八味益腎丸中雄蠶蛾油質(zhì)4量控制的研究

任桂玲董曉強郭艷玲李沈明*

（1 承德醫(yī)學(xué)院，河北 承德 067000；2 頸復(fù)康藥業(yè)集團有限公司，河北 承德 067000）

八味益腎丸中雄蠶蛾油質(zhì)4量控制的研究

任桂玲1董曉強2郭艷玲2李沈明2*

（1 承德醫(yī)學(xué)院，河北 承德 067000；2 頸復(fù)康藥業(yè)集團有限公司，河北 承德 067000）

目的提高八味益腎丸半成品質(zhì)量控制。方法采用氣相色譜法測八味益腎丸半成品雄蠶蛾油中多種脂肪酸成分含量。結(jié)果棕櫚酸甲酯、硬脂酸甲酯、油酸甲酯、亞油酸甲酯、α-亞麻酸甲酯的線性范圍分別為0.272～6.800 mg/mL（r=0.9999）、0.063～1.575 mg/mL（r=0.9998）、0.395～9.887 mg/mL（r=0.9999）、0.084～2.098 mg/mL（r=0.9998）、0.405～10.124 mg/mL（r=0.9999）；各成分的平均回收率分別為97.41%、103.09%、102.05%、101.67%和100.22%；RSD分別為0.78%、1.26%、1.10%、0.95%和1.62%（n=6）。結(jié)論該方法準(zhǔn)確、靈敏、簡便、穩(wěn)定性和重現(xiàn)性良好，適用于蠶蛾油中多種脂肪酸成分的同時檢測，可為八味益腎丸半成品及成品的質(zhì)量控制提供參考。

八味益腎丸；雄蠶蛾；脂肪酸；氣相色譜法

八味益腎丸是由雄蠶蛾、淫羊藿、熟地黃、當(dāng)歸、菟絲子、杜仲、山藥、鹿角膠八味藥材組成的濃縮水丸，有溫陽補腎，養(yǎng)血填精之功效，主要用于腎陽不足所致的功能性陽痿，氣怯神疲，畏寒肢冷，腰膝酸軟等。雄蠶蛾是八味益腎丸的君藥，明代李時珍著的《本草綱目》稱雄蠶蛾為“神蟲國寶”并記載：雄原蠶蛾，壯陽事，止泄精、尿血，暖水臟，治暴風(fēng)、金瘡、湯火瘡，滅瘢痕[1]。此外，在《中藥大辭典》中也有雄蠶蛾補腎壯陽的記載[2]?，F(xiàn)代研究表明，雄蠶蛾含有豐富的蛋白質(zhì)、脂肪酸、維生素、激素類物質(zhì)等。雄蠶蛾油中脂肪酸含量高，不飽和脂肪酸和必需脂肪酸的含量分別高達78.6%和43%，其必需脂肪酸含量在動物性食品中占首位，且其含量最豐富的多不飽和脂肪酸亞麻酸在人體內(nèi)能參與前列腺素的合成并提高前列腺素的活性，這正好為其醫(yī)療保健上的作用找到佐證[3，4]。

1 材 料

1.1 儀器

島津2010氣相色譜儀；AE240十萬分之一電子分析天平（瑞士梅特勒）；RE-5286A旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海雅榮生化設(shè)備儀器有限公司）；調(diào)速多用振蕩器（江蘇榮華儀器制造有限公司）。

1.2 材料及試藥

蠶蛾為蠶蛾科昆蟲家蠶Bombyx mori Linneeus的雄性蟲體（由頸復(fù)康萊蕪恒億養(yǎng)殖有限公司提供，批號：130201）；油酸甲酯對照（中國藥品生物制品檢定所，批號：190034-201001）；硬脂酸甲酯對照（中國藥品生物制品檢定所，批號：190033-201001）；α-亞麻酸甲酯對照（中國藥品生物制品檢定所，批號：111624-201203）；亞油酸甲酯對照（中國藥品生物制品檢定所，批號：111625-200502）；棕櫚酸甲酯對照（中國藥品生物制品檢定所，批號：190030-201303）；甲醇、乙醇、正己烷（分析純）。

2 方法與結(jié)果

2.1 雄蠶蛾油的制備

按照八味益腎丸制備工藝，稱取適量雄蠶蛾，加95%乙醇8倍量，浸泡8 h，加熱回流1 h，第2次加95%乙醇6倍量，加熱回流1 h，合并提取液，過濾，濾液回收乙醇至無醇味，即得雄蠶蛾油。

2.2 雄蠶蛾油的甲酯化

精密稱取按2.1節(jié)方法制得的雄蠶蛾油0.1 g置50 mL三角瓶中，加入5 mL正己烷使其溶解，再加入5 mL，0.5 mol/L氫氧化鉀甲醇溶液[5]，振搖20 min后，轉(zhuǎn)移置分液漏斗中靜置分層，取有機相置10 mL容量瓶中，加正己烷定容至刻度，搖勻，即得。

2.3 氣相測定方法

2.3.1 色譜條件

色譜柱：HP-INNOWAX（30 m×0.32 mm，1.8 μm）；柱溫230 ℃保持11 min，柱中載氣流量1.5 mL/min，進樣口溫度：220 ℃；采用20∶1分流進樣；檢測器FID溫度：270 ℃；進樣量1 μL。對照品及供試品色譜圖見圖1。

2.3.2 混合對照品溶液的制備

分別精密稱取棕櫚酸甲酯、硬脂酸甲酯、油酸甲酯、亞油酸甲酯和α-亞麻酸甲酯對照品適量，置于同一25 mL容量瓶中，加正己烷適量使溶解，加正己烷稀釋至刻度，搖勻，配制成棕櫚酸甲酯、硬脂酸甲酯、油酸甲酯、亞油酸甲酯和α-亞麻酸甲酯濃度分別為6.800、1.575、9.887、2.098、10.124 mg/mL的混合對照溶液。

2.3.3 供試品溶液的制備

取雄蠶蛾油的甲酯化溶液用0.45 μm微孔濾膜過濾，濾液作為供試品溶液。

2.3.4 線性關(guān)系的考察

混合對照品儲備液作為1號溶液，采用倍比稀釋法制成系列濃度溶液，得2～5號混合對照品溶液。棕櫚酸甲酯濃度分別為0.272、0.680、1.360、2.720 mg/mL、硬脂酸甲酯濃度分別為0.063、0.158、0.315、0.630 mg/mL，油酸甲酯濃度分別為0.395、0.989、1.977、3.950 mg/mL，亞油酸甲酯濃度分別為0.084、0.210、0.420、0.839 mg/mL，α-亞麻酸甲酯濃度分別為0.405、1.012、2.025、4.050 mg/mL。在2.2.1節(jié)色譜條件下，取1 μL注入氣相色譜儀，記錄色譜峰面積，以色譜峰（A）為縱坐標(biāo)，對照品濃度（C）為橫坐標(biāo)，進行線性回歸，回歸方程為棕櫚酸甲酯：A=660.92C-1.8573（r=0.9999）；硬脂酸甲酯：A=389.64C-0.3758（r=0.9998）；油酸甲酯：A=955.50C-0.2948（r=0.9999）；亞油酸甲酯：A=307.52C-0.1098（r=0.9998）；α-亞麻酸甲酯：A=343.65C-3.1752（r=0.9999）。棕櫚酸甲酯在0.272～6.800 mg/mL呈良好線性關(guān)系，硬脂酸甲酯在0.063～1.575 mg/mL呈良好線性關(guān)系；油酸甲酯在0.395～9.887 mg/mL呈良好線性關(guān)系；亞油酸甲酯在0.084～2.098 mg/mL呈良好線性關(guān)系；α-亞麻酸甲酯在0.405～10.124 mg/mL呈良好線性關(guān)系。

2.3.5 精密度試驗

將“2.2.4”項線性3號混合對照品溶液和按照“2.2.3”制備的供試品溶液一份，各重復(fù)進樣6次，每次1 μL，記錄色譜峰面積，混合對照品溶液色譜峰面積的RSD值分別為：棕櫚酸甲酯0.23%、硬脂酸甲酯1.86%、油酸甲酯1.46%、亞油酸甲酯0.64%、α-亞麻酸甲酯1.31%；供試品溶液色譜峰面積的RSD值分別為：棕櫚酸甲酯1.94%、硬脂酸甲酯1.96%、油酸甲酯1.81%、亞油酸甲酯1.82%、α-亞麻酸甲酯1.70%，表明精密度良好。

表1 平均回收率結(jié)果

圖1 雄蠶蛾油氣相色譜圖 （A）對照品 （B）供試品

2.3.6 重現(xiàn)性試驗

平行取樣品6份，按“2.2.3”制備供試品溶液，按“2.1.1”色譜條件測定，棕櫚酸甲酯、硬脂酸甲酯、油酸甲酯、亞油酸甲酯和α-亞麻酸甲酯的RSD值分別為1.42%、1.93%、1.69%、1.25%、1.66%，表明該方法重復(fù)性良好。

2.3.7 穩(wěn)定性試驗

取對照品溶液和供試品溶液，分別在制備后0、2、4、6、8、10 h進樣10 μL，記錄色譜峰面積，對照品溶液色譜峰面積的RSD值分別為：棕櫚酸甲酯1.66%，硬脂酸甲酯1.74%，油酸甲酯1.23%，亞油酸甲酯1.07%，α-亞麻酸甲酯0.63%；供試品溶液色譜峰面積的RSD值分別為：棕櫚酸甲酯1.55，硬脂酸甲酯1.46%，油酸甲酯1.75%，亞油酸甲酯1.94%，α-亞麻酸甲酯1.27%，表明對照品溶液和供試品溶液在10 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.3.8 加樣回收率試驗

精密稱取已知棕櫚酸甲酯、硬脂酸甲酯、油酸甲酯、亞油酸甲酯和α-亞麻酸甲酯含量的樣品6份，分別加入對照品適量，按“2.2.3”項制備樣品溶液，按“2.2.1”項色譜條件進行測定，以樣品溶液中絕對含量計算加樣回收率，結(jié)果見表1。

3 討 論

3.1 蠶蛾油中所含脂肪酸成分為十二碳以上的長碳鏈脂肪酸，其沸點高，因此將脂肪酸與甲醇反應(yīng)制備成沸點低的脂肪酸甲酯，再進行氣相色譜分析。用于甲酯化的試劑有KOH-CH3OH、BF3-CH3OH[6]，通過實驗比較表明，采用0.5 moL/L的KOH-CH3OH能夠?qū)ξ宸N脂肪酸進行有效甲酯化，且操作簡單快捷有效。

3.2 采用不同色譜柱HP-INNOWAX（30 m×0.32 mm，1.8 μm）和FFAP（改性聚乙二醇20 mol/L，30 m×0.25 mm，0.25 μm）和不同氣相色譜儀Agilent 7890A、Agilent 6890N、島津2010對雄蠶蛾油進行測定，結(jié)果不同的色譜柱分離性能不同，2種色譜柱和3臺氣相色譜儀均可用于樣品測定，色譜柱HP-INNOWAX（30 m×0.32 mm，1.8 μm）分離效果較好，且保留時間適中。

[1] 李時珍.本草綱目[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,1982:2254-2255.

[2] 江蘇新醫(yī)學(xué)院.中藥大辭典[M].上海:上海人民出版社,1977:1831.

[3] 余東華,楊伙,孫立.柞蠶蛾的營養(yǎng)成分分析及評價[J].食品科技, 1998,3(1):19-21.

[4] 范作卿,鄭淑湘,鄒德慶,等.柞蠶雄蛾油成分的分析與應(yīng)用[J].中國蠶業(yè),2006,27(4):90-91.

[5] 付松,徐先順,向奮飛.保健油脂中多不飽和脂肪酸的GC/MS分析[J].中國衛(wèi)生檢驗雜志,2005,15(9):1042-1044.

[6] 馮春艷,榮瑞芬,歷重先.不同核桃品種脂肪酸的氣相色譜分析比較[J].食品科學(xué),2009,30(24):262-265.

R282.72

B

1671-8194（2014）27-0069-03

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