UV法測(cè)定清潔驗(yàn)證中殘留物依帕司他的含量

楊玉琴 季洪英 洪麗萍 黃加秀 李競(jìng)梅 包衛(wèi)國(guó)

依帕司他為醛糖還原酶抑制藥, 以可逆地抑制與糖尿病性并發(fā)癥的發(fā)病機(jī)制相關(guān)的多元醇代謝中葡萄糖轉(zhuǎn)化為山梨醇的醛糖還原酶而發(fā)揮作用, 其制劑唐林(依帕司他片)是本公司生產(chǎn)的主打暢銷品種, 由于其對(duì)糖尿病神經(jīng)性病變的治療中的顯著療效而受到廣大患者的一致好評(píng)。本文主要圍繞依帕司他清潔驗(yàn)證中的殘留物開(kāi)展研究, 本文參考藥典方法［1］對(duì)主活性成分依帕司他的定量分析進(jìn)行了研究和驗(yàn)證,結(jié)果表明UV法簡(jiǎn)便, 準(zhǔn)確, 可以用于依帕司他的定量分析。

根據(jù)擦拭取樣的殘留量、設(shè)備中的總殘留限度、設(shè)備總內(nèi)表面積計(jì)算得出依帕司他的殘留量LD值為5.3 μg/cm2,試驗(yàn)中模擬設(shè)備材質(zhì)的平板面積為100 cm2, 取樣回收率為100%, 換算為理論取樣量為530 μg, 于50 ml量瓶中以無(wú)水乙醇溶解并稀釋至刻度, 得到濃度約為10.6 μg/ml的溶液, 作者以此濃度開(kāi)展相關(guān)研究和驗(yàn)證。

1 儀器與試藥

瑞士Mettler Toledo XP205 電子分析天平, 美國(guó)Agilent8453紫外分光光度計(jì)等。

依帕司他對(duì)照品(批號(hào)為：100618-200401)購(gòu)于中國(guó)藥品生物制品檢定所, 試劑均為分析純, 水為超純水。

2 方法與結(jié)果

2.1 紫外條件與方法 石英比色池規(guī)格：1 cm；檢測(cè)波長(zhǎng)：292 nm；溶劑：無(wú)水甲醇；狹縫寬度：1.0 nm。

2.2 對(duì)照品溶液的配制 精密稱取依帕司他對(duì)照品適量,加流動(dòng)相溶解制成每1 ml含265 μg的對(duì)照品貯備液。

2.3 線性關(guān)系試驗(yàn) 分別精密吸取上述對(duì)照品貯備液適量,用無(wú)水乙醇稀釋制成濃度分別為：2.6 μg/ml、5.3 μg/ml、10.6 μg/ml、21.2 μg/ml、26.5 μg/ml、53 μg/ml的溶液 , 分別在 292 nm的波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度, 平行試驗(yàn)兩份, 建立標(biāo)準(zhǔn)曲線, 以依帕司他濃度為橫坐標(biāo)(X), 其吸光度值為縱坐標(biāo)(Y), 得回歸方程為： Y=0.0358X-0.0061 相關(guān)系數(shù)r=1.0000.

結(jié)果表明依帕司他在 2.67 μg/ml～53.74 μg/ml范圍內(nèi) , 依帕司他對(duì)照品溶液濃度和其吸光度值具有良好的線性關(guān)系。2.4 檢測(cè)限(LOD)和定量限(LOQ) 以無(wú)水乙醇的空白溶液校零后, 測(cè)定空白的吸光度值11次, 對(duì)11次的結(jié)果求標(biāo)準(zhǔn)偏差值, 作為背景噪音。檢測(cè)限對(duì)應(yīng)的信噪比為3:1, 定量限對(duì)應(yīng)的信噪比為10:1, 將所得結(jié)果與線性關(guān)系試驗(yàn)中所得標(biāo)準(zhǔn)曲線的斜率相除即得檢測(cè)限和定量限, UV法測(cè)定依帕司他的檢測(cè)限 (LOD)為 ：0.013 μg/ml, 定量限 (LOQ)為 0.044 μg/ml。

2.5 精密度試驗(yàn) 取濃度為10.608 μg/ml的依帕司他對(duì)照品溶液, 按樣品測(cè)定項(xiàng)下方法操作, 重復(fù)測(cè)定6次, 結(jié)果依帕司他的吸光度的均值為0.37653, RSD值為0.1%, 表明該方法精密度良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取濃度為10.808 μg /ml的供試品溶液,按樣品測(cè)定項(xiàng)下方法在25℃下放置考察, 在放置0、2、4、6、8 h后分別測(cè)定一次, 共測(cè)定5次, 5次吸光度值的RSD值為1.0%, 表明供試品溶液在8h內(nèi)穩(wěn)定。

2.7 重復(fù)性試驗(yàn) 取批號(hào)為13070111的樣品, 按照“2.9”項(xiàng)下方法制備6份供試液, 結(jié)果依帕司他含量均值為100.40%,RSD為0.3%。

2.8 加樣回收率試驗(yàn) 采用加樣回收法。計(jì)算得平均回收率為99.60%, RSD為0.2%, 結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果(n=6)

2.9 樣品含量測(cè)定 取本品, 精密稱定適量, 置100 ml量瓶中, 加無(wú)水乙醇振搖使依帕司他溶解并稀釋至刻度, 搖勻,再精密量取2 ml, 置50 ml量瓶中, 加無(wú)水乙醇稀釋制成每1ml溶液中約含10.6 μg的溶液, 作為供試品溶液。

3 小結(jié)

上述試驗(yàn)的驗(yàn)證結(jié)果表明UV法測(cè)定依帕司他清潔驗(yàn)證中的殘留物依帕司他的含量可行, 該方法可用于依帕司他的定量分析。分別選取不同廠家和不同種類的溶劑作為擦拭溶劑, 結(jié)果選擇無(wú)水乙醇為擦拭溶劑較適宜, 因?yàn)橐琅了舅跓o(wú)水乙醇中溶解完全, 且無(wú)水乙醇為揮發(fā)性溶劑, 可以在將殘留物依帕司他擦拭完全的同時(shí)有效減少溶劑殘留。

［1］ 國(guó)家藥典委員會(huì)、中國(guó)藥典(二部) .北京：化學(xué)工業(yè)出版社,2010.