針?biāo)幉⒂脤?duì)子宮內(nèi)膜異位癥大鼠血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子的影響

張春雁,張曉云,李連波,朱俊,周殷,陳云飛

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針?biāo)幉⒂脤?duì)子宮內(nèi)膜異位癥大鼠血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子的影響

張春雁1,張曉云2,李連波1,朱俊1,周殷1,陳云飛1

(1.上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬岳陽(yáng)中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院,上海 200437;2.上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬龍華醫(yī)院,上海 200030)

觀察針?biāo)幣浜蠈?duì)子宮內(nèi)膜異位癥(endometriosis,EMs)大鼠血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)表達(dá)的影響,探討針?biāo)幣浜现委熥訉m內(nèi)膜異位癥的作用機(jī)制。建立大鼠EMs模型,隨機(jī)分為模型組、針灸組、中藥組、針?biāo)幗M,并設(shè)立假手術(shù)組。針灸組電針血海、三陰交,艾灸關(guān)元;中藥組采用加味沒(méi)竭片生理鹽水混懸液灌胃;針?biāo)幗M采用上述兩種方法綜合治療;假手術(shù)組和模型組捆綁固定并行生理鹽水灌胃。治療30 d后,取腹腔灌洗液及血清ELISA法檢測(cè)VEGF水平,測(cè)量異位囊腫最大直徑,取異位組織進(jìn)行組織病理學(xué)觀察,免疫組化法測(cè)定組織中VEGF的蛋白水平。針?biāo)幗M異位囊腫最大直徑明顯小于模型組、針灸組及中藥組(＜0.01);模型組異位內(nèi)膜生長(zhǎng)旺盛,針?biāo)幗M內(nèi)膜趨于萎縮,部分上皮細(xì)胞壞死;模型組腹腔灌洗液和異位組織中VEGF的表達(dá)顯著高于其他各組,針?biāo)幗M腹腔灌洗液VEGF表達(dá)顯著低于模型組、中藥組、針灸組(＜0.01),針?biāo)幗M異位組織中VEGF表達(dá)強(qiáng)度低于模型組(＜0.01)和中藥組(＜0.05)。大鼠EMs發(fā)病與其病變局部及腹腔微環(huán)境中VEGF水平相關(guān),針?biāo)幣浜夏芸s小EMs大鼠子宮內(nèi)膜囊腫大小,下調(diào)異位組織及腹腔液中異常升高的VEGF蛋白表達(dá)。

針?biāo)幉⒂?大鼠;子宮內(nèi)膜異位癥;血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子

子宮內(nèi)膜異位癥(endometriosis,EMs)是指具有生長(zhǎng)功能的子宮內(nèi)膜組織出現(xiàn)在子宮腔被覆黏膜以外的身體其他部位。臨床上以痛經(jīng)、不孕和月經(jīng)失調(diào)作為其主要癥狀,嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量。該病多發(fā)生在30～45歲女性,發(fā)病率呈逐年上升趨勢(shì)。目前,EMs的臨床診治指南,主要是針對(duì)疼痛、包塊和不孕的手術(shù)、藥物及助孕技術(shù)等治療對(duì)策[1]。但該病難以根治,術(shù)后3年復(fù)發(fā)率高達(dá)38%～51%[2],且上述療法均存在缺陷[3]。因此,弄清EMs可能的發(fā)病機(jī)制,探索有效的、副反應(yīng)少、復(fù)發(fā)率低的治療手段,是當(dāng)前婦科學(xué)亟待解決的問(wèn)題之一。中醫(yī)學(xué)在EMs的治療上具有獨(dú)特的優(yōu)勢(shì),針灸和中藥作為兩大治療手段,在該病的治療上已取得了滿意的療效[4-6]。

對(duì)于EMs發(fā)病機(jī)制的認(rèn)識(shí),目前較為公認(rèn)的是Sampson等[7]于1922年提出的子宮內(nèi)膜種植學(xué)說(shuō),認(rèn)為EMs的發(fā)病存在異位內(nèi)膜種植侵襲、新生血管形成等重要過(guò)程。我們前期研究證實(shí)[8],大鼠EMs的發(fā)病與異位組織中異常升高的基質(zhì)金屬蛋白酶-2 (matrix metalloproteinase-2,MMP-2)有關(guān),針?biāo)幗Y(jié)合可能通過(guò)下調(diào)內(nèi)異癥大鼠異位組織中異常升高的MMP-2表達(dá)水平,達(dá)到縮小異位囊腫、治療大鼠內(nèi)異癥的效應(yīng)。但是隨著逆流經(jīng)血侵襲局部基質(zhì)并種植在腹腔或其他部位的異位內(nèi)膜,其生長(zhǎng)還需要形成自身的血管網(wǎng)以獲取營(yíng)養(yǎng)物質(zhì),異位病灶周圍的血管化程度是影響異位內(nèi)膜生長(zhǎng)力和侵襲力的重要因素之一。血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)是一種結(jié)合肝素的二聚體糖蛋白,它直接作用于血管內(nèi)皮細(xì)胞,是迄今為止發(fā)現(xiàn)的最為重要的血管生長(zhǎng)因子。VEGF在EMs發(fā)病中究竟扮演怎樣的角色?

本研究在前期工作基礎(chǔ)上,采用針灸配合中藥加味沒(méi)竭片作用于EMs大鼠模型,對(duì)大鼠EMs可能的發(fā)病機(jī)制以及針?biāo)幣浜现委煷笫驟Ms的效應(yīng)及其可能的機(jī)理,從血管生成角度進(jìn)行了深入的研究。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

由上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬岳陽(yáng)中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心[SYXK(滬)2011-0109]提供,上海市斯萊克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限責(zé)任公司[SCXK(滬)2012-0002]生產(chǎn),清潔級(jí)雌性成熟未交配SD大鼠50只,體重(200±20)g,給予標(biāo)準(zhǔn)光照周期(14 h光照、10 h黑夜),室內(nèi)溫度(20±2)℃,濕度(50±10)%,標(biāo)準(zhǔn)飼料。

1.2 器械、藥品

毫針(中研太和牌,0.22 mm×25 mm)、艾炷(綠瑩牌,6.5 mm×15 mm)、加味沒(méi)竭片(滬藥制字Z05050329, 0.3 g/片,120片/瓶)。

1.3 儀器設(shè)備

G6805-1A型治療儀(上海華誼醫(yī)用儀器廠)、Model 680酶標(biāo)儀(美國(guó)BIO-RAD公司)、OLYMPUS-BX43型顯微照相系統(tǒng)(奧林巴斯光學(xué)工業(yè)株式會(huì)社)等。

1.4 試劑

抗大鼠VEGF單克隆抗體(珠海市泉暉企業(yè)有限公司,RTU-VEGF-qh,Batch:130410201)、GTVisionTMⅢ抗鼠/兔通用型免疫組化檢測(cè)試劑盒[Gene Tech (shanghai)Company Limited Code No GK500705]、Rat VEGF Immunoassay(R&D Systems Cat No RRV00,檢測(cè)血清中VEGF含量)、大鼠VEGF酶聯(lián)免疫試劑盒(武漢新啟迪生物科技有限公司Cat No EIA05906,檢測(cè)腹腔灌洗液中VEGF含量)。

1.5 實(shí)驗(yàn)方法

1.5.1 分組與模型制作

將50只大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組10只和造模組40只,陰道脫落細(xì)胞涂片動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)大鼠動(dòng)情周期,在動(dòng)情期,造模組參照J(rèn)ones法[9]進(jìn)行手術(shù)造模,假手術(shù)組進(jìn)行假手術(shù),開腹方法同造模組,找到左側(cè)子宮,用血管鉗夾持牽拉子宮角,分層關(guān)閉腹腔。常規(guī)飼養(yǎng)21 d后,開腹探查,見(jiàn)異位囊腫形成,取部分異位囊腫行組織病理學(xué)檢查,驗(yàn)證EMs大鼠模型建立成功。將造模組隨機(jī)分為模型組10只、針灸組10只、中藥組10只、針?biāo)幗M10只。

1.5.2 治療及對(duì)照處理

假手術(shù)組和模型組進(jìn)行捆綁固定和生理鹽水灌胃,針灸組進(jìn)行捆綁針灸和生理鹽水灌胃,中藥組進(jìn)行捆綁固定和加味沒(méi)竭片生理鹽水混懸液灌胃,針?biāo)幗M采用捆綁針灸和加味沒(méi)竭片生理鹽水混懸液灌胃。

1.5.2.1 針灸

捆綁固定后,選取單側(cè)血海、三陰交和關(guān)元3穴(大鼠穴位定位參照文獻(xiàn)[10])。以毫針刺入血海與三陰交,接G6805治療儀,采用連續(xù)波,電流強(qiáng)度0.3～0.6 mA,每日單側(cè)1次,次日換另一側(cè)穴位,雙側(cè)交替治療;關(guān)元穴處貼置6.5 mm×15 mm的艾炷,點(diǎn)燃施灸,每次2壯,每日1次。

1.5.2.2 灌胃

生理鹽水灌胃參照《動(dòng)物實(shí)驗(yàn)方法學(xué)》[11],根據(jù)大鼠體重,按照10 mL/kg計(jì)算灌胃量。加味沒(méi)竭片生理鹽水混懸液灌胃參照《動(dòng)物實(shí)驗(yàn)方法學(xué)》[11],根據(jù)成人藥物劑量換算大鼠等效劑量為3.74 mg/kg,并根據(jù)大鼠體重,按照10 mL/kg計(jì)算灌胃量,每次灌胃前將配制好的混懸液顛倒混勻。

1.5.2.3 療程

每日1次,30 d為1個(gè)療程,共治療1個(gè)療程。

1.5.3 取材與指標(biāo)檢測(cè)

療程結(jié)束后,陰道脫落細(xì)胞涂片動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)動(dòng)情周期,在動(dòng)情期對(duì)大鼠進(jìn)行取材及相應(yīng)指標(biāo)檢測(cè)。

1.5.3.1 腹腔灌洗液VEGF表達(dá)水平檢測(cè)

按Nagelschmidt等[12]報(bào)道的方法,先將3 mL 0.15 mol/L PBS Buffer自左側(cè)腹部注入腹腔,將腹部輕微振蕩2 min后,用注射器自腹腔將灌洗液抽出,離心并收集上清液。采用ELISA法檢測(cè),按照相應(yīng)的試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行操作。

1.5.3.2 血清VEGF表達(dá)水平檢測(cè)

開腹取各組大鼠外周血,離心取血清。采用ELISA法檢測(cè),按照相應(yīng)的試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行操作。

1.5.3.3 異位囊腫大小測(cè)量

大鼠開腹后,找到異位囊腫,用游標(biāo)卡尺測(cè)量并記錄最大直徑。

1.5.3.4 組織VEGF表達(dá)水平檢測(cè)

取子宮組織、異位內(nèi)膜組織置于10%中性緩沖福爾馬林溶液中固定,脫水,石蠟包埋,3mm連續(xù)切片,采用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)組織片中VEGF含量。VEGF主要表達(dá)于子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞及血管內(nèi)皮細(xì)胞的細(xì)胞漿中,以間質(zhì)細(xì)胞或血管內(nèi)皮細(xì)胞胞漿呈棕黃色為陽(yáng)性。免疫組化陽(yáng)性判定方法參照Donnez等[13]的報(bào)道并予以改進(jìn),采用盲法,3名研究者(病理醫(yī)生)分別完成,任取連續(xù)5個(gè)高倍(×400)視野計(jì)數(shù)陽(yáng)性細(xì)胞百分比,取平均值,判定該組織片VEGF表達(dá)陽(yáng)性強(qiáng)度。設(shè)定3個(gè)評(píng)分等級(jí),陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)≤25%為弱陽(yáng)性,陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)26%～50%為陽(yáng)性,陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)＞50%為強(qiáng)陽(yáng)性。

1.5.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

各組異位囊腫最大直徑,血清及腹腔灌洗液中VEGF水平比較,采用方差分析;各組組織中VEGF陽(yáng)性強(qiáng)度比較,采用卡方檢驗(yàn)或’確切概率法。采用SPSS16.0,以≤0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果與分析

2.1 各組異位囊腫大小比較

假手術(shù)組未見(jiàn)異位囊腫,模型組異位囊腫最大直徑[(4.950±0.268)mm]顯著大于其他各組(＜0.01),針?biāo)幗M[(1.760±0.317)mm]顯著小于模型組、針灸組[(3.290±0.166)mm]和中藥組[(3.480±0.148)mm] (＜0.01)。異位囊腫大小可直接指示內(nèi)異癥的治療情況,本研究采用異位囊腫最大直徑衡量其大小,結(jié)果提示針灸、中藥和針?biāo)幣浜蠈?duì)大鼠EMs有一定的治療效應(yīng),其中針?biāo)幣浜闲Ч麅?yōu)于單純針灸或中藥。詳見(jiàn)圖1。

2.2 在位內(nèi)膜和異位內(nèi)膜組織病理學(xué)觀察

假手術(shù)組子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞排列整齊,呈柱狀或立方狀,胞漿豐富,間質(zhì)豐厚,間質(zhì)細(xì)胞多,可見(jiàn)腺腔,腺上皮細(xì)胞呈柱狀或立方狀,內(nèi)膜腺體彎曲擴(kuò)張;模型組異位內(nèi)膜上皮細(xì)胞呈高柱狀,腺體彎曲擴(kuò)張或無(wú)腺體,間質(zhì)致密,血管豐富;針灸組和中藥組異位內(nèi)膜上皮細(xì)胞排列雜亂或略整齊,呈柱狀或立方狀,間質(zhì)疏松,間質(zhì)細(xì)胞較少,無(wú)腺體,血管較少;針?biāo)幗M異位內(nèi)膜趨于萎縮,上皮細(xì)胞排列稀疏,部分細(xì)胞壞死,間質(zhì)疏松,間質(zhì)細(xì)胞較少,無(wú)腺體,血管較少。

圖1 各組大鼠異位囊腫最大直徑比較(Mean±2SD)

2.3 組織中VEGF蛋白表達(dá)

VEGF在子宮內(nèi)膜組織中主要表達(dá)于子宮內(nèi)膜間質(zhì)血管內(nèi)皮細(xì)胞胞漿。免疫組化結(jié)果顯示,假手術(shù)組子宮內(nèi)膜組織中VEGF表達(dá)呈弱陽(yáng)性;模型組異位內(nèi)膜組織鏡下可見(jiàn)大量毛細(xì)血管,血管內(nèi)皮細(xì)胞VEGF表達(dá)呈強(qiáng)陽(yáng)性。異位內(nèi)膜組織中VEGF蛋白表達(dá),模型組20%(2/10)呈陽(yáng)性、80%(8/10)呈強(qiáng)陽(yáng)性,針灸組60%(6/10)呈弱陽(yáng)性、40%(4/10)呈陽(yáng)性,中藥組50%(5/10)呈弱陽(yáng)性、50%(5/10)呈陽(yáng)性,針?biāo)幗M100%(10/10)呈弱陽(yáng)性。模型組異位內(nèi)膜組織VEGF陽(yáng)性強(qiáng)度高于其余各組(＜0.01);針?biāo)幗M與針灸組比較異位內(nèi)膜組織VEGF陽(yáng)性強(qiáng)度無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(=0.087),針?biāo)幗M異位內(nèi)膜組織VEGF陽(yáng)性強(qiáng)度低于中藥組(=0.033)。詳見(jiàn)表1、圖2,箭頭處為陽(yáng)性表達(dá)細(xì)胞。

表1 大鼠子宮內(nèi)膜與異位內(nèi)膜組織中VEGF蛋白表達(dá)的比較 [n(%)]

注:與模型組比較1)＜0.01,與中藥組比較2)＜0.05

2.4 腹腔灌洗液中VEGF蛋白水平

模型組大鼠腹腔灌洗液中VEGF含量[(6.314±0.212)ng/mL]明顯高于其他各組(＜0.01),針?biāo)幗M[(6.444±0.279)ng/mL]明顯低于模型組、針灸組[(8.425±0.146)ng/mL]和中藥組[(8.259± 0.243)ng/mL](＜0.01)。結(jié)果提示EMs大鼠腹腔灌洗液中VEGF濃度異常升高,針灸、中藥和針?biāo)幣浜暇上抡{(diào)EMs大鼠腹腔灌洗液中異常升高的VEGF濃度,其中針?biāo)幗Y(jié)合效果優(yōu)于單純應(yīng)用針灸或中藥。詳見(jiàn)表2。

2.5 血清中VEGF蛋白水平

采用ELISA法測(cè)定各組大鼠血清中VEGF含量,結(jié)果測(cè)定的濃度值為負(fù)值,無(wú)法統(tǒng)計(jì)比較。分析可能由于大鼠血清中的VEGF濃度較低,EMs大鼠血清中VEGF的含量并未升高。

表2 各組大鼠腹腔灌洗液VEGF含量比較 (±s,ng/mL)

注:與假手術(shù)組比較1)＜0.01;與模型組比較2)＜0.01;與針灸組比較3)＜0.01;與中藥組比較4)＜0.01

圖2 大鼠子宮內(nèi)膜與異位內(nèi)膜組織VEGF表達(dá)(IHC×400)

3 討論

中醫(yī)學(xué)將子宮內(nèi)膜異位癥歸為“痛經(jīng)”、“癥瘕”、“月經(jīng)不調(diào)”、“不孕”的范疇,病因病機(jī)多責(zé)之于血瘀,在治療上取得了一定的成效。針灸和中藥是中醫(yī)學(xué)的傳統(tǒng)治療手段,多年來(lái)廣泛應(yīng)用于對(duì)本病的治療中。臨床資料顯示,針灸對(duì)EMs的療效明顯,目前多采用針刺[14]、溫通藥灸[15]、穴位敷貼[16]、針灸并用[17]、穴位注射加隔藥餅灸[18]、針?biāo)幉⒂肹5]等治療方法,臨床多選用血海、三陰交等為主穴,血海為足太陰脾經(jīng)腧穴,具有調(diào)經(jīng)統(tǒng)血的作用,是治療婦科疾病的要穴;三陰交為足三陰經(jīng)交會(huì)穴,可以調(diào)氣活血,疏經(jīng)止痛,而本病的發(fā)病與肝、脾、腎三臟密切相關(guān),故乃治療主穴;關(guān)元系足三陰、陽(yáng)明、任脈、沖脈之會(huì),任沖二脈皆起于胞宮,任脈為“陰脈之?！?沖脈為“血?！?該穴又位于臍下三寸,鄰近胞宮,故亦為治療EMs之要穴。上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬岳陽(yáng)中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院朱氏婦科長(zhǎng)期運(yùn)用“加味沒(méi)竭片”治療EMs,具有活血化瘀,破氣行滯,消積定痛的功效,積累了大量的臨床經(jīng)驗(yàn)[19]。但是針灸與中藥治療EMs其效應(yīng)機(jī)制尚未闡明,且臨床研究多局限于針灸或中藥單一的治療方法,較少將兩者結(jié)合進(jìn)行研究。

異位囊腫形成是大鼠EMs的主要表現(xiàn),異位囊腫的大小直接指示EMs的病理狀態(tài),對(duì)于療效的判定,亦是比較客觀的證據(jù)[20]。本研究選取異位囊腫最大直徑的測(cè)量結(jié)果對(duì)治療效應(yīng)進(jìn)行評(píng)判,結(jié)果證實(shí),經(jīng)針?biāo)幣浜现委煹腅Ms大鼠,其異位囊腫最大直徑較模型組、針灸組、中藥組明顯減小,提示針?biāo)幣浜峡捎行p小異位囊腫大小,且該作用優(yōu)于單純應(yīng)用針灸或中藥。通過(guò)組織病理學(xué)觀察亦證實(shí)針?biāo)幗Y(jié)合具有延緩EMs異位組織細(xì)胞生長(zhǎng),促進(jìn)異位組織萎縮的效應(yīng)。

在EMs的形成與發(fā)展中,VEGF的含量增高,在自分泌和旁分泌的共同作用下,刺激毛細(xì)血管增生,為異位生長(zhǎng)的腺上皮細(xì)胞提供賴以生存的物質(zhì)基礎(chǔ),促進(jìn)異位內(nèi)膜增殖和浸潤(rùn)入盆腔和腹腔內(nèi)組織,形成盆腔和腹腔的異位灶[21-22]。有研究顯示[23],VEGFs和NRPs等生長(zhǎng)因子及其受體表達(dá)的失調(diào)可能導(dǎo)致EMs血管生成、淋巴管生成、神經(jīng)與免疫功能的改變。EMs組織中血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子C表達(dá)增加,可增強(qiáng)內(nèi)皮功能,增加血管通透性,促進(jìn)血管生成和異位組織生長(zhǎng)[24]。朱虹等[25]研究顯示,盆腔外EMs、卵巢EMs的異位內(nèi)膜中存在VEGF的高表達(dá),可能導(dǎo)致了血管生成,利于種植及生長(zhǎng),可能成為EMs早期診斷的指標(biāo)。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)[26],在人子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞與裸小鼠的腹膜間皮細(xì)胞黏附的第1天,小鼠子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞已有VEGF mRNA的表達(dá)。這說(shuō)明子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞分泌的VEGF很可能是異位病灶中最早的促血管生成因子。

本研究選取VEGF從新生血管形成的組織發(fā)生機(jī)理角度,分別從組織本身和腹腔微環(huán)境,評(píng)估異位內(nèi)膜組織血管形成作用。結(jié)果證實(shí),假手術(shù)大鼠在位內(nèi)膜中血管較少,間質(zhì)細(xì)胞或血管內(nèi)皮細(xì)胞VEGF呈弱陽(yáng)性表達(dá),腹腔灌洗液中VEGF含量較低;EMs模型大鼠異位內(nèi)膜組織中血管較為豐富,間質(zhì)細(xì)胞或血管內(nèi)皮細(xì)胞中VEGF呈強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá),有大量新生血管,腹腔灌洗液中VEGF含量異常升高,這就促進(jìn)了異位組織的血供,有利于異位組織的進(jìn)一步生長(zhǎng),這與張旭賓等[27]研究報(bào)道一致。而針灸組、中藥組和針?biāo)幗M異位內(nèi)膜組織VEGF呈弱陽(yáng)性或陽(yáng)性表達(dá),腹腔灌洗液中VEGF含量較低,尤其是針?biāo)幗M含量趨近于假手術(shù)組,且異位內(nèi)膜組織中VEGF表達(dá)強(qiáng)度低于中藥組,提示針?biāo)幗Y(jié)合對(duì)EMs大鼠異位內(nèi)膜組織血管形成具有較好的抑制作用,使得提供異位組織生長(zhǎng)的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)相對(duì)減少,考慮這也是導(dǎo)致針?biāo)幗M異位囊腫縮小、異位內(nèi)膜組織萎縮的可能原因。

本研究結(jié)合VEGF在EMs發(fā)病中的作用,及針?biāo)幗Y(jié)合治療大鼠EMs的療效觀察,分析針?biāo)幣浜习l(fā)揮療效可能是通過(guò)下調(diào)異位內(nèi)膜組織及腹腔微環(huán)境中VEGF蛋白的表達(dá),從而削弱異位內(nèi)膜血管形成作用,減少局部的營(yíng)養(yǎng)供應(yīng),進(jìn)而達(dá)到治療大鼠EMs的效應(yīng)。推測(cè)下調(diào)異位內(nèi)膜組織和腹腔微環(huán)境中VEGF蛋白的表達(dá)是針?biāo)幣浜现委煷笫驟Ms的可能機(jī)制之一。對(duì)于針?biāo)幗Y(jié)合對(duì)異位組織中VEGF蛋白表達(dá)的調(diào)節(jié)作用,目前尚未見(jiàn)相關(guān)報(bào)道。但VEGF促進(jìn)血管形成的始動(dòng)因素是什么,如何更有效地控制血管形成,減少異位組織血供,將異位組織扼殺?這些均有待于進(jìn)一步研究探索。

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Effect of Combined Acupuncture and Medicine on the Expression of Vascular Endothelial Growth Factor in Endometriosis Rats

-1,-2,-1,1,1,-1.

1.,,200437,; 2.,200030,

To investigate the effect of acupuncture combined with Jiawei Mojie Pian on the expression of vascular endothelial growth factor (VEGF) in endometriosis (EMs) rats and explore the mechanism of action of combined acupuncture and Chinese herbal medicine in treating endometriosis.A rat model of EMs was made. The rats were were randomly allocated to model, acupuncture, Chinese herbal medicine and acupuncture plus medicine groups. A sham operation group was set up. The acupuncture group received electroacupuncture at Xuehai (SP10) and Sanyinjiao (SP6) and moxibustion on Guanyuan (CV4); the Chinese herbal medicine group, an oral gavage of a suspension of Jiawei Mojie Pian in normal saline; the acupuncture plus medicine group, a combined treatment with the above two methods. The sham operation and model groups were bound and fixed, and given an oral gavage of normal saline.The peritoneal lavage fluid and serum were taken after 30 days of treatment. VEGF levels were measured by ELISA. The maximum diameter of ectopic cyst was determined. The ectopic tissue was taken for histopathological observation. The protein level of tissue VEGF was measured by immunohistochemical method.The maximum diameter of ectopic cyst was significantly shorter in the acupuncture plus medicine group than in the model, acupuncture and Chinese herbal medicine groups (＜0.01). Ectopic endometrium grew vigorously in the model group. The endometrium tended to atrophy and part of the epithelial cells became necrosis in the acupuncture plus medicine group. The expression of VEGF in the peritoneal lavage fluid and ectopic tissue was significantly higher in the model group than in the other groups. The expression of VEGF in the peritoneal lavage fluid was significantly lower in the acupuncture plus medicine group than in the model, Chinese herbal medicine and acupuncture groups (＜0.01). The expression of VEGF in the ectopic tissue was significantly lower in the acupuncture plus medicine group than in the model and Chinese herbal medicine groups (＜0.01 and＜0.05, respectively).The occurrence of EMs in rats is related to VEGF levels in the lesion and abdominal cavity microenvironment. Combined acupuncture and medicine can reduce the size of ectopic endometrium tissue and down-regulate the abnormally increased expression of VEGF protein in the ectopic tissue and peritoneal fluid in EMs rats.

Combined use of acupuncture and medicine; Rats; Endometriosis; Vascular endothelial growth factor

1005-0957(2014)08-0764-05

R2-03

A

10.13460/j.issn.1005-0957.2014.08.0764

2014-03-20

上海市自然科學(xué)基金項(xiàng)目(13ZR1442800);上海市衛(wèi)生局中醫(yī)藥科研基金項(xiàng)目(2012QL006A)

張春雁(1981 - ),女,主治醫(yī)師,上海中醫(yī)藥大學(xué)2011級(jí)博士生

陳云飛(1968 - ),男,研究員,Email:icyf1968@163.com