花楸果實醇提物抑菌穩(wěn)定性的實驗研究

摘要：本實驗主要以金黃色葡萄球菌為指示菌，研究花楸果實醇提物活性成分的穩(wěn)定性，結果表明花楸果實醇提物分別經溫度、酸堿度、紫外處理后只有在酸性條件下具有一定的抑菌活性，堿處理使其抑菌活性消失；溫度、紫外照射對其穩(wěn)定性幾乎沒有影響。

關鍵詞：花楸；抑菌；穩(wěn)定性

中圖分類號：S574 文獻標識碼： A 文章編號： 1674-0432（2014）-08-22-2

花楸又名臭山槐，為薔薇科、花楸屬喬本植物。小枝粗壯，樹皮灰色，奇數羽狀復葉，每葉5～8對，葉披針形，復傘房花序，花白色，果實近球形，徑0.6～0.8厘米，分桔紅色和紅色兩種。喜生濕潤肥沃的酸性或微酸性土壤，散生于溪谷和天然林中，喜光、耐寒、耐陰?；ㄩ币话惴植荚谖覈臇|北、華北、內蒙古等地區(qū)。由于花楸樹形美觀，春季白花簇簇，多而稠密，秋葉變紅艷，紅果滿樹披掛，光彩奪目，經久不落，因此可作為城市、園林綠化的觀賞苗木和綠化苗木樹種進行培育，花楸果實具有一定的食用和藥用價值，并且花楸果實的抑菌效果十分明顯。本文對花楸果實的醇提物金黃色葡萄球菌的抑制作用進行研究。

由于傳統(tǒng)的防腐劑一般都是化學制品，對人體有一定的傷害。目前，國際上的食品、藥品防腐劑正在向天然、無毒的趨勢發(fā)展。因此，篩選抑菌的天然物質已經越來越熱門起來。根據有關報道，花楸果實具有極高的殺菌能力，特別對于金黃色葡萄球菌更加顯著，因此利用花楸果實的醇提物制備的防腐劑應用在食品、藥品或者各個領域中是可行的。

1 材料與方法

1.1 材料

試驗材料采集于牡丹江師范學院，采樣時間為 2012年 7～9月，經鑒定為花楸，植物標本保存于牡丹江師范學院生命科學與技術學院微生物實驗室。材料用無菌水洗凈陰干、粉碎過40目篩，密閉封存?zhèn)溆谩?/p>

1.2 供試菌種

供試菌種，金黃色葡萄球菌（牡丹江師范學院生命科學學院微生物實驗室提供）。菌種用牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基培養(yǎng)。

1.3 試驗儀器

RXZ-500C型多段人工氣候培養(yǎng)箱、SW-CJ-2FD進化工作臺、電子萬用爐、ES-215型高壓蒸汽滅菌鍋。

1.4 95%乙醇提取物的制備

稱取 100克花楸果實粉末，加入 500毫升，95%的乙醇，冷浸24小時，55℃～65℃回流提取2次，每次1小時，合并溶劑，回收溶劑，制得浸膏，備用。

1.5 提取物的抑菌活性測定

1.5.1 菌種的活化及菌懸液的制備 從斜面培養(yǎng)基挑取金黃色葡萄球菌菌種，先于35℃～37℃活化 18小時，用玻璃珠打散加至裝有 10 毫升的無菌水的試管內，振蕩均勻，無菌生理鹽水作為對照，調節(jié)菌懸液的濃度約為 1×104個。采用無菌移液槍吸取 100微升，上述菌懸液加入到營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基上，并用無菌涂布棒涂布均勻。

1.5.2 不同的溫度對抑菌穩(wěn)定性的影響 將 2克/毫升的花楸果實提取液分別置于40℃、60℃、80℃、100℃的恒溫水浴鍋中處理 20分鐘后備用，另取部分花楸果實提取液于121℃高壓蒸汽滅菌20 分鐘后備用。用無菌鑷子放置4個已滅菌的牛津杯。其中 3 個各加入100微升同一濃度的花楸果實醇提物，另外一個加入100微升無菌生理鹽水作為陰性對照。上述操作完成后，將平板于超凈工作臺中靜置20分鐘后，置于37℃恒溫培養(yǎng)箱內培養(yǎng)24小時，利用十字交叉方法測量抑菌圈直徑，結果求平均值，比較抑菌效果。

1.5.3 不同pH對抑菌穩(wěn)定性的影響 分別用2摩爾/升的 HCl和2摩爾/升NaOH 將花楸果實提取液的pH 調整為 3、5、7、9、11，并放于4℃條件下備用。利用無菌鑷子將4個已滅菌的牛津杯放置培養(yǎng)基上。其中3 個各加入100微升相同 pH的花楸果實提取液，作為3 個平行。另外一個作為對照加入100微升未處理花楸果實原提取液。上述操作完成后，將平板于超凈工作臺中靜置20分后，于37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng) 24小時，利用十字交叉法測量抑菌圈直徑。

1.5.4 不同紫外照射對抑菌穩(wěn)定性的影響 將2克/毫升花楸果實提取液在15瓦、50厘米的紫外燈下分別照射10分鐘、20分鐘、30分鐘、40分鐘、50分鐘、60分鐘。并放于紅燈條件下備用。利用無菌鑷子將4 個已滅菌的牛津杯放置培養(yǎng)基上。其中3 個各加入100微升相同紫外照射時間的花楸果實提取液，作為3 個平行。另外一個作為對照加入100微升無菌生理鹽水。上述操作完成后，將平板于超凈工作臺黑暗放置20分鐘后，于37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時，仍然利用十字交叉法測量抑菌圈直徑。

2 結果與分析

參照NCCLS/CLIS2006標準和中國衛(wèi)生部消毒規(guī)范判斷不同誘變劑對花楸果實95%醇提取物的抑菌活性進行測定比較，結果發(fā)現經溫度、pH、紫外等不同誘變劑的誘變作用不同，花楸果實95%醇提物的抑菌活性有一定的差異。

2.1 溫度對花楸果實醇提物抑菌效果的影響

在溫度分別為40℃、60℃、80℃、100℃、121℃的條件下處理花楸果實醇提物，以金黃色葡萄酒菌為例，花楸果實提取物的抑菌活性的熱穩(wěn)定性關系如圖1所示。

由圖1可以看出，花楸果實醇提物經不同溫度處理后仍然保持原有的抑菌活性，即使在121℃處理30分鐘后仍具有較高的活性，這表明花楸果實醇提物的抑菌活性具有較好的熱穩(wěn)定性。

2.2 pH對花楸果實醇提物抑菌效果的影響

在pH分別為3、5、7、9、11的條件下處理花楸果實醇提物，以金黃色葡萄酒菌為例，花楸果實提取物的抑菌活性的穩(wěn)定性關系如圖2所示。

由圖2可以看出，隨著pH值的不斷升高，花楸果實醇提物對抑菌能力下降。酸性條件下抑菌活性強，且pH在5之后無抑菌活性，可能是提取物經堿處理后使某些抑菌成分與溶液中的堿發(fā)生反應，從而使該物質的抑菌性消失。緩沖液本身對供試菌無抑菌活性。

2.3 溫度紫外對花楸果實醇提物抑菌效果的影響

在15瓦、50厘米的紫外燈下分別照射10分鐘、20分鐘、30分鐘、40分鐘、50分鐘、60分鐘。的條件下處理花楸果實醇提物，以金黃色葡萄酒菌為例，花楸果實提取物的抑菌活性的穩(wěn)定性關系如圖3所示

由圖3可以看出，隨紫外光處理時間的變化，提取物的抑菌活性基本保持不變，由此可見花楸果實醇提物對紫外光具有極高的穩(wěn)定性。

3 結語

花楸果實來源十分豐富，特別是在黑龍江等地區(qū)。本實驗對花楸果實醇提物抑菌穩(wěn)定性進行了研究。結果表明，花楸果實醇提物的抑菌效果隨著溫度的升高抑菌圈增大，說明在高溫的條件下，花楸果實的抑菌效果不受影響，pH對抑菌效果影響不明顯，紫外線在30分鐘ute到40分鐘ute之間抑菌圈最大，效果最明顯。

近幾年，抗生素藥物廣泛使用，導致細菌的抗藥性日益增強，藥物的用量也越來越大，這樣不僅在治療的過程中加大了成本，還會使體內有一定的藥物殘留。由于中草藥是一種天然的藥劑，所以近幾年人們熱衷于對中草藥的研究。中草藥在現代預防和控制細菌性感染疾病中發(fā)揮了積極作用，從中草藥篩選抗菌藥物用于防治疾病已成為解決抗生素濫用問題的有效途徑之一?；ㄩ惫麑嵉拇继嵛锖烊恢参锟咕钚猿煞?，根據研究表明花楸果實還具有一定的健胃補虛的作用，還可用于清肺止咳、治療肺結核、哮喘等功效。因此可以通過正確的提取花楸果實的有效成分開發(fā)新的抗菌產品，還可以利用花楸果實的抑菌效果不受溫度的限制，用于制作食品防腐劑。

本實驗僅對花楸果實醇提物抑菌穩(wěn)定性進行了研究，具體的抑菌機制并沒有研究，但對花楸果實進一步的研究以及抑菌活性測定提供了一定的理論依據。

參考文獻

[1] 喬君霞，索菲婭，黃羅冬，等. 新疆短星火絨草不同極性提取物抑菌作用研究[D].云南農業(yè)大學學報，2013，28 （1）： 83-87.

[2] 凌繼華，黃永新.花楸育苗技術[B].安徽農業(yè)學報，2010.

[3] Hsieh P C， Mau J L，Huang S H. （2001） Antimicrobial effect of various combinations of plant extracts [J].Food Microbiology， 2001（18）： 35-43.

[4] National Committee For Clinical Laboratory Standards ， Performance Standards for Antimicrobial Susceptivity Testing：Sixteenth Informational Supplement [S].

[5] 中華人民共和國衛(wèi)生部.消毒技術規(guī)范（2002版）[S].

[6] 李樹明.50味中藥對8種畜禽病原菌抑菌對比研究[J].中獸醫(yī)學雜志，2000，（4）：5-8.

[7] PAN Y M，LIANG Y， WANG H S， et al. Antioxidant activities of several Chinese medicine herbs [J]. Food Chemistry，2004，88（3）：347-350.

作者簡介：趙屹，遼寧師范大學，中級助理研究員，研究方向：生命科學。

2.3 溫度紫外對花楸果實醇提物抑菌效果的影響

在15瓦、50厘米的紫外燈下分別照射10分鐘、20分鐘、30分鐘、40分鐘、50分鐘、60分鐘。的條件下處理花楸果實醇提物，以金黃色葡萄酒菌為例，花楸果實提取物的抑菌活性的穩(wěn)定性關系如圖3所示

由圖3可以看出，隨紫外光處理時間的變化，提取物的抑菌活性基本保持不變，由此可見花楸果實醇提物對紫外光具有極高的穩(wěn)定性。

3 結語

花楸果實來源十分豐富，特別是在黑龍江等地區(qū)。本實驗對花楸果實醇提物抑菌穩(wěn)定性進行了研究。結果表明，花楸果實醇提物的抑菌效果隨著溫度的升高抑菌圈增大，說明在高溫的條件下，花楸果實的抑菌效果不受影響，pH對抑菌效果影響不明顯，紫外線在30分鐘ute到40分鐘ute之間抑菌圈最大，效果最明顯。

近幾年，抗生素藥物廣泛使用，導致細菌的抗藥性日益增強，藥物的用量也越來越大，這樣不僅在治療的過程中加大了成本，還會使體內有一定的藥物殘留。由于中草藥是一種天然的藥劑，所以近幾年人們熱衷于對中草藥的研究。中草藥在現代預防和控制細菌性感染疾病中發(fā)揮了積極作用，從中草藥篩選抗菌藥物用于防治疾病已成為解決抗生素濫用問題的有效途徑之一。花楸果實的醇提物含天然植物抗菌活性成分，根據研究表明花楸果實還具有一定的健胃補虛的作用，還可用于清肺止咳、治療肺結核、哮喘等功效。因此可以通過正確的提取花楸果實的有效成分開發(fā)新的抗菌產品，還可以利用花楸果實的抑菌效果不受溫度的限制，用于制作食品防腐劑。

本實驗僅對花楸果實醇提物抑菌穩(wěn)定性進行了研究，具體的抑菌機制并沒有研究，但對花楸果實進一步的研究以及抑菌活性測定提供了一定的理論依據。

參考文獻

[1] 喬君霞，索菲婭，黃羅冬，等. 新疆短星火絨草不同極性提取物抑菌作用研究[D].云南農業(yè)大學學報，2013，28 （1）： 83-87.

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[7] PAN Y M，LIANG Y， WANG H S， et al. Antioxidant activities of several Chinese medicine herbs [J]. Food Chemistry，2004，88（3）：347-350.

作者簡介：趙屹，遼寧師范大學，中級助理研究員，研究方向：生命科學。

2.3 溫度紫外對花楸果實醇提物抑菌效果的影響

在15瓦、50厘米的紫外燈下分別照射10分鐘、20分鐘、30分鐘、40分鐘、50分鐘、60分鐘。的條件下處理花楸果實醇提物，以金黃色葡萄酒菌為例，花楸果實提取物的抑菌活性的穩(wěn)定性關系如圖3所示

由圖3可以看出，隨紫外光處理時間的變化，提取物的抑菌活性基本保持不變，由此可見花楸果實醇提物對紫外光具有極高的穩(wěn)定性。

3 結語

花楸果實來源十分豐富，特別是在黑龍江等地區(qū)。本實驗對花楸果實醇提物抑菌穩(wěn)定性進行了研究。結果表明，花楸果實醇提物的抑菌效果隨著溫度的升高抑菌圈增大，說明在高溫的條件下，花楸果實的抑菌效果不受影響，pH對抑菌效果影響不明顯，紫外線在30分鐘ute到40分鐘ute之間抑菌圈最大，效果最明顯。

近幾年，抗生素藥物廣泛使用，導致細菌的抗藥性日益增強，藥物的用量也越來越大，這樣不僅在治療的過程中加大了成本，還會使體內有一定的藥物殘留。由于中草藥是一種天然的藥劑，所以近幾年人們熱衷于對中草藥的研究。中草藥在現代預防和控制細菌性感染疾病中發(fā)揮了積極作用，從中草藥篩選抗菌藥物用于防治疾病已成為解決抗生素濫用問題的有效途徑之一?；ㄩ惫麑嵉拇继嵛锖烊恢参锟咕钚猿煞?，根據研究表明花楸果實還具有一定的健胃補虛的作用，還可用于清肺止咳、治療肺結核、哮喘等功效。因此可以通過正確的提取花楸果實的有效成分開發(fā)新的抗菌產品，還可以利用花楸果實的抑菌效果不受溫度的限制，用于制作食品防腐劑。

本實驗僅對花楸果實醇提物抑菌穩(wěn)定性進行了研究，具體的抑菌機制并沒有研究，但對花楸果實進一步的研究以及抑菌活性測定提供了一定的理論依據。

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[7] PAN Y M，LIANG Y， WANG H S， et al. Antioxidant activities of several Chinese medicine herbs [J]. Food Chemistry，2004，88（3）：347-350.

作者簡介：趙屹，遼寧師范大學，中級助理研究員，研究方向：生命科學。