• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    桑葉總黃酮對(duì)糖尿病高脂血癥大鼠血糖、血脂和胸主動(dòng)脈p22phox mRNA表達(dá)的影響

    2014-07-02 01:45:43張凇銘黃平杜靜靜
    關(guān)鍵詞:桑葉主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞

    張凇銘黃 平杜靜靜

    1浙江中醫(yī)藥大學(xué)第一臨床醫(yī)學(xué)院 杭州 310053 2浙江省中醫(yī)院

    ·論 著·

    桑葉總黃酮對(duì)糖尿病高脂血癥大鼠血糖、血脂和胸主動(dòng)脈p22phox mRNA表達(dá)的影響

    張凇銘1黃 平2杜靜靜1

    1浙江中醫(yī)藥大學(xué)第一臨床醫(yī)學(xué)院 杭州 310053 2浙江省中醫(yī)院

    目的探討桑葉總黃酮(FML)對(duì)糖尿病高脂血癥大鼠血糖、血脂和胸主動(dòng)脈p22phox mRNA表達(dá)的影響。方法60只雄性SD大鼠隨機(jī)分成空白組、模型組、FML低、中、高劑量組和西藥組,每組10只,觀察FML對(duì)大鼠血糖、血脂、胸主動(dòng)脈p22phox mRNA表達(dá)的影響。結(jié)果與空白組比較,模型組大鼠血糖、血脂顯著升高(P<0.01),胸主動(dòng)脈p22phox mRNA表達(dá)明顯上調(diào)(P<0.01)。與模型組比較,F(xiàn)ML中、高劑量組及西藥組大鼠血糖、血脂降低(P<0.05或P<0.01),F(xiàn)ML中、高劑量組及西藥組大鼠胸主動(dòng)脈p22phox mRNA表達(dá)明顯下調(diào)(P<0.05或P<0.01)。結(jié)論FML顯著降低糖尿病高脂血癥大鼠血糖、血脂水平,其機(jī)制可能與FML下調(diào)大鼠胸主動(dòng)脈p22phox mRNA表達(dá),進(jìn)而抑制NADPH氧化酶活化有關(guān)。

    大鼠;糖尿??;高脂血癥;桑葉總黃酮;p22phox mRNA;血糖;血脂

    有研究表明,糖尿病無(wú)論大血管還是微血管的并發(fā)癥都有同一種發(fā)病機(jī)制—即高糖損傷后產(chǎn)生的氧化應(yīng)激[1]。氧化應(yīng)激擾亂了組織的正常功能。NADPH氧化酶活化是生成氧自由基的關(guān)鍵[2],p22phox是導(dǎo)致NADPH酶活化的關(guān)鍵亞基[3]。也有研究表明,富含黃酮類化合物的植物提取物具有降低血脂、清除體內(nèi)自由基等功效[4]。本研究旨在通過(guò)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)探討桑葉總黃酮(total flavonoid of mulberry leaf,F(xiàn)ML)抑制大鼠胸主動(dòng)脈p22phox mRNA表達(dá)作用,同時(shí)觀察FML對(duì)血糖、血脂等指標(biāo)的影響,報(bào)道如下。

    1 實(shí)驗(yàn)材料

    1.1動(dòng) 物 雄性SD大鼠60只,體質(zhì)量(170±20)g,由浙江中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供,實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用許可證:SCXK(滬)2008-0016,購(gòu)自上海西普爾-必凱實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司,飼養(yǎng)于浙江中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物房。

    1.2藥物與試劑 桑葉總黃酮(FML)(純度:50.5%;規(guī)格:1kg/包,塑封;批號(hào)ZL121016;南京澤朗醫(yī)藥科技有限公司);鏈脲佐菌素(STZ)(純度:99.89%;規(guī)格:500mg/瓶;批號(hào)B64927,北京博愛(ài)港商貿(mào)中心);mRNA提取試劑(規(guī)格:50T;批號(hào)C周0584,世紀(jì)康為生物公司);RT-PCR試劑盒(規(guī)格:2500T/50ul反應(yīng)體系,批號(hào)372300101,北京鼎國(guó)生物有限公司);高糖高脂飼料(5%蛋黃粉、10%豬油、20%白糖、2%膽固醇、0.2%膽酸鈉、62.8%基礎(chǔ)飼料,浙江省醫(yī)學(xué)科學(xué)院)。

    2 實(shí)驗(yàn)方法

    2.1造模與分組 60只雄性SD大鼠依次編號(hào)為1~60號(hào),應(yīng)用隨機(jī)數(shù)字表法進(jìn)行完全隨機(jī)分組,隨后選取10只大鼠,作為空白組,予普通飼料喂養(yǎng)直到試驗(yàn)結(jié)束,其余50只大鼠按倪紅霞[5]高糖高脂飲食加STZ一次性腹腔注射法復(fù)制糖尿病高脂血癥大鼠模型,50只大鼠予高糖高脂飲食飼養(yǎng)4周,4周后所有大鼠禁食12h,空白組大鼠按30mg/kg腹腔注射pH4.4的檸檬酸緩沖液,其余50只大鼠一次性腹腔注射STZ(1%STZ 30mg/kg,現(xiàn)配),3天后所有大鼠測(cè)血糖及24h尿量,以血糖>16.7mmol/L,尿量大于空白組50%者為造模成功,成模后的大鼠依舊按隨機(jī)數(shù)字表法再次完全隨機(jī)分為5組,即模型組、FML低劑量組(0.4g/3mL,F(xiàn)ML)、FML中劑量組(0.8g/3mL,F(xiàn)ML)、FML高劑量組(1.6g/3mL,F(xiàn)ML)、羅格列酮與辛伐他汀聯(lián)合組(以下簡(jiǎn)稱西藥組,0.2mg羅格列酮+ 0.8mg辛伐他西/3mL),每組各10只,采用固定時(shí)間灌胃給藥方式進(jìn)行,空白組及模型組予灌胃等體積的生理鹽水,1天1次,持續(xù)給藥4周,治療期間模型組及治療組繼續(xù)給予高糖高脂飼料喂養(yǎng),直到試驗(yàn)結(jié)束。

    2.2標(biāo)本收集 給藥4周后處死全部大鼠,以10%水合氯醛0.3mL/100g腹腔注射麻醉大鼠,常規(guī)消毒鋪巾,打開(kāi)胸腔,心臟取血,抗凝管保存,剝離胸主動(dòng)脈,放入液氮罐中,隨后轉(zhuǎn)入-80℃冰箱保存待用。

    2.3觀察指標(biāo)及方法

    2.3.1血糖測(cè)定 采用強(qiáng)生血糖試紙及血糖儀,所有大鼠分別于造模前、給藥2周后及給藥4周后尾靜脈斷尾取血測(cè)血糖。

    2.3.2血脂指標(biāo)測(cè)定 取全血1~2mL,放入抗凝管中妥善保存,委托浙江中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心實(shí)驗(yàn)室測(cè)定CH、TG、LDL-C。

    2.3.3胸主動(dòng)脈p22phox mRNA表達(dá) 采用RTPCR法。嚴(yán)格按照動(dòng)物組織總mRNA提取試劑盒說(shuō)明書(shū)操作方法操作,提取SD大鼠胸主動(dòng)脈總RNA。0.5mLEp管中加入3μg總RNA,Oligo(dT)18引物1uL,dNTPs 1μL,5×First-strand 4μL,M-MLV 1uL,RNA酶抑制劑1μL,用RNase水補(bǔ)足至20μL,離心后,42℃保溫60min,95℃5min,4℃2min,冰上驟冷后得到cDNA。引物根據(jù)Gene Bank序列用Primer5.0軟件設(shè)計(jì)后由北京鼎國(guó)昌盛生物公司合成。p22phox的正向引物:5’-ACT CCC ATT GAG CCT AAA CC-3’;反向引物5’-GGA GCA ACA CCT TGG AAA C-3’;產(chǎn)物片段226bp。內(nèi)參GADPH正向引物:5’-ACC ACA GTC CAT GCC ATC AC-3’;反向引物:5’-TCC ACC ACC CTG TTG CTG TA-3’;產(chǎn)物片段452bp。PCR總體系10uL,其組成為cDNA 3μL,HS Taq 5μL,引物正反向各0.2μL,ddH2O 1.6μL。反應(yīng)條件為94℃預(yù)變性3min,94℃變性30s,63℃退火30s,72℃延伸30s,循環(huán)40次,72℃延伸10min。

    2.3.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS18.0軟件,數(shù)據(jù)以() 表示,計(jì)量資料進(jìn)行方差分析,組間均數(shù)兩兩比較采用LSD檢驗(yàn),P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

    3.1各組大鼠血糖比較 給藥2周和4周后FML低劑量組與模型組比較,雖有差異但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);FML中、高劑量組與模型組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);西藥組與模型組比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05,P<0.01),見(jiàn)表1。

    表1 各組給藥2周和4周血糖值比較() mmol/L

    表1 各組給藥2周和4周血糖值比較() mmol/L

    注:與空白組比較,△△P<0.01;與模型組比較,*P<0.05,**P<0.01

    ?

    3.2各組大鼠血脂比較 模型組與空白組各指標(biāo)比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01),說(shuō)明造模成功。FML中、高劑量組和西藥組大鼠總膽固醇和甘油三酯降低,與模型組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。FML低、中、高劑量組和西藥組LDL-C降低與模型組比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05,P<0.01),見(jiàn)表2。

    表2 各組血清CH、TG和LDL-C比較() mmol/L

    表2 各組血清CH、TG和LDL-C比較() mmol/L

    注:與空白組比較,△P<0.05,△△P<0.01;與模型組比較,*P<0.05,**P<0.01

    3.3FML對(duì)SD大鼠胸主動(dòng)脈p22phox mRNA表達(dá)的影響 模型組胸主動(dòng)脈p22phox mRNA表達(dá)量較空白組明顯上調(diào)(P<0.01)。FML低劑量組與模型組比較,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);FML中、高劑量組和西藥組與模型組比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05,P<0.01),見(jiàn)表3。

    表3 各組p22phox mRNA表達(dá)量比較() ng/mL

    表3 各組p22phox mRNA表達(dá)量比較() ng/mL

    注:與空白組比較,△△P<0.01;與模型組比較,*P<0.05,**P<0.01

    ?

    4 討論

    糖尿病是心血管疾病發(fā)病的重要危險(xiǎn)因素之一,高糖情況下內(nèi)皮細(xì)胞發(fā)生特異的功能改變導(dǎo)致血管脂質(zhì)斑塊形成是血管并發(fā)癥的主要表現(xiàn)。研究[6]表明,高糖有細(xì)胞毒性,降低細(xì)胞自由基清除功能,加速細(xì)胞凋亡。內(nèi)皮細(xì)胞發(fā)生功能改變的主要原因有:①氧化應(yīng)激增強(qiáng),體內(nèi)活性氧(reactive oxygen species,ROS)生成增多;②內(nèi)皮細(xì)胞凋亡;③誘發(fā)炎癥反應(yīng)。抑制細(xì)胞內(nèi)氧化應(yīng)激是保護(hù)內(nèi)皮細(xì)胞功能、防治糖尿病心血管并發(fā)癥的關(guān)鍵途徑之一[7]。

    ROS在內(nèi)皮細(xì)胞的生長(zhǎng)與損傷過(guò)程中起關(guān)鍵作用,低水平的ROS可以促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng),而高水平的ROS則可誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞凋亡。ROS的產(chǎn)生途徑有NOS失偶聯(lián)、NADPH氧化酶活化等,其中NADPH氧化酶活化是公認(rèn)的內(nèi)皮系統(tǒng)中最主要的ROS來(lái)源。NOX主要包括五個(gè)組分:p22phox、p47phox、Rac1、p67phox、p91phox[8]。p22phox是NADPH氧化酶活性必需亞單位。P22phox在72位和94位的組氨酸殘基是血紅蛋白的結(jié)合位點(diǎn),與NOX的功能密切相關(guān)。Christ等[9]用高濃度葡萄糖處理過(guò)的豬冠狀動(dòng)脈,分離出的細(xì)胞中能觀察到p22phox mRNA表達(dá)上調(diào),Talija等[10]提高內(nèi)皮細(xì)胞p22phox mRNA表達(dá)后發(fā)現(xiàn)細(xì)胞內(nèi)ROS顯著增加。這些研究提示p22phox參與血管內(nèi)皮細(xì)胞ROS的生成,增加氧化應(yīng)激反應(yīng)。

    桑葉異名鐵扇子,首載于《神農(nóng)本草經(jīng)》,桑葉性味甘、寒,甘所以益血,寒所以涼血,甘寒相合,故下氣而益陰,有補(bǔ)益之功,是中醫(yī)清熱解毒之要藥。1963年Sharat等首次報(bào)道桑葉水提液的降血糖作用,也有研究表明,富含黃酮類化合物的植物提取物具有降低血脂、降低ROS水平等功效。桑葉含豐富的黃酮類化合物,為純天然藥物,毒副作用小,適合糖尿病患者長(zhǎng)期服用。

    本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)經(jīng)FML治療后大鼠胸主動(dòng)脈p22phox mRNA相對(duì)表達(dá)量下調(diào),大鼠血糖、血脂指標(biāo)降低,提示FML有抑制p22phox mRNA表達(dá),降血糖、血脂的功效。其機(jī)制可能是:一方面FML下調(diào)p22phox mRNA表達(dá),減少NADPH氧化酶活化,抑制氧化應(yīng)激反應(yīng),保護(hù)血管內(nèi)皮細(xì)胞;另一方面降低體內(nèi)高糖環(huán)境,降低細(xì)胞毒性,減緩細(xì)胞凋亡。既往的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明,F(xiàn)ML具有降血脂作用,但并沒(méi)有說(shuō)明其降血脂的機(jī)制。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,F(xiàn)ML可以通過(guò)抑制氧化應(yīng)激關(guān)鍵活化酶必需亞單位p22phox mRNA表達(dá),達(dá)到保護(hù)內(nèi)皮細(xì)胞降低血脂防治糖尿病心血管并發(fā)癥,其作用大小與FML濃度有關(guān)。由于本實(shí)驗(yàn)樣本小,觀察時(shí)間短,尚存在一定不足,至于是否還有NADPH氧化酶亞單位參與ROS形成,F(xiàn)ML是否還作用于NADPH氧化酶的其他亞單位,F(xiàn)ML是否能具有預(yù)防炎癥反應(yīng),其降糖又是通過(guò)哪些途徑發(fā)生作用,有待進(jìn)一步研究。

    [1]Brownlee M.The pathobiology of diabetic complications:a unifying mechanism[J].Diabetes,2005,54(6):1615-1625.

    [2]De Champlain J,Wu R,Girouard H,et al.Oxidative stress in hypertension[J].Clinical and experimental hypertension,2004,26(7-8):593-601.

    [3]Sagar S,Kallo IJ,Kaul N,et al.Oxygen free radicals in es-sential hypertension[J].Molecular and Cellular Biochemistry,1992,111(1-2):103-108.

    [4]Rueckschloss U,Quinn MT,Holtz J,et al.Dose-dependent regulation of NAD(P)H oxidase expression by angiotensin II in human endothelial cells:protective effect of angiotensin II type 1 receptor blockade in patients with coronary artery disease[J].Arteriosclerosis,thrombosis,and vascular biology,2002,22(11):1845-1851.

    [5]倪紅霞.高糖高脂飲食誘導(dǎo)的大鼠Ⅱ型糖尿病模型[J].北華大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版),2006,7(5):440-442.

    [6]Irani K.Oxidant signaling in vascular cell growth,death,and survival:a review of the roles of reactive oxygen species in smooth muscle and endothelial cell mitogenic and apoptotic signaling[J].Circ Res,2000,87(3):179-183.

    [7]Quagliaro L,Piconi L,Assaloni R,et al.Intermittent high glucose enhances apoptosis related to xidative stress in human umbilical vein endothelial cells[J].Diabetes,2003,52(11):2795-2804.

    [8]Groemping Y,Lapouge K,Smerdon SJ,et al.Molecular basis ofphosphorylation-induced activation ofthe NADPH oxidase[J].Cell,2003,113(3):343-355.

    [9]Christ M,Bauresachs J,Liebetrau C,et al.Glucose increases endothelial-dependent superoxide formation in coronary arteries by NAD(P)H oxidase activation:attenuation by the 3-hydroxy-3-methylglutaryl coenzyme A reductase inhibitor atorvastatin[J].Diabetes,2002,51(8):2648-2652.

    [10]Matsushita H,Lee KH,and Tsao PS.Cyclic strain induces reactive oxygen species peoduction via an endothelial NAD(P)H oxidase[J].J Cell Biochem,2001,(Suppl 36):99-106.

    Effects of Total Flavonoids from Mulberry Leaves on Blood Glucose,Blood Lipid and the expression of P22phox mRNA in Thoracic Aorta in Diabetic and Hyperlipidemia Rats

    ZHANG Songming1,HUANG Ping2, Du Jingjing1.1 The First Clinical Medical College of Zhejiang University of Chinese Medicine,Hangzhou(310053), China;2 Zhejiang Provincial Hospital of TCM

    ObjectiveTo investigate the influence of total flavonoids from mulberry leaves(FML)on blood glucose,blood lipid and the expression of p22phox mRNA in thoracic aorta in rats with diabetes and hyperlipidemia.MethodsDiabetes and hyperlipidemia rats were used in this study.Sixty SD male rats were randomly into blank group,model group,treatment groups(high,middle,low dose of FML and western medicine group),10 in each group.The effect of FML on blood glucose,blood lipid and the expression of p22phox mRNA in thoracic aorta was observed.ResultsBlood glucose,blood lipid and the expression of p22phox mRNA in thoracic aorta in rats in model group were higher than those in blank group(P<0.01).Compared with model group,rats in middle and high dose of FML groups and western medicine group had lower blood glucose,blood lipid and decreased expression of p22phox mRNA in thoracic aorta(P<0.05 or P<0.01).ConclusionFML can inhibit levels of blood glucose and blood lipids in diabetes and hyperlipidemia rats.This effect may be due to decreasing the expression of p22phox mRNA in thoracic aorta and then the activation of NADPH oxidase.

    rats;diabetes;hyperlipidemia;flavonoids from mulberry leaves;p22phox mRNA;blood glucose;blood lipids

    2013-08-27

    浙江省科技廳、省團(tuán)委、教育廳基金資助項(xiàng)目(No.2012R410059)

    黃平,Tel:18958025557;E-mail:htyhp_63@163.com

    猜你喜歡
    桑葉主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞
    桑葉茶成“致富茶”
    陽(yáng)城:桑葉茶『火』了 農(nóng)民樂(lè)了
    淺議角膜內(nèi)皮細(xì)胞檢查
    Stanford A型主動(dòng)脈夾層手術(shù)中主動(dòng)脈假腔插管的應(yīng)用
    桑葉迷宮
    雌激素治療保護(hù)去卵巢對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷的初步機(jī)制
    Jeffery the Giant
    細(xì)胞微泡miRNA對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞的調(diào)控
    痰瘀與血管內(nèi)皮細(xì)胞的關(guān)系研究
    護(hù)理干預(yù)預(yù)防主動(dòng)脈夾層介入治療術(shù)后并發(fā)癥
    精品久久国产蜜桃| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 色视频在线一区二区三区| 国产一区二区在线观看日韩| 老熟女久久久| 国产精品国产三级国产专区5o| 韩国高清视频一区二区三区| 欧美丝袜亚洲另类| 久久久久国产网址| 国产高清不卡午夜福利| 久久久久国产网址| 久久久久久久久久久久大奶| 国产国语露脸激情在线看| 多毛熟女@视频| 最近中文字幕高清免费大全6| 精品少妇内射三级| 韩国av在线不卡| 男人舔女人的私密视频| 日韩欧美一区视频在线观看| 亚洲成av片中文字幕在线观看 | 性色avwww在线观看| 亚洲 欧美一区二区三区| 校园人妻丝袜中文字幕| 久久青草综合色| 日本爱情动作片www.在线观看| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久 | 日本爱情动作片www.在线观看| 婷婷色综合www| 久久久久网色| 国产精品99久久99久久久不卡 | av播播在线观看一区| 成人国产麻豆网| 精品午夜福利在线看| 久久 成人 亚洲| 一二三四在线观看免费中文在 | 欧美激情 高清一区二区三区| 久久鲁丝午夜福利片| 欧美最新免费一区二区三区| 最近中文字幕2019免费版| 伦理电影大哥的女人| 成人免费观看视频高清| 久久久久久久久久久免费av| 久久99蜜桃精品久久| 女人精品久久久久毛片| 黄色毛片三级朝国网站| 国产乱来视频区| 精品亚洲成a人片在线观看| 日韩在线高清观看一区二区三区| 免费观看在线日韩| 制服诱惑二区| 青青草视频在线视频观看| 午夜福利影视在线免费观看| 久久99热6这里只有精品| 极品少妇高潮喷水抽搐| 亚洲性久久影院| av有码第一页| 国产免费现黄频在线看| 亚洲成av片中文字幕在线观看 | 欧美日韩视频精品一区| 欧美日韩综合久久久久久| 国产探花极品一区二区| 热99久久久久精品小说推荐| 日本欧美视频一区| 少妇熟女欧美另类| 国产片特级美女逼逼视频| av电影中文网址| 亚洲高清免费不卡视频| xxxhd国产人妻xxx| 国产免费视频播放在线视频| 老司机影院成人| 欧美日韩av久久| 亚洲图色成人| 日韩,欧美,国产一区二区三区| 免费观看av网站的网址| 人人妻人人澡人人看| xxx大片免费视频| 国精品久久久久久国模美| 国内精品宾馆在线| 亚洲少妇的诱惑av| 国产伦理片在线播放av一区| a级毛片在线看网站| 26uuu在线亚洲综合色| 又粗又硬又长又爽又黄的视频| 精品少妇久久久久久888优播| av电影中文网址| 欧美日韩亚洲高清精品| 色5月婷婷丁香| 欧美xxⅹ黑人| 国产精品国产三级专区第一集| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久 | 欧美成人午夜免费资源| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀 | 国产熟女午夜一区二区三区| 亚洲精品国产色婷婷电影| 午夜老司机福利剧场| 国产一级毛片在线| 国产成人午夜福利电影在线观看| 成人毛片60女人毛片免费| 成人国语在线视频| 毛片一级片免费看久久久久| 久久久久久久大尺度免费视频| h视频一区二区三区| 免费av不卡在线播放| 老司机影院毛片| 永久免费av网站大全| 亚洲欧洲国产日韩| 飞空精品影院首页| 香蕉精品网在线| 国产精品.久久久| 超色免费av| 国产国拍精品亚洲av在线观看| 91精品伊人久久大香线蕉| 秋霞在线观看毛片| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 中文字幕人妻丝袜制服| 日韩中文字幕视频在线看片| 国产精品久久久久成人av| 三上悠亚av全集在线观看| 亚洲欧美成人精品一区二区| 男女啪啪激烈高潮av片| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91| 搡老乐熟女国产| 五月天丁香电影| 亚洲精品一区蜜桃| 国产毛片在线视频| 伦理电影大哥的女人| 国产精品.久久久| 国产精品欧美亚洲77777| 日韩中文字幕视频在线看片| 在线观看国产h片| 亚洲,一卡二卡三卡| 99九九在线精品视频| 热99国产精品久久久久久7| 男人爽女人下面视频在线观看| 高清欧美精品videossex| 搡老乐熟女国产| 男男h啪啪无遮挡| 精品久久久精品久久久| 亚洲五月色婷婷综合| 亚洲人与动物交配视频| 国产黄色视频一区二区在线观看| 我要看黄色一级片免费的| 亚洲国产精品一区三区| xxxhd国产人妻xxx| 亚洲高清免费不卡视频| av国产精品久久久久影院| 校园人妻丝袜中文字幕| 精品少妇内射三级| 18禁在线无遮挡免费观看视频| 99久久综合免费| 咕卡用的链子| 亚洲av免费高清在线观看| 在现免费观看毛片| 亚洲丝袜综合中文字幕| 中文字幕另类日韩欧美亚洲嫩草| 男女边吃奶边做爰视频| 国产亚洲精品久久久com| 丝瓜视频免费看黄片| 国产探花极品一区二区| 久久99蜜桃精品久久| 日韩中文字幕视频在线看片| 在线免费观看不下载黄p国产| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 全区人妻精品视频| 国产男人的电影天堂91| a 毛片基地| 亚洲五月色婷婷综合| 男女午夜视频在线观看 | 亚洲美女黄色视频免费看| av一本久久久久| 色视频在线一区二区三区| 天堂俺去俺来也www色官网| 成人午夜精彩视频在线观看| 亚洲精品视频女| 精品一区在线观看国产| 久久人人爽人人片av| 亚洲三级黄色毛片| 美女大奶头黄色视频| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91| 春色校园在线视频观看| 男人舔女人的私密视频| 在线天堂最新版资源| 日韩中字成人| 免费大片18禁| 九九爱精品视频在线观看| 高清视频免费观看一区二区| 黄片无遮挡物在线观看| 黑人高潮一二区| 高清不卡的av网站| 欧美精品高潮呻吟av久久| 久久人妻熟女aⅴ| 精品久久久久久电影网| 嫩草影院入口| 纯流量卡能插随身wifi吗| 捣出白浆h1v1| 欧美精品一区二区免费开放| 91久久精品国产一区二区三区| 丝袜脚勾引网站| 精品视频人人做人人爽| 男女边摸边吃奶| 一级a做视频免费观看| 在现免费观看毛片| av视频免费观看在线观看| 日本-黄色视频高清免费观看| 我的女老师完整版在线观看| a级毛片黄视频| 亚洲欧美色中文字幕在线| 99国产综合亚洲精品| 人人妻人人澡人人看| 亚洲 欧美一区二区三区| 自线自在国产av| 久久国产精品大桥未久av| 日韩不卡一区二区三区视频在线| 美女福利国产在线| 女人被躁到高潮嗷嗷叫费观| 黑丝袜美女国产一区| 国产成人免费观看mmmm| 中文乱码字字幕精品一区二区三区| 精品亚洲乱码少妇综合久久| 免费高清在线观看日韩| 日韩大片免费观看网站| 一级毛片我不卡| 精品亚洲成a人片在线观看| 亚洲成人av在线免费| 亚洲国产精品专区欧美| 高清欧美精品videossex| 久久久久久久亚洲中文字幕| 亚洲人成网站在线观看播放| 国产 一区精品| av国产精品久久久久影院| 欧美 日韩 精品 国产| 国产成人精品福利久久| av福利片在线| 国产在视频线精品| 黑人巨大精品欧美一区二区蜜桃 | 亚洲内射少妇av| 人妻人人澡人人爽人人| 久久婷婷青草| 欧美精品一区二区免费开放| 在线观看国产h片| 韩国高清视频一区二区三区| 欧美激情国产日韩精品一区| 国产女主播在线喷水免费视频网站| 黄片无遮挡物在线观看| 国产免费视频播放在线视频| 亚洲国产成人一精品久久久| 十八禁网站网址无遮挡| 亚洲av成人精品一二三区| 国产激情久久老熟女| 亚洲精品456在线播放app| 成年人免费黄色播放视频| 波多野结衣一区麻豆| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 99热6这里只有精品| 免费看光身美女| 99热国产这里只有精品6| 国产精品久久久久久av不卡| videos熟女内射| 日韩av在线免费看完整版不卡| 日韩成人av中文字幕在线观看| 国产爽快片一区二区三区| 在线天堂最新版资源| 又粗又硬又长又爽又黄的视频| 在线免费观看不下载黄p国产| av在线老鸭窝| 成人亚洲欧美一区二区av| av一本久久久久| 久热久热在线精品观看| 国产成人精品久久久久久| 一级a做视频免费观看| 建设人人有责人人尽责人人享有的| 成年人免费黄色播放视频| 最黄视频免费看| 日日爽夜夜爽网站| 日韩视频在线欧美| 国产极品天堂在线| 9色porny在线观看| 精品亚洲乱码少妇综合久久| 精品酒店卫生间| 欧美国产精品一级二级三级| 精品99又大又爽又粗少妇毛片| 性高湖久久久久久久久免费观看| 2022亚洲国产成人精品| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 国产午夜精品一二区理论片| 制服诱惑二区| 老司机亚洲免费影院| 性高湖久久久久久久久免费观看| 2018国产大陆天天弄谢| 欧美亚洲日本最大视频资源| 在线天堂最新版资源| 亚洲av福利一区| 亚洲国产欧美日韩在线播放| 久久久国产精品麻豆| 各种免费的搞黄视频| 熟女人妻精品中文字幕| 成人亚洲精品一区在线观看| 男女国产视频网站| 久久精品国产亚洲av天美| 男女啪啪激烈高潮av片| 日日摸夜夜添夜夜爱| 国产亚洲av片在线观看秒播厂| 天天操日日干夜夜撸| 国产视频首页在线观看| 自线自在国产av| 一本一本久久a久久精品综合妖精 国产伦在线观看视频一区 | 妹子高潮喷水视频| 波野结衣二区三区在线| 大香蕉久久成人网| 成人无遮挡网站| 久久狼人影院| 中文欧美无线码| 18禁在线无遮挡免费观看视频| 国产淫语在线视频| 91国产中文字幕| 日本av手机在线免费观看| 免费看不卡的av| 26uuu在线亚洲综合色| 免费日韩欧美在线观看| 99国产精品免费福利视频| 日本vs欧美在线观看视频| 国产黄色视频一区二区在线观看| 国产一区二区激情短视频 | 亚洲欧美日韩另类电影网站| 精品少妇黑人巨大在线播放| 成人国产av品久久久| 一区二区三区乱码不卡18| 91成人精品电影| 高清黄色对白视频在线免费看| 久久影院123| 成年av动漫网址| 最近最新中文字幕大全免费视频 | 亚洲高清免费不卡视频| 十八禁网站网址无遮挡| 九色成人免费人妻av| 丝袜在线中文字幕| 永久网站在线| 亚洲精品久久午夜乱码| 十八禁高潮呻吟视频| av网站免费在线观看视频| 观看美女的网站| 亚洲欧美色中文字幕在线| 69精品国产乱码久久久| 在现免费观看毛片| 亚洲国产精品999| 日本av免费视频播放| 99热这里只有是精品在线观看| 精品人妻偷拍中文字幕| 日韩 亚洲 欧美在线| 亚洲国产精品一区二区三区在线| 亚洲综合精品二区| 香蕉丝袜av| 亚洲婷婷狠狠爱综合网| 久久国产精品大桥未久av| 99久久综合免费| 成人亚洲精品一区在线观看| 丰满少妇做爰视频| 国产有黄有色有爽视频| 亚洲av免费高清在线观看| 免费女性裸体啪啪无遮挡网站| 99九九在线精品视频| 亚洲av电影在线进入| 一二三四中文在线观看免费高清| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片| 99热这里只有是精品在线观看| 成人亚洲欧美一区二区av| 伦理电影免费视频| 十八禁高潮呻吟视频| 日本与韩国留学比较| 青春草亚洲视频在线观看| 丰满饥渴人妻一区二区三| 熟女电影av网| 亚洲精品久久午夜乱码| 久久婷婷青草| 亚洲av.av天堂| 9热在线视频观看99| a级片在线免费高清观看视频| 精品一区二区免费观看| 另类精品久久| 国产成人精品在线电影| 国产综合精华液| 午夜影院在线不卡| 久久99蜜桃精品久久| 卡戴珊不雅视频在线播放| 秋霞伦理黄片| 久久精品久久久久久噜噜老黄| 欧美精品亚洲一区二区| 精品国产一区二区三区久久久樱花| 黑人欧美特级aaaaaa片| 午夜免费观看性视频| 亚洲天堂av无毛| 一边亲一边摸免费视频| 婷婷成人精品国产| 亚洲熟女精品中文字幕| 水蜜桃什么品种好| 成年美女黄网站色视频大全免费| 91精品伊人久久大香线蕉| 国产av一区二区精品久久| 一区在线观看完整版| 色婷婷久久久亚洲欧美| 成人免费观看视频高清| 搡女人真爽免费视频火全软件| 大香蕉97超碰在线| 女性生殖器流出的白浆| 综合色丁香网| 五月开心婷婷网| 一级毛片电影观看| 熟女人妻精品中文字幕| 成人毛片60女人毛片免费| 好男人视频免费观看在线| 午夜免费男女啪啪视频观看| 免费av中文字幕在线| 老女人水多毛片| 日本av免费视频播放| 久热久热在线精品观看| 蜜臀久久99精品久久宅男| 亚洲欧美清纯卡通| 国产精品.久久久| 成人漫画全彩无遮挡| 久久精品aⅴ一区二区三区四区 | 波野结衣二区三区在线| 一本一本久久a久久精品综合妖精 国产伦在线观看视频一区 | 国产乱来视频区| 久久久久国产网址| 日韩制服骚丝袜av| 十八禁高潮呻吟视频| 日韩伦理黄色片| 久久99热6这里只有精品| 精品福利永久在线观看| 男女国产视频网站| 欧美精品高潮呻吟av久久| 一级a做视频免费观看| 久久久国产欧美日韩av| 免费女性裸体啪啪无遮挡网站| 美女内射精品一级片tv| 亚洲在久久综合| 久久ye,这里只有精品| 丁香六月天网| 亚洲天堂av无毛| 少妇熟女欧美另类| 久久免费观看电影| 久久久久精品性色| 1024视频免费在线观看| 国产精品嫩草影院av在线观看| 久久久久久久久久久免费av| 91在线精品国自产拍蜜月| 欧美成人精品欧美一级黄| 视频区图区小说| 亚洲精品456在线播放app| 亚洲精品久久久久久婷婷小说| 在现免费观看毛片| 久久人妻熟女aⅴ| 在线观看免费高清a一片| 国产不卡av网站在线观看| 国产成人免费观看mmmm| 免费黄网站久久成人精品| 亚洲成国产人片在线观看| 在线精品无人区一区二区三| 丰满乱子伦码专区| 久久这里有精品视频免费| 黑人高潮一二区| 九九爱精品视频在线观看| 亚洲精品视频女| av女优亚洲男人天堂| 九九在线视频观看精品| 国产老妇伦熟女老妇高清| 精品熟女少妇av免费看| 我要看黄色一级片免费的| 99视频精品全部免费 在线| 中文字幕av电影在线播放| 欧美人与善性xxx| 国产精品人妻久久久影院| 春色校园在线视频观看| 性高湖久久久久久久久免费观看| 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看| 如何舔出高潮| 日韩av在线免费看完整版不卡| 色婷婷久久久亚洲欧美| 日韩熟女老妇一区二区性免费视频| 黑人欧美特级aaaaaa片| 中国美白少妇内射xxxbb| 亚洲精品国产色婷婷电影| 精品人妻在线不人妻| 男女边吃奶边做爰视频| 国产淫语在线视频| 一边亲一边摸免费视频| 日韩电影二区| 免费久久久久久久精品成人欧美视频 | 免费av中文字幕在线| 青春草视频在线免费观看| 国产一区亚洲一区在线观看| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| 日日撸夜夜添| 自线自在国产av| 国产熟女午夜一区二区三区| 热re99久久精品国产66热6| 大香蕉久久成人网| 国产日韩欧美视频二区| 亚洲一区二区三区欧美精品| 欧美精品亚洲一区二区| 日本免费在线观看一区| 咕卡用的链子| 中文字幕另类日韩欧美亚洲嫩草| 夜夜骑夜夜射夜夜干| 香蕉丝袜av| 精品国产国语对白av| 国产伦理片在线播放av一区| 日韩大片免费观看网站| 一级爰片在线观看| 国产成人精品婷婷| 一级爰片在线观看| 在线观看三级黄色| 久久国产精品男人的天堂亚洲 | 搡女人真爽免费视频火全软件| 日本欧美视频一区| 在线观看美女被高潮喷水网站| 一本一本久久a久久精品综合妖精 国产伦在线观看视频一区 | 久久人妻熟女aⅴ| 国产日韩一区二区三区精品不卡| 精品人妻一区二区三区麻豆| 在线观看三级黄色| 日韩视频在线欧美| 99热网站在线观看| 国产在线一区二区三区精| 99热国产这里只有精品6| 激情视频va一区二区三区| 街头女战士在线观看网站| 亚洲成人一二三区av| 日韩伦理黄色片| 欧美成人午夜免费资源| 激情五月婷婷亚洲| 美女视频免费永久观看网站| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 日韩电影二区| 一区二区三区四区激情视频| 亚洲国产精品一区二区三区在线| 国产亚洲av片在线观看秒播厂| 69精品国产乱码久久久| 国产色婷婷99| 成人影院久久| 亚洲人成77777在线视频| 亚洲欧美一区二区三区国产| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 日韩一区二区视频免费看| 国产成人a∨麻豆精品| 中文天堂在线官网| 国产深夜福利视频在线观看| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久 | 色视频在线一区二区三区| 日本-黄色视频高清免费观看| 亚洲成人一二三区av| 精品午夜福利在线看| 久久鲁丝午夜福利片| 五月天丁香电影| 国产欧美日韩综合在线一区二区| 人妻 亚洲 视频| 美女福利国产在线| 2022亚洲国产成人精品| 国产色爽女视频免费观看| 校园人妻丝袜中文字幕| 交换朋友夫妻互换小说| 国产深夜福利视频在线观看| 久久久久人妻精品一区果冻| 中文字幕人妻丝袜制服| 亚洲国产欧美日韩在线播放| 精品久久国产蜜桃| 国产男女超爽视频在线观看| 99热这里只有是精品在线观看| 久久久久视频综合| 成年人免费黄色播放视频| 午夜激情av网站| 极品人妻少妇av视频| 国产不卡av网站在线观看| 又黄又粗又硬又大视频| 欧美日韩视频精品一区| 午夜福利乱码中文字幕| 欧美日韩国产mv在线观看视频| 国产精品国产三级专区第一集| 国产日韩欧美亚洲二区| 久久久久久久精品精品| 男女下面插进去视频免费观看 | 有码 亚洲区| 久久久久久久久久久免费av| 三级国产精品片| 一级毛片 在线播放| 亚洲三级黄色毛片| 两个人看的免费小视频| 老司机影院毛片| 另类精品久久| 精品久久蜜臀av无| 亚洲欧美成人精品一区二区| 久久国产亚洲av麻豆专区| 边亲边吃奶的免费视频| 日日啪夜夜爽| 亚洲情色 制服丝袜| 国产免费福利视频在线观看| 欧美日韩亚洲高清精品| 伦理电影免费视频| 成年美女黄网站色视频大全免费| 中文字幕免费在线视频6| 国产精品一区二区在线不卡| 亚洲欧美精品自产自拍| 中文字幕制服av| 搡老乐熟女国产| 亚洲欧美一区二区三区黑人 | 国产白丝娇喘喷水9色精品| 亚洲精品第二区| av又黄又爽大尺度在线免费看| 伦理电影大哥的女人| 天堂俺去俺来也www色官网| 九色成人免费人妻av| 人体艺术视频欧美日本| 女的被弄到高潮叫床怎么办| 久久久久人妻精品一区果冻| 亚洲一码二码三码区别大吗|