同一代次、同一亞型、不同毒株的血凝價(jià)相差很大。豬流感病毒的血凝活性容易被破壞，血凝素具有熱不穩(wěn)定性，60℃處理10分鐘即可滅活。

3.增殖特性 犢牛腎細(xì)胞、胎豬肺細(xì)胞、豬腎細(xì)胞、雞胚成纖維細(xì)胞、人二倍體細(xì)胞等動(dòng)物細(xì)胞的豬流感病毒的感受性都很高，通過研究，雞胚對豬流感病毒的易感性高于細(xì)胞。因此，通常采用雞胚進(jìn)行病料培養(yǎng)。病毒接種細(xì)胞，也能產(chǎn)生細(xì)胞病變，表現(xiàn)為細(xì)胞圓縮和脫落。但細(xì)胞經(jīng)連續(xù)傳代，病毒對細(xì)胞的感染性會(huì)降低，豬流感疫苗的生產(chǎn)通常采用雞胚培養(yǎng)。

二、豬流感的診斷方法

豬流感的診斷可通過剖檢觀察，也可從病豬的樣品中分離和培養(yǎng)豬流感病毒。豬流感病毒的快速、準(zhǔn)確的檢測方法為抗原檢測，由于病毒的敏感性比較高高，所以通常被認(rèn)為是豬流感診斷的“金標(biāo)準(zhǔn)”。目前，檢測常用的方法有血凝試驗(yàn)和血凝抑制試驗(yàn)、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)、免疫熒光技術(shù)和免疫組化技術(shù)。

1.血凝試驗(yàn)和血凝抑制試驗(yàn)?血凝素蛋白存在于豬流感病毒表面，但一些動(dòng)物（雞、豚鼠和人的O型血等）血凝素受體附著在紅細(xì)胞表面，由于豬流感病毒粒子的吸附作用使紅細(xì)胞產(chǎn)生凝集現(xiàn)象，稱為血凝試驗(yàn)，相應(yīng)的抗血清可抑制豬流感病毒的吸附凝集作用，稱血凝抑制試驗(yàn)。方便、快捷、易于操作及敏感性、特異性好是血凝試驗(yàn)和血凝抑制試驗(yàn)特有的優(yōu)勢，常被用于培養(yǎng)物中豬流感病毒的檢測。

2.免疫組化檢測 研究者用中性甲醛固定含有豬流感病毒的組織，然后通過石蠟包埋組織，進(jìn)行免疫組化研究。研究者在確認(rèn)含有病毒的30例組織中，通過免疫組化技術(shù)檢測到28例組織含有豬流感病毒。

3.酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn) 操作簡便、特異性強(qiáng)、敏感性高，易于直接用眼觀察，可進(jìn)行大量樣本的檢測，適于基層和現(xiàn)場的快速檢測。酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)是近代血清學(xué)檢測上革命性、標(biāo)志性的新成果。研究者通過建立雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)，可檢測出禽源、馬源、豬源和人源的A型流感病毒?？乖东@酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)，能將純化病毒的最低檢測量減少至1納克/毫升。

4.分子診斷技術(shù) 傳統(tǒng)的診斷方法操作比較繁瑣，而且診斷的重復(fù)性差。在傳統(tǒng)方法的基礎(chǔ)上，對病毒進(jìn)行分離和亞型鑒定，然后用分子生物學(xué)技術(shù)進(jìn)行快速診斷，主要有聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）、熒光定量PCR、基因芯片和蛋白芯片等技術(shù)，上述技術(shù)特異性強(qiáng)、診斷速度快、靈敏性高，已廣泛應(yīng)用于實(shí)驗(yàn)室的病毒診斷。

5.免疫熒光技術(shù) 主要用于樣品的快速檢測，敏感性強(qiáng)、特異性高是其最大優(yōu)點(diǎn)。研究者通過使用單克隆抗體的間接免疫熒光技術(shù)對豬鼻上皮細(xì)胞中的豬流感病毒抗原進(jìn)行檢測，特異性熒光出現(xiàn)在感染細(xì)胞的細(xì)胞漿和細(xì)胞核內(nèi)。另外，免疫熒光技術(shù)與雞胚分離病毒一樣敏感，能在短短的數(shù)小時(shí)內(nèi)快速分析出診斷結(jié)果。