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    春柴胡中柴胡皂苷a與d的含量測定

    2014-06-17 07:52:42朱明恒
    云南中醫(yī)中藥雜志 2014年7期
    關(guān)鍵詞:柴胡皂苷柴胡藥材

    朱明恒

    (南京醫(yī)科大學(xué)附屬蘇州醫(yī)院, 江蘇 蘇州 215002)

    柴胡是傘形科(Umbelliferae)柴胡屬Bupleurum植物,為我國傳統(tǒng)的中藥,在《神農(nóng)本草經(jīng)》中被列為上品。具有解表和里、疏肝解郁、升舉陽氣之功效,是治療少陽證的首選用藥,中國藥典收載的柴胡為傘形科植物柴胡(BupleurumchinenseDC).或狹葉柴胡(BupleurumscorzonerifoliumWilld.)的根[1]。由于我國柴胡屬植物品種眾多.資源分布廣泛,各地根據(jù)當(dāng)?shù)厮a(chǎn)柴胡作為習(xí)慣用藥的較為普遍,江蘇省大部分地區(qū)即習(xí)用狹葉柴胡春季采挖帶根的全草,又稱“春柴胡”,(收錄于《江蘇省中藥材標(biāo)準(zhǔn)》(1989年版))。本院現(xiàn)在使用的即為此品種。而2010年版藥典新增了柴胡的含量測定標(biāo)準(zhǔn),即含柴胡皂苷a和d的總量不得少于0.30%。故本文運(yùn)用HPLC法測定春柴胡中柴胡皂苷a、d的含量,希望對地方用藥的質(zhì)量控制和規(guī)范用藥提供借鑒[2~3]。

    1 儀器與試藥

    島津LC-20AT高效液相色譜儀,Sartorius CP224S型電子分析天平。甲醇、乙腈均為色譜純,氨水為分析純,重蒸餾水為自制。柴胡皂苷a對照品(110777-200507),柴胡皂苷d對照品(110778-200506),均由中國藥品生物制品檢定所提供。春柴胡藥材購自蘇州天靈中藥飲片有限公司(批號(hào)110918,120211,120603)。

    2 方法與結(jié)果

    2.1 色譜條件 Diamonsil C18色譜柱(4.6 mm×250 mm,5 μm);以乙腈為流動(dòng)相A、以水為流動(dòng)相B照表1進(jìn)行梯度洗脫;流速:1 mL·min-1;柱溫為室溫,檢測波長210 nm;進(jìn)樣量10 μL。

    表1 流動(dòng)相的洗脫梯度

    2.2 對照品溶液的制備 精密稱定柴胡皂苷a、d對照品適量,置于50 mL量瓶中,加甲醇溶解并定容,制成柴胡皂苷a濃度為0.4018 mg·mL-1、柴胡皂苷d濃度為0.5238 mg·mL-1的溶液,備用。

    2.3 供試品溶液的制備 取樣品粉末(過四號(hào)篩)約0.5 g,精密稱定,加入含5%濃氨試液的甲醇溶液25 mL,30℃水溫超聲處理30 min,濾過,用甲醇20 mL分2次洗滌容器及藥渣,洗液與濾液合并,回收溶劑至干。殘?jiān)蛹状既芙猓D(zhuǎn)移至5 mL量瓶中,加甲醇至刻度,搖勻,用0.45 μm微孔濾膜過濾,取續(xù)濾液,即得。

    2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 精密吸取柴胡皂苷a、d對照品溶液1、2、5、10、15 μL,注入高效液相色譜儀中測定。以峰面積為縱坐標(biāo),進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸,分別得到回歸方程:柴胡皂苷a:Y=148203X+20919,r=0.9990,柴胡皂苷d:Y=149457X+16283,r=0.9992。表明柴胡皂苷a在0.4018~6.027 μg,柴胡皂苷d在0.5238~7.857 μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

    2.5 精密度實(shí)驗(yàn) 精密吸取柴胡皂苷a、d對照品溶液10 μL,按“2.1”項(xiàng)下色譜條件重復(fù)進(jìn)樣6次,測定峰面積,計(jì)算柴胡皂苷a、d的RSD分別為1.70%、1.28%。

    2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一份供試品溶液,分別于0、2、4、6、8、10 h進(jìn)樣分析,計(jì)算得柴胡皂苷a、d的RSD分別為1.77%、1.81%。

    2.7 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批樣品按“2.3”項(xiàng)下供試品溶液制備方法平行制備6份,按“2.1”項(xiàng)下色譜條件測定峰面積,計(jì)算柴胡皂苷a、d的RSD分別為1.84%、1.92%。

    2.8 加樣回收率試驗(yàn) 精密稱取已知含量樣品粉末6份,每份約1g,分別加入柴胡皂苷a 對照品溶液2mL,柴胡皂苷d對照品溶液4 mL,按“2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液,再按“2.1”項(xiàng)下色譜條件測定,柴胡皂苷a的平均回收率為91.19%,RSD為1.83%;柴胡皂苷d的平均回收率為92.76%,RSD為1.43%。(見表2、3)

    表2 柴胡皂苷a加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果(n=6)

    表3 柴胡皂苷d加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果(n=6)

    2.9 樣品測定 取各樣品適量按按“2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液,再按“2.1”項(xiàng)下色譜條件測定,結(jié)果見表4。

    表4 樣品含量測定結(jié)果(n=3)

    3 討論

    柴胡皂苷a、d均屬于五環(huán)三萜類皂苷,具有類似的化學(xué)結(jié)構(gòu)。在提取過程中若受高溫或酸性的影響,易使其環(huán)氧醚鍵開環(huán),穩(wěn)定性較差,所以本實(shí)驗(yàn)采用弱堿性溶劑5%氨水一甲醇溶液提取,效果較好。而對照品溶液配成后亦應(yīng)避光低溫保存。

    柴胡通常只將根作為藥用部位,這樣就造成其地上部分藥材的浪費(fèi)。春柴胡藥材以春季帶根的全草入藥,把柴胡地上部分同樣也作為藥用資源。但這部分藥材中還含有黃酮、揮發(fā)油、木脂素等活性成分。通過對春柴胡有效成分進(jìn)一步的研究,從而達(dá)到全面的質(zhì)量控制,對于柴胡資源充分而合理的利用具有重要的意義。

    參考文獻(xiàn):

    [1]中華人民共和國藥典.2010年版一部[S].北京:中國醫(yī)藥科技出版社,2010:264.

    [2]肖功勝,楊云,劉富崗,等.柴胡皂苷提取和含量測定方法研究[J].中成藥,2009,31(4):595-598.

    [3]余菁,梁衛(wèi)青.高效液相法測定不同產(chǎn)地柴胡藥材中柴胡皂苷a、d的含量[J].浙江中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào),2007,31(3):374-375.

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