禽流感研究進(jìn)展

張鑫 楊作豐 董毅

禽流感是由正黏病毒科流感病毒屬A型流感病毒引起的禽類烈性傳染病，曾給養(yǎng)禽生產(chǎn)造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失，是養(yǎng)禽業(yè)的最大威脅。世界各國政府都十分重視，世界動(dòng)物衛(wèi)生組織（OIE）將該病列為A類動(dòng)物疫病，我國政府也將其列為一類動(dòng)物疫病。

一、禽流感病毒

根據(jù)流感病毒核蛋白和基質(zhì)蛋白抗原性的不同，分為A、B、C三個(gè)血清型，分別稱為甲型、乙型和丙型流感病毒。A、B、C三型病毒除抗原性有差異外，在致病性等方面還有不同的特點(diǎn)，A型流感除感染禽外，還感染許多其他屬的動(dòng)物，如馬、豬、海豹等，而B型和C型主要感染人。

1.病毒結(jié)構(gòu)及基因分型 A型禽流感病毒是單股負(fù)股RNA病毒，病毒顆粒呈多型性，球形居多，但新分離的多為絲狀，顆粒的最小直徑80～120納米，有囊膜和纖突，核衣殼呈螺旋對稱結(jié)構(gòu)。根據(jù)其表面的血凝素和神經(jīng)氨酸酶抗原結(jié)構(gòu)不同可分為若干亞型。迄今已發(fā)現(xiàn)15種HA亞型和9種NA亞型，可以產(chǎn)生135種不同的亞型組合。

2.病毒毒力及致病性 所有的禽流感病毒均屬A型流感病毒，但毒株不同其致病性也有較大差異。根據(jù)各毒株對禽類致病力的不同，將禽流感病毒毒株分為高致病性病毒株、低致病病毒株和不致病病毒株。歷史上高致病性的禽流感病毒主要由2個(gè)亞型（H5亞型和H7亞型）引起，但并不是所有H5亞型和H7亞型的毒株都是強(qiáng)毒株。

3.理化特性 禽流感病毒屬包膜病毒，對外界環(huán)境抵抗力較弱，對紫外線、干燥、熱以及大多數(shù)化學(xué)消毒劑均比較敏感。病毒在56℃、30分鐘或60℃、10分鐘可被滅活；一般氧化劑、堿類、醛類、酚類、含氯消毒劑等均可將環(huán)境中的禽流感病毒殺死，如pH=4的環(huán)境中60分鐘能使禽流感病毒滅活。病毒對低溫抵抗力較強(qiáng)，糞便中病毒的傳染性可在4℃下保存30～35天，20℃存活7天，在羽毛中可存活18天。

4.病毒的血凝性 禽流感病毒表面有血凝素，能夠使多種動(dòng)物的紅細(xì)胞發(fā)生凝集，而此種凝集能夠被特異性病毒血清所抑制。禽流感病毒能凝集的紅細(xì)胞種類很多，包括人、綿羊、山羊、豬、螺、驢、馬、兔、麻雀、雞、鴨等多種動(dòng)物紅血球。雖然雞新城疫病毒也能凝集紅細(xì)胞，但凝集的動(dòng)物種類與禽流感病毒有所不同，因此凝集試驗(yàn)可初步鑒別兩種病毒，可用血凝試驗(yàn)和血凝抑制試驗(yàn)進(jìn)行禽流感病毒和抗體的檢測。

二、國內(nèi)外流行情況及流行病學(xué)特征

19世紀(jì)70年代，Perooncito在意大利的雞群中首次發(fā)現(xiàn)禽流感病例，當(dāng)時(shí)稱為雞瘟，現(xiàn)已知是由禽流感病毒的高致病力毒株引起。Schafer在1955年證實(shí)1878年意大利暴發(fā)的雞瘟是由A型禽流感病毒引起的。意大利人Petek在1980年，分離到禽流感病毒H5N2；Todd和Rice在1930年曾撰文，高致病力禽流感已發(fā)生于奧地利、比利時(shí)、中國、法國、瑞士、英國、阿根廷、美國、荷蘭、埃及、巴西和日本。1924～1925年，美國發(fā)生了高致病力禽流感，疫情波及東部9個(gè)州，并于1929年再次暴發(fā)。高致病性禽流感在東歐、非洲和亞洲較為多發(fā)。20世紀(jì)整個(gè)60年代，歐洲和北美從火雞和鴨等家禽中分離到禽流感病毒。20世紀(jì)70年代疫病監(jiān)測研究顯示，野生鳥群在A型流感病毒的全球傳播過程中發(fā)揮了重要作用，人們在全世界范圍內(nèi)從多種鳥類中分離到禽流感病毒。1981年，在美國馬里蘭州召開第一屆國際禽流感學(xué)術(shù)討論會(huì)，會(huì)議上提出廢除雞瘟病名，改稱高致病性禽流行性感冒。

如今，在全球范圍內(nèi)均有禽流感疫情的報(bào)道，各個(gè)國家和地區(qū)引起疫情暴發(fā)的病毒亞型多種多樣，目前從世界各國發(fā)病雞中分離到的流感病毒種類包括：H5N1、H9N2、H5N2、H3N2、H3N1、H6N2、H7N7、H7N3、H7N2、H5N3、H5N4、H5N6、H5N9、H4N6、H14N5 等，但歷史上較嚴(yán)重的疫情暴發(fā)多數(shù)是由H5和H7亞型引起的。

1.宿主范圍 禽流感病毒能感染多種家禽和野禽，如雞、鴨、鵝、珍珠雞、火雞、鵪鶉等都可感染發(fā)病，但火雞、雞、鴨是家禽中自然條件下最常受感染的禽種，鴿子易感性稍低，但可帶毒或隱性感染，有時(shí)也會(huì)有大量死亡。各種日齡的雞和火雞都可感染發(fā)病死亡，水禽如雛鴨、雛鵝死亡率較高。不同品種的家禽感染禽流感的幾率不同，但目前尚未發(fā)現(xiàn)高致病性禽流感的發(fā)生與家禽的性別有關(guān)。

2.病毒的傳播病毒主要是通過接觸感染禽及其分泌物、排泄物、污染的水、墊草、飼料以及蛋托、種蛋等媒介傳播，也可通過病禽糞便中大量的病毒粒子污染空氣而傳播，人員和車輛往來也是傳播本病的重要因素。野鳥由于遷徙將病毒散播各地，被認(rèn)為是最可能導(dǎo)致家禽流感暴發(fā)的感染來源。病毒經(jīng)呼吸道或消化道感染。

3.流行及危害 本病一年四季均可發(fā)生，但冬、春季節(jié)較為多發(fā)，家禽、野禽和鳥類都對禽流感病毒敏感，從多種家禽和鳥類體內(nèi)分離出禽流感病毒。一般低致病性禽流感病毒多發(fā)于產(chǎn)蛋雞群，而高致病性禽流感可引起各種日齡的雞發(fā)病。在雞群中，通常最先感染的是產(chǎn)蛋雞，然后是青年雞，再次是雛雞，母雞感染本病后，引起受精率及出雛率降低，雛雞早期死亡率較高。

三、禽流感臨床癥狀和病理變化

1.臨床主要癥狀 患雞一般表現(xiàn)為呼吸道、腸道、生殖系統(tǒng)或神經(jīng)系統(tǒng)異常。急性死亡雞營養(yǎng)狀況良好，亞急性或慢性病死雞，瘦弱、脫水，皮膚及皮下干燥；眼、鼻有分泌物，雞冠及肉髯發(fā)紫或見水腫，有的顏面、頭部腫大；腳鱗出血；鴨、鵝等水禽多出現(xiàn)腹瀉和神經(jīng)癥狀，部分禽只角膜發(fā)炎，甚至失明。

2.病理變化 ①高致病性禽流感。呼吸道和消化道黏膜充血、出血；腺胃乳頭出血，腺胃和肌胃之間交界處黏膜點(diǎn)狀出血。輸卵管可見乳白色凝塊或分泌物；卵泡中充血、出血，呈紫紅、紫黑色，有的卵泡變形、破裂，卵黃液流入腹腔，形成卵黃性腹膜炎。腹部脂肪及心冠出血，胰腺和心肌組織局灶性壞死。腦部出現(xiàn)壞死病灶和神經(jīng)膠質(zhì)灶。血管增生。②低致病性禽流感病變不明顯，輕微病變可見于鼻竇，特點(diǎn)是纖維素性、漿液纖維素性、卡他性、黏液膿性或干酪性炎癥。氣管黏膜可能水腫并伴有漿液性或干酪樣的滲出物，氣囊可能增厚并有纖維素性腹膜炎和蛋黃性腹膜炎，在產(chǎn)蛋禽的輸卵管中可能有滲出物。

四、實(shí)驗(yàn)室診斷技術(shù)

禽流感實(shí)驗(yàn)室診斷方法主要包括病原分離與鑒定、血凝抑制試驗(yàn)、免疫擴(kuò)散試驗(yàn)、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)、聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）、反轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）、熒光PCR法、核酸序列分析法等。

1.血凝/血凝抑制試驗(yàn)（HA-HI） 是世界各國流感血清學(xué)監(jiān)測所普遍采用的方法，可以檢測禽血清中是否含有流感抗體。血凝/血凝抑制試驗(yàn)是亞型鑒定的常規(guī)方法，特異性較好，但缺點(diǎn)是操作復(fù)雜，結(jié)果判定時(shí)人為因素影響較大。

2.瓊脂凝膠免疫擴(kuò)散試驗(yàn)（AGID） 該方法可以檢出所有A型流感病毒抗體，但不能區(qū)分亞型，敏感性較低，尤其是對水禽抗體敏感性低。該方法可以用于未接種疫苗禽群的診斷，但對于接種疫苗的群體，檢出抗體的水平不能反映疫苗的免疫效果。

3.酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA） 該方法可以檢出所有A型流感病毒抗體，敏感性高，但不能區(qū)分亞型。該方法可以用于未接種疫苗禽群的診斷，但對于接種疫苗的群體，檢出抗體的水平不能反映疫苗的免疫效果。

4.反轉(zhuǎn)錄—聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（RT-PCR） 是目前應(yīng)用最多的禽流感診斷病原學(xué)檢測方法，其耗時(shí)相對較短，敏感性高于一般的ELISA等方法，低于病毒分離試驗(yàn)。由此獲得的病毒基因擴(kuò)增片段，可以作為進(jìn)一步的基因序列分析、分子流行病學(xué)分析等工作的基礎(chǔ)，該方法具有特異、快速、準(zhǔn)確的優(yōu)點(diǎn)。其局限性在于試驗(yàn)條件要求較高，需要在操作比較規(guī)范的分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行。

5.熒光RT-PCR 該方法耗時(shí)相對較短，不需要經(jīng)過核酸電泳就可以實(shí)時(shí)觀察到PCR結(jié)果，敏感性高于一般的RT-PCR等方法，低于病毒分離試驗(yàn)。其局限性在于試驗(yàn)條件要求較高，需要在操作比較規(guī)范的分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行。